本文關(guān)鍵詞：芹菜苷對HUVEC高血壓損傷模型作用機制

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【摘要】：本文以芹菜中芹菜苷為研究對象,針對其參與血壓調(diào)節(jié)的途徑與機制等關(guān)鍵問題,探討芹菜苷對HUVEC高血壓損傷模型的修復(fù)和保護情況,通過RT-PCR、Western Blot等技術(shù)研明芹菜苷對血壓調(diào)節(jié)主要信號通路PI3K/Akt、NADPH-ROS的作用,確定芹菜苷在血管內(nèi)皮細胞中發(fā)揮作用的途徑,研明其中機理,為芹菜干預(yù)血壓調(diào)節(jié)的研究提供理論基礎(chǔ)。獲得如下結(jié)果：(1)以人臍靜脈內(nèi)皮細胞為模型載體,采用高血壓發(fā)病相關(guān)因子Ang ⒈、Ang Ⅱ、H202誘導(dǎo)HUVEC建立高血壓損傷模型。通過考察HUVEC形態(tài)變化、細胞活性、細胞損傷程度及細胞功能變化,評價模型的程度。實驗發(fā)現(xiàn),除Ang I正常劑量組(0.1μM)外,其他各誘導(dǎo)劑在各時間點上均可通過促使細胞發(fā)生氧化應(yīng)激,降低細胞活性,減少NO釋放來損傷HUVEC,其中0.1μM的Ang II誘導(dǎo)12 h在不致使細胞死亡情況下,對細胞活性抑制達22.9%,MDA升高至4.89 nmol/mgprot(升高1.7倍),SOD降低至31.62mgprot/mL(降低3倍左右),血管內(nèi)皮細胞功能因子NO釋放降低至32.33 μmol/L(降低1.5倍),eNOS活力降低至0.26 U/mL(降低59倍),ET-1變化不明顯,被選作之后模型的誘導(dǎo)劑,建立損傷模型。(2)40 μM芹菜苷作用于Ang II誘導(dǎo)的HUVEC高血壓損傷模型12 h可以通過促進細胞增殖來增加細胞數(shù)量(上升17.46%)；降低MDA的釋放(由6.34降至1.93nmol/mgprot),增強SOD活性(由31.62升至79.21 mgprot/mL)來減少氧化應(yīng)激的發(fā)生；同時可以增加NO的釋放(由28.82升至48.26 μmol/L),提高eNOS的活性(1.81升至13.63 U/mL),減少ET-1的生成(由10.15降至5.68 ng/L)來提高HUVEC發(fā)揮調(diào)節(jié)血壓的功能,使其功能趨于未誘導(dǎo)前。芹菜苷處于較低濃度(50 μM前)是上述功能隨時間呈現(xiàn)劑量依賴增加的效應(yīng),但隨劑量增加(50μM后)芹菜苷的修復(fù)細胞的的功效反而有所降低。綜合不同劑量芹菜苷作用不同時間的結(jié)果,最終選擇40μM的芹菜苷作用12 h作為后續(xù)研究的對象。(3)芹菜苷發(fā)揮修復(fù)HUVEC高血壓損傷模型細胞內(nèi)皮功能主要是通過激活PI3K/Akt信號通路,抑制NADPH信號通路實現(xiàn)的。通過加入LY294002、羅布麻寧等抑制劑,發(fā)現(xiàn)芹菜苷可以通過PI3K/Akt信號通路顯著激活eNOS使其1177位絲氨酸磷酸化,發(fā)揮釋放NO的作用,這一過程會被NADPH信號通路抑制,說明芹菜苷可以通過抑制NADPH達到增加NO釋放。芹菜苷在模型中發(fā)揮功能時未發(fā)現(xiàn)PI3K/Akt信號通路和NADPH信號通路之間有協(xié)同關(guān)系,說明此過程在血管內(nèi)皮細胞中不發(fā)生或者功效被抵消。
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R544.1

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1 賈佳;謝靜莉;許學(xué)書;;芹菜苷體外活性的研究[J];食品科學(xué);2008年12期

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本文編號：1159535