本文關鍵詞：microRNA-195對心肌成纖維細胞增殖及向成肌纖維細胞分化的調(diào)控作用

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【摘要】：目的:觀察mi R-195在心肌纖維化(cardiac fibrosis)中的預防性治療作用,并進一步研究mi R-195是否通過Chek1激活心肌成纖維細胞(CF)的增殖及向成肌纖維細胞(CMF)的分化,以探討mi R-195在心肌纖維化中的作用機制。方法:(一)提取心肌成纖維細胞:1.取1-3天新生SD大鼠心臟置于胰膠原酶溶液中反復消化,收集細胞差速貼壁3小時后獲得相對較純的心肌成纖維細胞,此為P0代,第二天將P0代1:3傳代,此為P1代,以后每4天傳代;2.應用Real-time PCR、蛋白質印跡法、免疫熒光檢測成肌纖維細胞特異表達蛋白a-SMA的表達量標記分化。(二)Mi R-195在心肌成纖維細胞增殖及分化中的作用機制:1.采用Real-time PCR檢測mi R-195在P1、P2、P3代細胞中的表達量;2.Mi R-195的激動劑agomir或抑制劑antagomir轉染P1代細胞,48小時后用Real-time PCR檢測mi R-195的表達評價轉染效率,Real-time PCR、蛋白質印跡法、免疫熒光檢測a-SMA的表達量,免疫熒光檢測EDU、Ki67的陽性率、蛋白質印跡法檢測PCNA標記細胞增殖,Real-time PCR檢測細胞周期基因Chek1、Cdc2a、Birc5、Nusap1、Spag5的表達量,蛋白質印跡法檢測Chek1的表達量。(三)Chek1對心肌成纖維細胞增殖及分化的調(diào)控作用:用Chek1的干擾RNA-si RChek1轉染P1代細胞,72小時后Real-time PCR檢測Chek1的表達量以評價干擾效率,Real-time PCR、免疫熒光檢測a-SMA的表達量,免疫熒光檢測EDU的陽性率。(四)計數(shù)資料采用均數(shù)±標準差(x±s)表示,各組間樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析,p㩳0.05認為有統(tǒng)計學意義。全部數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理,用Graph Pad Prism 5做圖。結果:(一)新生SD大鼠心肌成纖維細胞向成肌纖維細胞分化:成肌纖維細胞的特異性表達蛋白a-SMA在P2、P3代的表達量均高于P1代(p值均0.05)。(二)mi R-195抑制心肌成纖維細胞增殖及分化:1.Mi R-195的表達量隨細胞傳代次數(shù)增加而升高,在P3代的表達量顯著升高(p值均0.05);2.激動劑轉染細胞后mi R-195的表達量升高(p值均0.05),抑制劑轉染細胞后mi R-195的表達下降(p值均0.05);3.高表達mi R-195后EDU、Ki67的陽性率及PCNA、a-SMA的表達量降低,降低mi R-195后EDU、Ki67的陽性率及PCNA、a-SMA的表達量升高,差異均有統(tǒng)計學意義(p0.05);4.Mi R-195負向調(diào)節(jié)細胞周期基因Chek1,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。(三)Mi R-195通過Chek1調(diào)控心肌成纖維細胞的增殖及分化:1.Si RChek1轉染細胞后Chek1的表達量明顯低于對照組(p值均0.05)。2.EDU的陽性率、a-SMA的表達量在si RChek1組、mi R-195 antagomir與si RChek1共轉染組均明顯低于對照組(p值均0.05),而si RChek1組與共轉染組間無統(tǒng)計學差異。結論:Mi R-195表達量的上調(diào)可能是抑制心肌成纖維細胞增殖以及向成肌纖維細胞分化的分子機制之一,該效應主要是通過負向調(diào)節(jié)細胞周期基因Chek1實現(xiàn)的。
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R542.23

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9 黃威;柳大烈;崔興華;李玉霞;;胎兔皮膚創(chuàng)傷愈合中成肌纖維細胞的表達[J];沈陽部隊醫(yī)藥;2000年06期

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1 王秀芝;microRNA-195對心肌成纖維細胞增殖及向成肌纖維細胞分化的調(diào)控作用[D];南京醫(yī)科大學;2015年

2 王媛;基底應力松弛對不同分化階段成肌纖維細胞分化的影響[D];重慶大學;2009年

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本文編號：1204904