本文關(guān)鍵詞：高血壓病的代謝組學(xué)研究

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【摘要】： 代謝組學(xué)又稱代謝物組學(xué),是研究機(jī)體代謝產(chǎn)物譜變化的一種新的系統(tǒng)方法。作為一種“組學(xué)”科學(xué),它借助高通量、高靈敏度與高精確度的現(xiàn)代分析技術(shù),來(lái)分析細(xì)胞、組織和體液如血液或尿液中內(nèi)源性代謝物整體組成,通過(guò)研究代謝物的動(dòng)態(tài)變化來(lái)辯識(shí)和解析被研究對(duì)象的生理病理狀態(tài)。作為嶄新的方法學(xué),代謝組學(xué)已成為國(guó)際上疾病與健康研究的一個(gè)重要熱點(diǎn)。因此采用代謝組學(xué)方法來(lái)研究高血壓病,對(duì)于高血壓病的早期診斷、預(yù)防和藥物干預(yù)都具有重要的指導(dǎo)意義。 本論文采用HPLC法和ICP-MS法作為代謝組學(xué)研究的檢測(cè)手段,以高血壓患者和正常人的血漿和尿液為研究對(duì)象,測(cè)定其中各類代謝產(chǎn)物的含量。高血壓患者和正常人血漿和尿液的代謝產(chǎn)物圖譜,目視難以區(qū)分兩者的差異。采用模式識(shí)別方法,能夠成功區(qū)分高血壓患者和正常人血漿和尿液樣本。說(shuō)明通過(guò)血漿和尿液中的代謝產(chǎn)物分析能夠有效辨識(shí)高血壓狀態(tài)。本研究采用代謝組學(xué)方法研究高血壓病,為高血壓病的早期診斷、預(yù)防和致病機(jī)理研究提供了理論依據(jù)。 1.反相高效液相色譜法測(cè)定尿液中非蛋白氮代謝產(chǎn)物 建立了RP-HPLC法測(cè)定尿液中5種非蛋白氮代謝產(chǎn)物(尿素、肌酸、肌酐、尿酸和馬尿酸)的含量。尿樣經(jīng)離心和稀釋后,C_(18)柱分離,以乙腈-醋酸銨緩沖液(20 mmol·L~(-1),pH6.8)為流動(dòng)相,梯度洗脫,檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm。肌酸、肌酐、尿酸和馬尿酸濃度在2～100mg·mL~(-1)內(nèi),尿素濃度在100～1000 mg·mL~(-1)內(nèi)線性關(guān)系良好(γ＞0.99),方法平均回收率為97.6%～105%,RSD為0.79～4.2%(n=6)。該方法操作簡(jiǎn)便、快速,靈敏度高,重復(fù)性好,適用于尿液中非蛋白氮代謝產(chǎn)物的快速分析。 2.柱前衍生高效液相色譜法測(cè)定血漿和尿液中氨基酸 建立了RP-HPLC法測(cè)定血漿和尿液中22種氨基酸的含量。以丹磺酰氯為柱前衍生化試劑,血漿樣品和尿樣經(jīng)沉淀蛋白處理后,C_(18)柱分離,以醋酸鈉-甲醇-四氫呋喃為流動(dòng)相,梯度洗脫,熒光檢測(cè)。氨基酸濃度在2～400μmol·L~(-1)內(nèi)線性關(guān)系良好(γ＞0.99),方法平均回收率為82.0%～109%,RSD為0.98～7.3%(n=6)。該方法精密度和重復(fù)性好,適用于血漿和尿液中氨基酸的測(cè)定。 3.電感耦合等離子體質(zhì)譜法測(cè)定尿液中微量元素 建立了ICP-MS法測(cè)定尿液中16種微量元素的含量。尿樣經(jīng)離心和稀釋后進(jìn)樣分析。儀器測(cè)試條件為:射頻功率1570 W;載氣流速1.2 L·min~(-1);等離子體氣流速14.9L·min~(-1);霧化室溫度2℃。Al、V、Cr、Mn、Co、Ni、Cu、Zn、As、Se、Mo、Cd、Ba和Pb濃度在0.1～100μg·L~(-1)內(nèi),Mg和Fe濃度在10～10000μg·L~(-1)內(nèi)線性關(guān)系良好(γ＞0.999),檢出限為2～143 ng·L~(-1),儀器精密度為0.25%～3.7%(n=10),方法精密度為0.79%～4.9%(n=6)。該方法簡(jiǎn)便、快速,精密度好,靈敏度高,適用于尿液中微量元素的高通量、快速分析。 4.數(shù)據(jù)處理及結(jié)果分析 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件,對(duì)高血壓患者和正常人體內(nèi)的氨基酸和微量元素含量分別進(jìn)行主成份分析和判別分析,結(jié)果表明:高血壓組和正常對(duì)照組體內(nèi)氨基酸和微量元素的代謝模式存在顯著性差異。主成份分析可以將高血壓患者和正常人的血漿和尿液樣本明顯區(qū)分開(kāi),分類判別準(zhǔn)確率大于98%。高血壓患者體內(nèi)氨基酸代謝異常,這可能與其飲食結(jié)構(gòu)或體內(nèi)氨基酸失衡有關(guān);而高血壓患者體內(nèi)微量元素代謝紊亂,除了與飲食結(jié)構(gòu)和遺傳因素有關(guān)外,環(huán)境的影響可能也是一個(gè)重要的原因,進(jìn)一步的研究仍在進(jìn)行中。
【關(guān)鍵詞】：高血壓病 代謝組學(xué) 主成份分析 判別分析 電感耦合等離子體質(zhì)譜 非蛋白氮代謝產(chǎn)物 氨基酸 微量元素
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R544.1
【目錄】：

