本文關(guān)鍵詞：miR-98靶向Cyclin D2抑制糖尿病大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的機(jī)制

  更多相關(guān)文章： Cyclin D2 miR-98 2型糖尿病大鼠 基因表達(dá)

【摘要】：本論文分兩部：第一部分研究miR-98在2型糖尿病SD大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖中的作用；第二部分研究miR-98下調(diào)Cyclin D2表達(dá)抑制大鼠主動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(rat vascular aortic endothelial cells,RAOEC)細(xì)胞的增殖。一、miR-98在糖尿病SD大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖中的作用通過建立2型糖尿病大鼠模型,利用Real-time PCR檢測miR-98在糖尿病大鼠血管內(nèi)膜組織中的表達(dá)明顯低于正常大鼠組織,推測miR-98在血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖中發(fā)揮作用。進(jìn)一步Western blotting檢測Cyclin D2的表達(dá),其在糖尿病大鼠血管內(nèi)膜組織中的表達(dá)明顯高于正常大鼠組織,與cyclinD2相關(guān)的p-Rb表達(dá)升高,結(jié)果提示,cyclin D2和與其相關(guān)的Rb的磷酸化在血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖中發(fā)揮重要作用。在細(xì)胞水平,MTT檢測高糖處理對RAOEC細(xì)胞增殖的影響,結(jié)果顯示,高糖處理組細(xì)胞的增殖率明顯高于低糖處理組。進(jìn)一步檢測高糖處理細(xì)胞后對細(xì)胞周期的影響,與高糖培養(yǎng)基處理組相比,正常組的細(xì)胞主要停滯在G1期,而高糖處理組的細(xì)胞主要進(jìn)行分裂增殖。通過Real-time PCR檢測高糖處理細(xì)胞后miR-98的表達(dá),高糖處理組miR-98的表達(dá)明顯低于低糖處理組(對照組)。進(jìn)一步Western blotting檢測Cyclin D2和p-Rb在高糖處理組的表達(dá)明顯高于低糖處理組,結(jié)果顯示,cyclin D2和與其相關(guān)的Rb的磷酸化在血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖中發(fā)揮重要作用。二、miR-98通過下調(diào)Cyclin D2表達(dá)抑制RAOEC細(xì)胞的增殖構(gòu)建pcDNA-GFP-cyclin D2-3'UTR的載體,化學(xué)合成miR-98及反義寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO-98),共轉(zhuǎn)染RAOEC細(xì)胞,利用熒光倒置顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)檢測GFP的表達(dá),結(jié)果顯示,與對照組相比,轉(zhuǎn)染miR-98組綠色熒光蛋白(Green Fluorescent Protein, GFP)的表達(dá)量顯著下降；MTT檢測轉(zhuǎn)染miR-98后,細(xì)胞的增殖情況,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,miR-98轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖受到抑制；進(jìn)一步檢測miR-98對細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響,miR-98轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞停滯在G1期,促進(jìn)了血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡,抑制了細(xì)胞的分裂增殖。在細(xì)胞水平,Real-time PCR檢測轉(zhuǎn)染miR-98后,miR-98的含量明顯升高。Western blotting檢測到轉(zhuǎn)染miR-98后,Cyclin D2口p-Rb的表達(dá)明顯低于對照組；另外,抗凋亡基因Bcl-2和NF-KB的表達(dá)降低；促凋亡基因BAX和Caspase9勺表達(dá)升高,推測miR-98抑制大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖與上述因子變化有關(guān)。綜上所述,Cyclin D2在2型糖尿病大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖中發(fā)揮作用,miR-98通過調(diào)節(jié)Cyclin D2的表達(dá)抑制大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。miR-98也可能通過影響l-2、NF-KB、BAX、Caspase9的表達(dá)抑制大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。
【學(xué)位授予單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R587.2;R54

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 宋俊敏,徐冬,范爾進(jìn),徐世榮,李董,趙春華;慢性粒細(xì)胞白血病cyclin D2基因的表達(dá)研究[J];中華血液學(xué)雜志;2004年02期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李新新;miR-98靶向Cyclin D2抑制糖尿病大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的機(jī)制[D];濱州醫(yī)學(xué)院;2015年

2 宋俊敏;慢性粒細(xì)胞白血病cyclin D2 的表達(dá)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2002年

，

本文編號：1149830