發(fā)布時(shí)間：2017-10-31 04:21

  本文關(guān)鍵詞：供體年齡及SDF-1α對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)功能影響的研究

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【摘要】：目的:本研究擬探討1)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(rBM-MSCs)增殖與定向分化能力的增齡性差異;2)基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α(SDF-1α)蛋白對(duì)高糖環(huán)境(25mmol/L)下rBM-MSCs增殖、凋亡及遷移能力的影響及相關(guān)分子機(jī)制。方法:1.純化擴(kuò)增不同年齡組SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,流式細(xì)胞儀(FACS)分析其細(xì)胞周期;2.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與乳鼠心肌細(xì)胞共培養(yǎng),細(xì)胞免疫熒光技術(shù)分析骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的心肌肌鈣蛋白T表達(dá);3.采用MTT法檢測細(xì)胞增殖率、Hoechst 33258染色從形態(tài)學(xué)角度觀察細(xì)胞凋亡,評(píng)估SDF-1α蛋白對(duì)高糖環(huán)境下大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖、凋亡能力的影響;4.通過Transwell實(shí)驗(yàn)評(píng)估SDF-1α對(duì)高糖環(huán)境下大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移能力的影響。結(jié)果:1.細(xì)胞周期顯示處于G0/G1期骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的百分率隨年齡的增加而增加;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的肌鈣蛋白T(TnT)表達(dá)率亦隨年齡的增加而減少;2.高糖培養(yǎng)液較低糖培養(yǎng)液可明顯抑制r BM-MSCs增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡(p0.05),SDF-1α蛋白(50ng/m L)可減輕高糖培養(yǎng)液對(duì)rBM-MSCs增殖的抑制及凋亡的誘導(dǎo)作用(p0.05),CXCR4受體特異性拮抗劑AMD3100蛋白(10μg/mL)雖能進(jìn)一步抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,但差異無顯著性(p0.05);3.Transwell實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)高糖培養(yǎng)液較低糖培養(yǎng)液可明顯抑制rBM-MSCs的遷移作用(p0.05),SDF-1α蛋白(50ng/m L)可逆轉(zhuǎn)高糖培養(yǎng)液對(duì)細(xì)胞遷移的抑制作用(p0.05),AMD3100蛋白(10μg/m L)可進(jìn)一步抑制細(xì)胞遷移,且差異有顯著性(p0.05)。結(jié)論:1.rBM-MSCs的增殖與定向分化能力隨著年齡的增長而下降;2.高糖抑制rBM-MSCs的增殖、遷移及誘導(dǎo)其凋亡,而SDF-1α能改善高糖對(duì)rBM-MSCs增殖、遷移的抑制及凋亡的誘導(dǎo)作用;3.SDF-1α蛋白可能通過CXCR4受體改善高糖對(duì)rBM-MSCs遷移能力的抑制,而其改善高糖對(duì)rBM-MSCs增殖、遷移的抑制則可能通過非CXCR4受體介導(dǎo),為改善BM-MSCs用于治療冠心病合并糖代謝異常患者的心肌修復(fù)療效進(jìn)一步提供理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α AMD3100蛋白 增殖 分化 凋亡 遷移
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R542.2
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 前言9-16
• 1. BM-MSCs的研究現(xiàn)狀9-13
• 1.1 BM-MSCs的組織來源9-10
• 1.2 BM-MSCs修復(fù)心肌的相關(guān)機(jī)制10-11
• 1.3 BM-MSCs在心血管疾病的應(yīng)用研究11-13
• 1.4 心血管病危險(xiǎn)因素與BM-MSCs13
• 2. SDF-1α 蛋白在MSCs治療缺血性心臟病的作用13-14
• 2.1 SDF-1α 蛋白及其受體13-14
• 2.2 SDF- 1α/CXCR4信號(hào)軸與缺血性心臟病干細(xì)胞治療14
• 3. 本研究目的、內(nèi)容和意義14-16
• 第一部分 供體年齡對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖及向心肌樣細(xì)胞方向分化能力的影響研究16-28
• 1 引言16
• 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法16-20
• 2.1 主要試劑、耗材與儀器16-17
• 2.2 主要試劑的配制17-18
• 2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物18
• 2.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組18
• 2.5 實(shí)驗(yàn)步驟18-20
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-25
• 3.1 觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生長情況20-23
• 3.2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞周期檢測結(jié)果23-24
• 3.3 混合培養(yǎng)后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的測定24-25
• 4. 討論25-28
• 第二部分SDF-1α 對(duì)高糖環(huán)境下骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)功能的影響28-41
• 1 引言28
• 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法28-31
• 2.1 主要試劑、耗材與儀器28
• 2.2 主要試劑的配制28-29
• 2.3 實(shí)驗(yàn)步驟29-31
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-38
• 3.1 rBM-MSCs原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)31-33
• 3.2 成骨誘導(dǎo)分化及成脂誘導(dǎo)分化鑒定rBM-MSCs33
• 3.3 SDF-1 促進(jìn)高糖環(huán)境下rBM-MSCs增殖33-34
• 3.4 SDF-1 減少高糖誘導(dǎo)rBM-MSCs凋亡34-36
• 3.5 SDF-1α 促進(jìn)高糖環(huán)境下r BM-MSCs遷移36-38
• 4. 討論38-41
• 總結(jié)與討論41-42
• 問題與展望42-43
• 參考文獻(xiàn)43-51
• 在校期間發(fā)表論文清單51-52
• 致謝52

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