• 摘要10-12
• ABSTRACT12-15
• 第一章 前言15-21
• 1.1 代謝組學(xué)15-18
• 1.1.1 代謝組學(xué)的涵義15
• 1.1.2 代謝組學(xué)的分類15-16
• 1.1.3 代謝組學(xué)的分析技術(shù)16
• 1.1.4 代謝組學(xué)的應(yīng)用16-18
• 1.1.5 代謝組學(xué)研究中存在的問(wèn)題18
• 1.2 立題依據(jù)18-21
• 第二章 反相高效液相色譜法測(cè)定尿液中非蛋白氮代謝產(chǎn)物21-27
• 2.1 儀器與試劑21
• 2.1.1 儀器21
• 2.1.2 試劑21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分21-25
• 2.2.1 溶液制備21-22
• 2.2.2 樣品收集與處理22
• 2.2.3 色譜條件22
• 2.2.4 方法學(xué)考察22-24
• 2.2.5 樣品測(cè)定24-25
• 2.3 討論25-26
• 2.3.1 檢測(cè)方法的選擇25
• 2.3.2 樣品前處理方法的選擇25
• 2.3.3 色譜條件的優(yōu)化25-26
• 2.4 小結(jié)26-27
• 第三章 柱前衍生高效液相色譜法測(cè)定血漿和尿液中氨基酸27-42
• 3.1 儀器與試劑27-28
• 3.1.1 儀器27
• 3.1.2 試劑27-28
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分28-36
• 3.2.1 溶液制備28-29
• 3.2.2 樣品收集與處理29
• 3.2.3 色譜條件29
• 3.2.4 方法學(xué)考察29-36
• 3.2.5 樣品測(cè)定36
• 3.3 討論36-41
• 3.3.1 衍生化試劑的選擇36-38
• 3.3.2 衍生化條件的優(yōu)化38-40
• 3.3.3 色譜條件的優(yōu)化40
• 3.3.4 沉淀蛋白方法的選擇40-41
• 3.4 小結(jié)41-42
• 第四章 電感耦合等離子體質(zhì)譜法測(cè)定尿液中微量元素42-50
• 4.1 儀器與試劑42
• 4.1.1 儀器42
• 4.1.2 試劑42
• 4.1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液42
• 4.2 實(shí)驗(yàn)部分42-48
• 4.2.1 溶液制備42
• 4.2.2 樣品收集與處理42-43
• 4.2.3 儀器測(cè)試條件43
• 4.2.4 方法學(xué)考察43
• 4.2.5 樣品測(cè)定43-48
• 4.3 討論48-49
• 4.3.1 檢測(cè)方法的選擇48
• 4.3.2 樣品前處理方法的選擇48
• 4.3.3 內(nèi)標(biāo)元素的引入48-49
• 4.3.4 干擾的消除49
• 4.4 小結(jié)49-50
• 第五章 模式識(shí)別方法的建立與結(jié)果分析50-60
• 5.1 血漿氨基酸模式識(shí)別方法的建立50-52
• 5.1.1 血漿氨基酸的主成份分析50-52
• 5.1.2 血漿氨基酸的判別分析52
• 5.2 尿液氨基酸模式識(shí)別方法的建立52-54
• 5.2.1 尿液氨基酸的主成份分析52-54
• 5.2.2 尿液氨基酸的判別分析54
• 5.3 尿液微量元素模式識(shí)別方法的建立54-56
• 5.3.1 尿液微量元素的主成份分析54-56
• 5.3.2 尿液微量元素的判別分析56
• 5.4 討論56-58
• 5.4.1 血漿和尿液氨基酸含量測(cè)定結(jié)果分析56-57
• 5.4.2 尿液微量元素含量測(cè)定結(jié)果分析57-58
• 5.5 小結(jié)58-60
• 第六章 結(jié)論60-62
• 參考文獻(xiàn)62-66
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷66-67
• 致謝67

【引證文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 范群麗;降壓藥物個(gè)體敏感性與中醫(yī)證型的代謝組學(xué)橋接研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2011年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 王言哲;高血壓病中醫(yī)證型及藥物干預(yù)的代謝組學(xué)研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2010年

2 張鳳美;急性心肌梗死患者血清代謝標(biāo)志物的篩選研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：1062958