發(fā)布時間：2017-11-06 23:20

  本文關鍵詞：miR-98靶向Cyclin D2抑制糖尿病大鼠血管內皮細胞增殖的機制

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【摘要】：本論文分兩部：第一部分研究miR-98在2型糖尿病SD大鼠血管內皮細胞增殖中的作用；第二部分研究miR-98下調Cyclin D2表達抑制大鼠主動脈血管內皮細胞(rat vascular aortic endothelial cells,RAOEC)細胞的增殖。一、miR-98在糖尿病SD大鼠血管內皮細胞增殖中的作用通過建立2型糖尿病大鼠模型,利用Real-time PCR檢測miR-98在糖尿病大鼠血管內膜組織中的表達明顯低于正常大鼠組織,推測miR-98在血管內皮細胞增殖中發(fā)揮作用。進一步Western blotting檢測Cyclin D2的表達,其在糖尿病大鼠血管內膜組織中的表達明顯高于正常大鼠組織,與cyclinD2相關的p-Rb表達升高,結果提示,cyclin D2和與其相關的Rb的磷酸化在血管內皮細胞增殖中發(fā)揮重要作用。在細胞水平,MTT檢測高糖處理對RAOEC細胞增殖的影響,結果顯示,高糖處理組細胞的增殖率明顯高于低糖處理組。進一步檢測高糖處理細胞后對細胞周期的影響,與高糖培養(yǎng)基處理組相比,正常組的細胞主要停滯在G1期,而高糖處理組的細胞主要進行分裂增殖。通過Real-time PCR檢測高糖處理細胞后miR-98的表達,高糖處理組miR-98的表達明顯低于低糖處理組(對照組)。進一步Western blotting檢測Cyclin D2和p-Rb在高糖處理組的表達明顯高于低糖處理組,結果顯示,cyclin D2和與其相關的Rb的磷酸化在血管內皮細胞增殖中發(fā)揮重要作用。二、miR-98通過下調Cyclin D2表達抑制RAOEC細胞的增殖構建pcDNA-GFP-cyclin D2-3'UTR的載體,化學合成miR-98及反義寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO-98),共轉染RAOEC細胞,利用熒光倒置顯微鏡和流式細胞術檢測GFP的表達,結果顯示,與對照組相比,轉染miR-98組綠色熒光蛋白(Green Fluorescent Protein, GFP)的表達量顯著下降；MTT檢測轉染miR-98后,細胞的增殖情況,實驗結果顯示,miR-98轉染組細胞增殖受到抑制；進一步檢測miR-98對細胞周期和細胞凋亡的影響,miR-98轉染組的細胞停滯在G1期,促進了血管內皮細胞的凋亡,抑制了細胞的分裂增殖。在細胞水平,Real-time PCR檢測轉染miR-98后,miR-98的含量明顯升高。Western blotting檢測到轉染miR-98后,Cyclin D2口p-Rb的表達明顯低于對照組；另外,抗凋亡基因Bcl-2和NF-KB的表達降低；促凋亡基因BAX和Caspase9勺表達升高,推測miR-98抑制大鼠血管內皮細胞的增殖與上述因子變化有關。綜上所述,Cyclin D2在2型糖尿病大鼠血管內皮細胞增殖中發(fā)揮作用,miR-98通過調節(jié)Cyclin D2的表達抑制大鼠血管內皮細胞的增殖。miR-98也可能通過影響l-2、NF-KB、BAX、Caspase9的表達抑制大鼠血管內皮細胞的增殖。
【學位授予單位】：濱州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R587.2;R54

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 宋俊敏,徐冬,范爾進,徐世榮,李董,趙春華;慢性粒細胞白血病cyclin D2基因的表達研究[J];中華血液學雜志;2004年02期

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2 宋俊敏;慢性粒細胞白血病cyclin D2 的表達研究[D];河北醫(yī)科大學;2002年

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本文編號：1149830