本文關(guān)鍵詞：血小板GPIb受體拮抗劑Agkisacucetin對人血小板聚集和釋放反應(yīng)影響的研究

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【摘要】：目的:血小板黏附和聚集在動脈粥樣硬化基礎(chǔ)上的血栓形成中起重要的作用,而血小板膜糖蛋白Ib(GPIb)受體與血管性血友因子(VWF)相互作用是血小板黏附、聚集及血栓形成的始動環(huán)節(jié),同時也是高剪切力下血小板在血管病理性狹窄部位發(fā)生黏附和聚集的重要機制。因此,GPIb-VWF交聯(lián)軸被認為是抗血栓治療的重要靶點。Agkisacucetin是一種全新的抗血小板制劑,為一種提純于蛇毒的蛋白質(zhì),主要通過拮抗GPIb受體與VWF相互作用而發(fā)揮抗血小板黏附和聚集作用,在動物實驗中顯示有強大的抗血小板黏附、聚集以及抗血栓形成的功能,目前處于初期臨床試驗階段。本研究旨在:1)在體外實驗,通過觀察Agkisacucetin對于不同致聚劑下人血小板最大聚集率(the maximal platelet aggregation,rPA,max)的抑制作用,探討其對于人血小板聚集的影響;2)在體外實驗,通過觀察Agkisacucetin對于人血小板CD62p的表達的作用,探討其對于血小板釋放反應(yīng)的影響,為其初期臨床試驗提供參考依據(jù)。方法:選擇2014年3月至2014年12月于我院體檢中心體檢的健康志愿者50人,清晨空腹取肘靜脈血,分離得到富血小板血漿(PRP)。接下來將實驗分為兩個部分:1、實驗第一部分,探討Agkisacucetin對于人血小板聚集反應(yīng)的影響,首先檢測瑞斯托霉素(終濃度:1mg/ml)、二磷酸腺苷(ADP,終濃度5μmol/l)誘導的血小板最大聚集率(rPA,max),分別作為對照組,然后檢測檢五種濃度(0.5、1.0、2.0、4.0、8.0μg/ml,下同)Agkisacucetin干預(yù)這兩種致聚劑誘導下的血小板聚集的最大聚集率的表達,分別作為試驗組,比較試驗組與相應(yīng)的對照組之間rpa,max的差異,即agkisacucetin干預(yù)前后的致聚劑誘導血小板聚集的最大聚集率的差異,進行方差分析;以及比較agkisacucetin對于rpa,max的抑制與藥物濃度之間的關(guān)系,進行線性回歸分析。此部分實驗在血小板聚集儀上操作。2、實驗第二部分,探討agkisacucetin對于人血小板釋放反應(yīng)的影響,此部分實驗分別有三組分組實驗:第一組分組實驗,檢測靜息血小板(不加任何試劑)cd62p的表達,作為空白對照組,adp與瑞斯托霉素分別作為不同的處理因素干預(yù)血小板,檢測它們處理血小板后血小板cd62p表達,作為兩試驗組,比較試驗組與空白對照組之間結(jié)果的差異,以及兩試驗組之間的差異,進行方差分析。第二分組實驗,靜息血小板的cd62p表達作為空白對照組,adp處理后血小板的cd62p表達結(jié)果作為陽性對照組,檢測五種濃度分別直接作用于血小板后血小板cd62p的表達,此五組分別作為試驗組,比較試驗組與空白對照組之間差異以及試驗組與陽性對照之間的差異,進行方差分析;并探討試驗組cd62p表達結(jié)果與藥物濃度之間的關(guān)系,進行線性回歸分析。第三組分組實驗,以靜息血小板cd62p的表達作為空白對照組,adp處理的血小板cd62p表達作為陽性對照組,檢測五種濃度agkisacucetin分別干預(yù)adp處理的血小板后cd62p的表達結(jié)果,作為試驗組,比較試驗組與空白組之間的差異,以及試驗組與陽性對照之間的差異,進行方差分析,并探討試驗組與陽性對照組之間的差值與藥物濃度之間的關(guān)系,進行回歸分析。結(jié)果:1、瑞斯托霉素誘導血小板后,血小板發(fā)生聚集,其中rpa,max為85.26±8.25%,五種濃度的agkisacucetin對瑞斯托霉素誘導的血小板最大聚集率(rpa,max)均低于相應(yīng)的對照組,各組之間差異有統(tǒng)計學意義(p0.05),且隨著agkisacucetin濃度的增加,對血小板聚集的抑制率也隨之增加,兩者之間呈正相關(guān)(r=0.936,p0.01),其中藥物半最大效應(yīng)濃度(concentrationfor50%ofmaximaleffect,ec50)在2.0μg/ml左右。2、adp誘導血小板后,血小板發(fā)生同樣聚集,其中rpa,max為63.23±8.12%,分別而對adp誘導的血小板最大聚集率結(jié)果與之相應(yīng)的對照組相比,rpa,max的表達無明顯差異(p0.05),其中agkisacucetin對于adp誘導的血小板最高抑制率為3.05±0.39%。3、正常人靜息血小板CD62P表達率為(6.56±2.91)%,瑞斯托霉素激動后的表達率為(10.81±4.50)%,兩組比較無顯著差異(P0.05),而ADP激動后的表達率為(68.82±6.02)%,表達率明顯高于靜血小板的,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),瑞斯托霉素試驗組的CD62p表達率明顯低于ADP試驗組的,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4、五種濃度的Agkisacucetin單獨作用于血小板后CD62p的表達分別與靜息血小板的相比均略有升高,最高濃度(8.0μg/ml)作用下血小板CD62p的表達為11.07±3.26%,五種濃度組分別與靜息血小板CD62p的表達相比差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),而分別于陽性對照相比,結(jié)果明顯明顯較低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),隨著Agkisacucetin濃度升高,CD62p表達有逐漸升高趨勢,最各濃度之間進行兩兩比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。5、五種濃度的Agkisacucetin作用于ADP誘導的血小板CD62P表達結(jié)果與陽性對照相比略有升高,五種濃度試驗組分別與ADP陽性組相比,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),隨著Agkisacucetin濃度的升高,與陽性組之間差值的絕對值之間有升高趨勢,中最高濃度組的CD62p表達為72.13±5.26%,與陽性對照組差值的絕對值為3.25±1.02%。方差分析結(jié)果,差值絕對值之間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05。結(jié)論:Agkisacucetin能抑制瑞斯托霉素誘導的血小板聚集,其抗血小板聚集作用與藥物濃度呈正相關(guān),其中EC50在2.0μg/mL附近,而ADP誘導的血小板聚集卻無明顯抑制作用。Agkisacucetin對血小板CD6p表達無抑制作用,其本身對血小板CD62p表達的影響較小,即與其抗血小板聚集作用相比,其對血小板釋放反應(yīng)影響較小。
【關(guān)鍵詞】：血小板膜糖蛋白Ib受體拮抗劑 Agkisacucetin 血小板最大聚集率 CD62P
【學位授予單位】：皖南醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R54
【目錄】：

• 摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 前言14-20
• 材料（資料、內(nèi)容）與方法20-29
• 1. 主要試劑與儀器20-21
• 1.1 試劑20
• 1.2 儀器20
• 1.3 相關(guān)制劑配置20-21
• 2. 標本來源21
• 3.實驗方法21-25
• 技術(shù)路線圖25-29
• 結(jié)果29-38
• 討論38-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻47-51
• 綜述51-70
• 參考文獻63-70
• 作者簡介及讀研期間主要科研成果70-71
• 致謝71

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本文編號：1044559