本文關(guān)鍵詞：骨髓和胎盤基蛻膜來源間充質(zhì)干細(xì)胞在小腸黏膜下層三維培養(yǎng)體系中成心肌樣細(xì)胞分化能力比較

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【摘要】：目的:比較骨髓和胎盤基蛻膜來源間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在小腸粘膜下層(small intestinal submucosa,SIS)三維培養(yǎng)體系中的成心肌樣細(xì)胞分化能力,為心肌組織工程種子細(xì)胞的篩選提供理論依據(jù)。方法:分別從人骨髓和胎盤基蛻膜組織中分離提取間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)進(jìn)行體外擴(kuò)增培養(yǎng)。采用流式細(xì)胞儀檢測骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BM-MSCs)和胎盤基蛻膜間充質(zhì)干細(xì)胞(pacental decidua basalis-mesenchymal stem cells,PDB-MSCs)中細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)。采用成骨、成脂和成軟骨誘導(dǎo)分化的方法鑒定BM-MSCs和PDB-MSCs的多向分化潛能。將BM-MSCs和PDB-MSCs分別在SIS上復(fù)合培養(yǎng)5d,待形成細(xì)胞支架復(fù)合物后將復(fù)合物隨機分為4組,分別是BM-MSCs-SIS誘導(dǎo)組、BM-MSCs-SIS非誘導(dǎo)組、PDB-MSCs-SIS誘導(dǎo)組和PDB-MSCs-SIS非誘導(dǎo)組。其中所有誘導(dǎo)組中的復(fù)合物在使用成心肌樣細(xì)胞分化誘導(dǎo)劑5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)作用24h后更改為普通完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)4w。非誘導(dǎo)組中復(fù)合物不添加5-aza,而是用等量的磷酸緩沖鹽溶液(phosphate buffer saline,PBS)代替,其它操作同誘導(dǎo)組。4w后,掃描電鏡(scanning electron microscope,SEM)觀察BM-MSCs和PDB-MSCs在SIS中的形態(tài)變化;抗人c Tn I的免疫熒光染色顯示兩種細(xì)胞的成心肌樣細(xì)胞分化現(xiàn)象;流式細(xì)胞儀計數(shù)兩種細(xì)胞的分化率;RT-PCR檢測成心肌樣細(xì)胞分化誘導(dǎo)過后的兩種細(xì)胞中心臟發(fā)育早期轉(zhuǎn)錄因子Nkx2.5和GATA-4的表達(dá)情況;Western Blot檢測心肌細(xì)胞分化中晚期特異性蛋白c Tn I和CX43的表達(dá)情況;倒置顯微鏡觀察SIS邊緣區(qū)域的兩種細(xì)胞是否有細(xì)胞搏動現(xiàn)象。結(jié)果:本實驗過程中從人骨髓和胎盤基蛻膜組織提取的MSCs均表達(dá)CD90、CD44、CD73和CD105,均不表達(dá)CD45、CD34、CD11b、CD19和HLA-DR,均表現(xiàn)出了成骨、成脂和成軟骨的多向分化潛能。BM-MSCs和PDB-MSCs在SIS中分別用5-aza進(jìn)行成心肌分化誘導(dǎo)培養(yǎng)4w后的SEM檢測結(jié)果顯示BM-MSCs和PDB-MSCs均與SIS具有良好的生物相容性,誘導(dǎo)后的部分細(xì)胞出現(xiàn)了類似心肌細(xì)胞的星形或長桿狀外形改變。免疫熒光染色顯示BM-MSCs和PDB-MSCs都產(chǎn)生了成心肌樣細(xì)胞分化,然而流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果提示兩種細(xì)胞的分化率沒有明顯差異。分化誘導(dǎo)后的兩種細(xì)胞都表達(dá)心臟發(fā)育早期轉(zhuǎn)錄因子Nkx2.5和GATA-4,心肌細(xì)胞分化中晚期特異性蛋白c Tn I和CX43。分化誘導(dǎo)過后兩種細(xì)胞之間的心臟發(fā)育早期轉(zhuǎn)錄因子Nkx2.5和GATA-4的表達(dá)量沒有顯著差異(P0.05)。然而,心肌細(xì)胞分化中晚期特異性蛋白c Tn I和CX43在分化誘導(dǎo)后的PDB-MSCs中的表達(dá)量明顯高于其在分化誘導(dǎo)后的BM-MSCs中的表達(dá)量(P0.05)。同時,在倒置顯微鏡下并沒有觀察到SIS邊緣區(qū)域的BM-MSCs和PDB-MSCs在被誘導(dǎo)成為心肌樣細(xì)胞以后具有細(xì)胞搏動現(xiàn)象。結(jié)論:SIS是一種良好的心肌組織工程支架材料,它與BM-MSCs和PDB-MSCs之間具有良好的生物相容性。盡管BM-MSCs和PDB-MSCs在SIS三維環(huán)境中經(jīng)5-aza誘導(dǎo)分化而成的心肌樣細(xì)胞都不是完全成熟的心肌細(xì)胞,但是與BM-MSCs相比,由PDB-MSCs誘導(dǎo)分化而成的心肌樣細(xì)胞的分化成熟度更高,因而PDB-MSCs可能更加適合被作為心肌組織工程的種子細(xì)胞。
【關(guān)鍵詞】：骨髓 胎盤基蛻膜 小腸粘膜下層 間充質(zhì)干細(xì)胞 心肌細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R542.22
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-13
• 材料與方法13-25
• 結(jié)果25-35
• 討論35-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-51
• 英漢縮略詞對照表51-52
• 致謝52-53
• 低氧條件下骨髓與胎盤來源MSCs生物學(xué)特性比較(綜述)53-67
• 參考文獻(xiàn)60-67

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 羅靜聰,楊志明;小腸黏膜下層的制備及其特性的研究進(jìn)展[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2003年05期

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本文編號：1077134