本文關(guān)鍵詞：BVES對P19CL6心肌細(xì)胞分化和增殖作用的機(jī)制研究

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【摘要】：目的:探討B(tài)VES對P19CL6心肌細(xì)胞分化及增殖的作用及其機(jī)制,為先天性心臟病的發(fā)病機(jī)制奠定一定的理論基礎(chǔ)。方法:實(shí)驗(yàn)采用P19Cl6細(xì)胞體外心肌細(xì)胞分化模型、1%DMSO可誘導(dǎo)其分化為成熟跳動(dòng)的心肌細(xì)胞。含BVES基因片段的質(zhì)粒過表達(dá)P19CL6細(xì)胞上調(diào)內(nèi)源性BVES表達(dá),BVES特異性si RNA轉(zhuǎn)染P19CL6細(xì)胞沉默內(nèi)源性BVES表達(dá)。q RT-PCR實(shí)驗(yàn)定量檢測轉(zhuǎn)錄因子(Gata4、Nkx2.5、Tbx5)、心臟基因(MYH6、MYL7)、目的基因BVES和Rho A的m RNA表達(dá)水平,western blotting定量檢測心肌肌鈣蛋白(c Tn T)蛋白水平表達(dá),免疫熒光檢測心肌骨架蛋白MF20和Actinin蛋白水平表達(dá)。CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞數(shù)量、Ed U實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞DNA合成、細(xì)胞流式檢測細(xì)胞周期。結(jié)果:成功構(gòu)建P19CL6細(xì)胞體外心肌細(xì)胞分化模型,P19CL6細(xì)胞在含1%DMSO培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化12天后,免疫熒光染色顯示心肌細(xì)胞骨架蛋白Actinin陽性細(xì)胞明顯增多,q RT-PCR顯示心臟轉(zhuǎn)錄因子(Gata4、Nkx2.5、Tbx5)及心臟基因(MYL7、MYH6)的m RNA表達(dá)在P19CL6心肌細(xì)胞分化過程表達(dá)逐漸升高。BVES表達(dá)在P19CL6細(xì)胞心肌細(xì)胞分化過程被誘導(dǎo)表達(dá)。BVES質(zhì)�？缮险{(diào)P19CL6細(xì)胞內(nèi)源性BVES蛋白和m RNA表達(dá),BVES特異性si RNA可有效抑制P19CL6細(xì)胞內(nèi)源性BVES蛋白和m RNA表達(dá)。免疫熒光染色結(jié)果顯示過表達(dá)BVES可減少P19CL6心肌細(xì)胞分化數(shù)量,q RT-PCR結(jié)果顯示過表達(dá)BVES抑制P19CL6心肌分化轉(zhuǎn)錄因子(Gata4、Nkx2.5、Tbx5)及心臟基因(MYL7、MYH6)m RNA表達(dá),western blotting結(jié)果顯示過表達(dá)BVES抑制心肌細(xì)胞分化晚期心肌肌鈣蛋白(c Tn T)蛋白表達(dá)。免疫熒光染色結(jié)果顯示沉默BVES表達(dá)可增加P19CL6向心肌細(xì)胞分化數(shù)量,q RT-PCR結(jié)果顯示沉默BVES促進(jìn)P19CL6心肌分化心臟基因(MYL7、MYH6)m RNA表達(dá),但對P19CL6心肌細(xì)胞分化過程心臟轉(zhuǎn)錄因子(Gata4、Nkx2.5、Tbx5)表達(dá)無影響,western blotting結(jié)果顯示沉默BVES表達(dá)可促進(jìn)分化晚期心肌肌鈣蛋白(c Tn T)蛋白表達(dá)。流式細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示過表達(dá)BVES可抑制心肌細(xì)胞周期循環(huán)、使心肌細(xì)胞保持在G0/G1期,Ed U結(jié)果顯示過表達(dá)BVES抑制心肌細(xì)胞DNA合成,CCK8結(jié)果顯示過表達(dá)BVES可減少心肌細(xì)胞增殖,但沉默BVES表達(dá)對心肌細(xì)胞周期循環(huán)、DNA合成、細(xì)胞增殖無影響。心肌細(xì)胞過表達(dá)BVES可抑制Rho A表達(dá),沉默BVES可促進(jìn)Rho A表達(dá)。沉默Rho A表達(dá)可逆轉(zhuǎn)BVES調(diào)節(jié)P19CL6心肌細(xì)胞分化效應(yīng),但對BVES調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞增殖效應(yīng)無影響。結(jié)論:BVES在P19CL6細(xì)胞心肌分化過程高表達(dá),BVES負(fù)性調(diào)節(jié)P19CL6心肌細(xì)胞分化和心肌細(xì)胞增殖,且通過Rho A調(diào)節(jié)P19CL6心肌細(xì)胞分化。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R541.1

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6 杜趙康;寸向農(nóng);楊開明;;心肌細(xì)胞分化發(fā)育中細(xì)胞周期的生物學(xué)調(diào)控[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2011年09期

7 閻瀟;李菲菲;劉麗娟;孫仙蕊;張?jiān)?劉文;姚如永;袁曉;;核轉(zhuǎn)錄因子κB信號通路在應(yīng)力調(diào)控成肌細(xì)胞分化中的作用[J];中國組織工程研究;2012年24期

8 鮑翠玉,郭軍,賈光宏,馬業(yè)新;干細(xì)胞因子對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的影響[J];廣東醫(yī)學(xué);2004年11期

9 林先和,李隆貴;過氧化物酶體增殖物激活受體γ基因轉(zhuǎn)染對小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化影響的研究[J];中華心血管病雜志;2004年07期

10 郭英杰;張奇軍;錢玲梅;孔祥清;曹克將;;P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化過程中FHL1基因的表達(dá)變化[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2008年05期

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4 馮川;SAHA促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化及其作用機(jī)制探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

5 尹青;應(yīng)用不同方法體外誘導(dǎo)P19細(xì)胞心肌細(xì)胞分化的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2006年

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7 劉維新;治療心肌梗死候選細(xì)胞心肌分化潛能與候選基因逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建與鑒定[D];武漢大學(xué);2004年

8 唐美林;黃芩苷促進(jìn)小鼠胚胎干細(xì)胞向功能性心肌細(xì)胞分化及其調(diào)控機(jī)制[D];華中科技大學(xué);2012年

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2 宋成創(chuàng);miR-125a-5p在C2C12細(xì)胞增殖分化中的作用及機(jī)制研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

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7 初志輝;多種方法誘導(dǎo)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2009年

8 郭英杰;FHL1基因與心肌細(xì)胞分化關(guān)系的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2008年

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本文編號：1181309