本文關(guān)鍵詞：17β-雌二醇和2-甲氧基雌二醇對(duì)低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠氧化應(yīng)激狀態(tài)的影響

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【摘要】：目的:肺動(dòng)脈高壓(PAH)是一組由不同病因和發(fā)病機(jī)制引起的以肺血管阻力持續(xù)增加為特征的臨床綜合征。缺氧而致細(xì)胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成過(guò)多、清除不足而引起的氧化應(yīng)激是多種病理生理變化的基礎(chǔ)。ROS通過(guò)直接或間接途徑調(diào)節(jié)多種信號(hào)通路,最終導(dǎo)致肺血管重構(gòu)。超氧化物歧化酶(SOD)是抵抗ROS的第一道防線,而錳超氧化物歧化酶(Mn SOD)是細(xì)胞線粒體內(nèi)ROS的主要清除劑。肺血管張力的維持有賴于氧化/抗氧化酶系統(tǒng)的平衡,在PAH的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程中具有重要作用。本研究旨在通過(guò)建立去勢(shì)大鼠長(zhǎng)期慢性低氧性肺動(dòng)脈高壓模型,探討17β-雌二醇(E2)和2-甲氧基雌二醇(2ME)對(duì)低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激水平,線粒體錳超氧化物歧化酶(Mn SOD)活性及表達(dá)的影響。方法:1模型建立:健康雌性SD大鼠80只,按隨機(jī)數(shù)字表法平均分為8組,分別為假手術(shù)組、去勢(shì)組、假手術(shù)+低氧組、去勢(shì)+低氧組、去勢(shì)+E2組、去勢(shì)+低氧+E2組、去勢(shì)+2ME組、去勢(shì)+低氧+2ME組。假手術(shù)組打開(kāi)腹腔找到雙側(cè)卵巢后不做處理直接還納縫合;去勢(shì)組行切除卵巢術(shù);假手術(shù)+低氧組行假手術(shù)后持續(xù)低氧(24h,8周);去勢(shì)+低氧組切除卵巢后持續(xù)低氧;去勢(shì)+E2組切除卵巢后給予E2(20μg·kg-1·d-1)皮下注射;去勢(shì)+低氧+E2組切除卵巢后每天給予E2并且持續(xù)低氧;去勢(shì)+2ME組切除卵巢后給予2ME(240μg·kg-1·d-1)皮下注射;去勢(shì)+低氧+2ME組切除卵巢后每天給予2ME并且持續(xù)低氧。連續(xù)飼養(yǎng)8周,以建立低氧肺動(dòng)脈高壓模型。2長(zhǎng)期低氧大鼠肺動(dòng)脈壓力變化:造模8周后,右心導(dǎo)管法測(cè)定大鼠平均肺動(dòng)脈壓(mean pulmonary artery pressure,m PAP),以放血的方式處死大鼠。稱量法計(jì)算右心室肥大指數(shù)(right ventricule hypertrophy index,RVHI),HE染色進(jìn)行肺小動(dòng)脈重塑(hypoxic pulmonary artery remodeling,HPSR)觀察。3采用醋酸雙氧鈾和枸櫞酸鉛雙重染色后,透射電鏡下觀察肺組織各類細(xì)胞內(nèi)的超微結(jié)構(gòu)變化。4采用Fenton反應(yīng)及Griess顯色原理測(cè)定血清ROS水平。5采用黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)血清中SOD、Cu/Zn SOD、Mn SOD水平。6采用反轉(zhuǎn)錄PCR法檢測(cè)肺組織中Mn SOD m RNA水平。7采用Western blot印跡檢測(cè)肺組織中Mn SOD蛋白質(zhì)的表達(dá)。結(jié)果:1大鼠的一般狀況:低氧條件下的各組大鼠隨著低氧時(shí)間的延長(zhǎng),毛色晦暗、虹膜暗紅、呼吸急促、食水量減少,活動(dòng)度逐漸減少,最終以靜臥為主,低氧8周過(guò)程中未出現(xiàn)死亡。與假手術(shù)組相比較,假手術(shù)+低氧組和去勢(shì)+低氧組大鼠體重增長(zhǎng)明顯緩慢;去勢(shì)+低氧+E2組和去勢(shì)+低氧+2ME組體重增長(zhǎng)速度減緩;去勢(shì)組、去勢(shì)+E2組和去勢(shì)+2ME組體重增長(zhǎng)速度無(wú)明顯變化。2各組大鼠肺動(dòng)脈壓力及RVHI變化:假手術(shù)+低氧組、去勢(shì)+低氧組大鼠肺小動(dòng)脈管壁增厚管腔變窄明顯,m PAP、RVHI均顯著高于假手術(shù)組;去勢(shì)+低氧+E2組、去勢(shì)+低氧+2ME組大鼠上述形態(tài)學(xué)改變相對(duì)較輕,m PAP仍顯著高于假手術(shù)組,且兩組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而RVHI則與假手術(shù)組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且兩組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3各組大鼠肺小血管形態(tài)學(xué)變化:光鏡下,假手術(shù)組大鼠肺小動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞呈扁平連續(xù),細(xì)胞分布均勻,大小、厚薄較一致,無(wú)內(nèi)皮細(xì)胞水腫壞死,肺小動(dòng)脈管壁結(jié)構(gòu)正常、管腔大。假手術(shù)+低氧組大鼠肺小動(dòng)脈管壁明顯增厚、結(jié)構(gòu)紊亂,紅染部分明顯增厚,中膜平滑肌細(xì)胞(SMC)增多,中膜(PAMT)增厚,管腔變窄,部分出現(xiàn)塌陷;假手術(shù)+低氧組更為顯著;去勢(shì)+低氧+E2組和去勢(shì)+低氧+2ME組肺小動(dòng)脈管壁結(jié)構(gòu)介于假手術(shù)組與低氧組之間;去勢(shì)組、去勢(shì)+E2組和去勢(shì)+2ME組大鼠肺小動(dòng)脈管壁結(jié)構(gòu)大致正常。