本文關(guān)鍵詞：microRNA-195對心肌成纖維細(xì)胞增殖及向成肌纖維細(xì)胞分化的調(diào)控作用

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【摘要】：目的:觀察mi R-195在心肌纖維化(cardiac fibrosis)中的預(yù)防性治療作用,并進(jìn)一步研究mi R-195是否通過Chek1激活心肌成纖維細(xì)胞(CF)的增殖及向成肌纖維細(xì)胞(CMF)的分化,以探討mi R-195在心肌纖維化中的作用機(jī)制。方法:(一)提取心肌成纖維細(xì)胞:1.取1-3天新生SD大鼠心臟置于胰膠原酶溶液中反復(fù)消化,收集細(xì)胞差速貼壁3小時后獲得相對較純的心肌成纖維細(xì)胞,此為P0代,第二天將P0代1:3傳代,此為P1代,以后每4天傳代;2.應(yīng)用Real-time PCR、蛋白質(zhì)印跡法、免疫熒光檢測成肌纖維細(xì)胞特異表達(dá)蛋白a-SMA的表達(dá)量標(biāo)記分化。(二)Mi R-195在心肌成纖維細(xì)胞增殖及分化中的作用機(jī)制:1.采用Real-time PCR檢測mi R-195在P1、P2、P3代細(xì)胞中的表達(dá)量;2.Mi R-195的激動劑agomir或抑制劑antagomir轉(zhuǎn)染P1代細(xì)胞,48小時后用Real-time PCR檢測mi R-195的表達(dá)評價轉(zhuǎn)染效率,Real-time PCR、蛋白質(zhì)印跡法、免疫熒光檢測a-SMA的表達(dá)量,免疫熒光檢測EDU、Ki67的陽性率、蛋白質(zhì)印跡法檢測PCNA標(biāo)記細(xì)胞增殖,Real-time PCR檢測細(xì)胞周期基因Chek1、Cdc2a、Birc5、Nusap1、Spag5的表達(dá)量,蛋白質(zhì)印跡法檢測Chek1的表達(dá)量。(三)Chek1對心肌成纖維細(xì)胞增殖及分化的調(diào)控作用:用Chek1的干擾RNA-si RChek1轉(zhuǎn)染P1代細(xì)胞,72小時后Real-time PCR檢測Chek1的表達(dá)量以評價干擾效率,Real-time PCR、免疫熒光檢測a-SMA的表達(dá)量,免疫熒光檢測EDU的陽性率。(四)計數(shù)資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,各組間樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析,p㩳0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。全部數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,用Graph Pad Prism 5做圖。結(jié)果:(一)新生SD大鼠心肌成纖維細(xì)胞向成肌纖維細(xì)胞分化:成肌纖維細(xì)胞的特異性表達(dá)蛋白a-SMA在P2、P3代的表達(dá)量均高于P1代(p值均0.05)。(二)mi R-195抑制心肌成纖維細(xì)胞增殖及分化:1.Mi R-195的表達(dá)量隨細(xì)胞傳代次數(shù)增加而升高,在P3代的表達(dá)量顯著升高(p值均0.05);2.激動劑轉(zhuǎn)染細(xì)胞后mi R-195的表達(dá)量升高(p值均0.05),抑制劑轉(zhuǎn)染細(xì)胞后mi R-195的表達(dá)下降(p值均0.05);3.高表達(dá)mi R-195后EDU、Ki67的陽性率及PCNA、a-SMA的表達(dá)量降低,降低mi R-195后EDU、Ki67的陽性率及PCNA、a-SMA的表達(dá)量升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);4.Mi R-195負(fù)向調(diào)節(jié)細(xì)胞周期基因Chek1,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。(三)Mi R-195通過Chek1調(diào)控心肌成纖維細(xì)胞的增殖及分化:1.Si RChek1轉(zhuǎn)染細(xì)胞后Chek1的表達(dá)量明顯低于對照組(p值均0.05)。2.EDU的陽性率、a-SMA的表達(dá)量在si RChek1組、mi R-195 antagomir與si RChek1共轉(zhuǎn)染組均明顯低于對照組(p值均0.05),而si RChek1組與共轉(zhuǎn)染組間無統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論:Mi R-195表達(dá)量的上調(diào)可能是抑制心肌成纖維細(xì)胞增殖以及向成肌纖維細(xì)胞分化的分子機(jī)制之一,該效應(yīng)主要是通過負(fù)向調(diào)節(jié)細(xì)胞周期基因Chek1實現(xiàn)的。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R542.23

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2 蔣永亮,戴愛國;成肌纖維細(xì)胞與肺部疾病[J];國外醫(yī)學(xué).呼吸系統(tǒng)分冊;2004年03期

3 羅寧;程忠平;;成肌纖維細(xì)胞分化過程中肌動蛋白細(xì)胞骨架的形成及其作用[J];醫(yī)學(xué)綜述;2013年07期

4 沙莉;成肌纖維細(xì)胞與哮喘[J];國外醫(yī)學(xué).呼吸系統(tǒng)分冊;2001年02期

5 陳建華,洪華山,江瓊,王一波,鄭關(guān)毅,陳良龍;兔心臟成肌纖維細(xì)胞的培養(yǎng)及其表型[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2005年01期

6 黃海長,李驚子,王海燕;結(jié)締組織生長因子誘導(dǎo)腎成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)為成肌纖維細(xì)胞[J];科學(xué)通報;2002年01期

7 高緒霞;黃海長;李曉玫;;成肌纖維細(xì)胞在纖維化過程中的作用及其調(diào)控[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2007年01期

8 樊勇勝,馬樹林,閆素英;磷脂酶A_2和成肌纖維細(xì)胞在哮喘發(fā)病機(jī)制中的作用[J];醫(yī)學(xué)綜述;2003年05期

9 黃威;柳大烈;崔興華;李玉霞;;胎兔皮膚創(chuàng)傷愈合中成肌纖維細(xì)胞的表達(dá)[J];沈陽部隊醫(yī)藥;2000年06期

10 宋輝;王明席;許瑞安;;纖溶酶系統(tǒng)在成肌纖維細(xì)胞凋亡、組織纖維化過程中的作用[J];中國藥理學(xué)通報;2012年06期

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1 黃豈平;方咸平;王媛;楊杰;陳國寶;;基底應(yīng)變狀態(tài)的改變對成肌纖維細(xì)胞分化的影響[A];第九屆全國生物力學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

2 楊敏;黃海長;李驚子;王海燕;;結(jié)締組織生長因子增強(qiáng)轉(zhuǎn)化生長因子β_1促成肌纖維細(xì)胞生成的分子機(jī)理研究[A];“中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2004年年會”暨“第二屆全國中青年腎臟病學(xué)術(shù)會議”論文匯編[C];2004年

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1 王秀芝;microRNA-195對心肌成纖維細(xì)胞增殖及向成肌纖維細(xì)胞分化的調(diào)控作用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

2 王媛;基底應(yīng)力松弛對不同分化階段成肌纖維細(xì)胞分化的影響[D];重慶大學(xué);2009年

3 楊杰;肝星狀細(xì)胞的分離與細(xì)胞損傷對成肌纖維細(xì)胞形態(tài)和極性轉(zhuǎn)變的影響[D];重慶大學(xué);2010年

4 蔣永亮;成纖維細(xì)胞分化為成肌纖維細(xì)胞初步機(jī)理探討及對缺氧性肺動脈高壓的作用[D];南華大學(xué);2005年

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本文編號：1204904