4各組大鼠肺組織超微結(jié)構(gòu)變化:透射電鏡下,假手術(shù)組大鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞可見(jiàn)較多的微絨毛,未見(jiàn)脫落,板層小體未見(jiàn)斷裂;線粒體數(shù)目較多,輕微腫脹,未見(jiàn)嵴斷裂和消失;假手術(shù)+低氧組大鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞腫脹,表面微絨毛脫落,明顯減少,排列欠整齊,板層小體重度減少,可見(jiàn)斷裂,線粒體腫脹,可見(jiàn)大部分嵴斷裂及膜融合消失,模糊不清,細(xì)胞核固縮;去勢(shì)+低氧組大鼠表面微絨毛脫落,顯著減少,板層小體顯著減少,可見(jiàn)斷裂,脫顆粒出現(xiàn)空泡,線粒體腫脹明顯,數(shù)目明顯減少,可見(jiàn)嵴斷裂和膜融合消失;去勢(shì)+低氧+E2組和去勢(shì)+低氧+2ME組大鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞腫脹,表面微絨毛脫落,中度減少,排列欠整齊,板層小體中度減少,可見(jiàn)斷裂,線粒體腫脹,可見(jiàn)嵴斷裂和膜融合消失,以及髓樣化;去勢(shì)組、去勢(shì)+E2組和去勢(shì)+2ME組大鼠可見(jiàn)輕度超微結(jié)構(gòu)改變,大致正常。5各組大鼠血清SOD、Cu/Zn SOD、Mn SOD活性變化:與假手術(shù)組相比,去勢(shì)組、假手術(shù)+低氧組和去勢(shì)+低氧組大鼠SOD活性明顯降低,降低幅度逐組遞增,去勢(shì)+低氧組最為顯著;去勢(shì)+低氧+E2組和去勢(shì)+低氧+2ME組大鼠SOD活性降低;去勢(shì)+E2組和去勢(shì)+2ME組大鼠SOD活性變化不明顯。Mn SOD變化趨勢(shì)同前。各組間Cu/Zn SOD活性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。6各組大鼠血清ROS水平:與假手術(shù)組相比,假手術(shù)+低氧組、去勢(shì)+低氧組ROS水平明顯升高;去勢(shì)+低氧+E2和去勢(shì)+低氧+2ME組ROS水平升高,升高幅度不及假手術(shù)+低氧組、去勢(shì)+低氧組組;去勢(shì)組、去勢(shì)+E2組和去勢(shì)+2ME組ROS水平無(wú)明顯變化。7各組大鼠肺組織中Mn SOD蛋白和m RNA表達(dá):去勢(shì)組、假手術(shù)+低氧組、去勢(shì)+低氧組、去勢(shì)+低氧+E2組、去勢(shì)+低氧+2ME組表達(dá)水平均顯著低于假手術(shù)組,且去勢(shì)+低氧+E2組相較于去勢(shì)+低氧+2ME組降低明顯,去勢(shì)+E2組、去勢(shì)+2ME組變化不明顯。結(jié)論:1長(zhǎng)期持續(xù)低氧環(huán)境下,大鼠血清中ROS水平明顯增高,血清中SOD、Cu/Zn SOD活性明顯降低,大鼠肺組織中Mn SOD蛋白和m RNA表達(dá)水平明顯降低。2去勢(shì)組大鼠血清中ROS水平增高,SOD、Cu/Zn SOD活性降低,肺組織中Mn SOD蛋白和m RNA表達(dá)均降低。3與假手術(shù)+低氧組和去勢(shì)組大鼠相比,低氧環(huán)境下的去勢(shì)大鼠ROS水平顯著增高,血清中SOD、Cu/Zn SOD活性顯著降低,肺組織中Mn SOD蛋白和m RNA表達(dá)顯著降低。4 17-β雌二醇和2-甲氧基雌二醇均可抑制ROS水平,增加Mn SOD的活性及表達(dá),從而有益于維持氧化/抗氧化平衡,減輕氧化應(yīng)激水平,緩解肺動(dòng)脈高壓。且2ME在增加Mn SOD表達(dá)上較E2顯著,但對(duì)ROS水平的影響相差不大。
【關(guān)鍵詞】：肺動(dòng)脈高壓 缺氧 17β-雌二醇 2-甲氧基雌二醇 氧化應(yīng)激 錳超氧化物歧化酶
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R544.1
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14
• 材料與方法14-22
• 結(jié)果22-24
• 附圖24-30
• 附表30-32
• 討論32-34
• 結(jié)論34
• 參考文獻(xiàn)34-37
• 綜述 氧化應(yīng)激及超氧化物歧化酶與低氧性肺動(dòng)脈高壓的相關(guān)性研究37-51
• 參考文獻(xiàn)45-51
• 致謝51-52
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷52

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 ;Mn-SOD and CuZn-SOD polymorphisms and interactions with risk factors in gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2010年37期

2 安尚玉;霍洪亮;;雌激素與活性氧[J];中國(guó)心血管雜志;2007年06期

3 趙建平;周志剛;胡紅玲;郭治;汪濤;甄國(guó)華;張珍祥;;低氧條件下大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中活性氧與低氧誘導(dǎo)因子-1α和細(xì)胞增殖的關(guān)系(英文)[J];生理學(xué)報(bào);2007年03期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 袁夢(mèng)琪;雌激素對(duì)去勢(shì)及低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠ACE-AngⅡ-AT1軸的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：1100360