本文關鍵詞：肺動脈平滑肌細胞內BRCC36在介導cGMP抑制TGF-β信號中的作用

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【摘要】：目的：本研究旨在探討B(tài)RCC36蛋白在介導cGMP抑制TGF-β信號中的作用,及其可能作用機制。方法：(1)：采用組織塊貼壁法,進行肺動脈平滑肌細胞(rat pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)原代培養(yǎng),本實驗采用第三代細胞作為實驗對象,并采用大鼠平滑肌細胞特異性表達分子α-SMA,經免疫熒光染色技術,對所培養(yǎng)細胞進行純度鑒定。(2)：給予PASMCs cGMP (0.5mM)預處理1小時,而后再給予TGF-p 1 (2ng/ml)刺激12小時,提取細胞總RNA,以GAPDH為內參,采用RT-PCR的方法檢測TGF-β1刺激標志物PAI-1的mRNA的表達情況。(3)：給予PASMCs, TGF-β1 (2ng/ml)刺激,選擇12小時為時間點,提取細胞總蛋白,并采用Western blot的方法,以a-tubulin為內參,檢測BRCC36蛋白的表達情況。(4)：分別給予給予PASMCs轉染空載體腺病毒(AD-NULL)和攜帶BRCC36過表達基因的腺病毒(AD-BRCC36)后,再給予cGMP (0.5mM)預處理1小時,接著給予TGF-β1 (2ng/ml)處理12小時,提取總RNA,檢測PAI-1的mRNA的表達情況。(5)：給予PASMCs轉染AD-BRCC36后,先后給予微管解聚劑諾考達唑(5 ug/ml), cGMP (0.5mM)各處理1小時后,給予TGF-β1 (2ng/ml)刺激12小時,提取總RNA,采用RT-PCR的方法,檢測PAI-1的mRNA的表達情況。結果：(1)所培養(yǎng)肺動脈平滑肌細胞,形狀為梭形,并成放射性生長,狀態(tài)良好,純度達到95%以上,基本符合后續(xù)實驗要求。(2)采用cGMP預處理的方法激活ANP-cGMP-PKG信號通路,可以明顯抑制TGF-β1誘導的PAI-1的表達,并且能夠降低PAI-1的基礎表達。(3)在給予TGF-β1刺激后,PASMCs內,較空白對照組,內源性BRCC36表達增加。(4)在轉染AD-BRCC36的PASMCs,相較轉染AD-NULL, cGMP對TGF-β1誘導的PAI-1表達的抑制作用增強,并且過表達BRCC36能夠減少細胞內PAI-1的基礎表達。(5)微管解聚劑諾考達唑處理后,能夠去除,過表達BRCC36增強cGMP抑制TGF-β1信號通路的作用。結論：去泛素化酶BRCC36能夠增強cGMP對TGF-β的抑制作用,并且依賴于β2-tubulin的結構完整性。其可能機制是BRCC36對Smad蛋白在泛素化水平進行了調控,并促進其與β2-tubulin結合增加,從而阻止其入核。
【關鍵詞】：BRCC36 心房利鈉肽 去泛素化 轉化生長因子 肺動脈高壓
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R544.1
【目錄】：

• 中文摘要2-4
• 英文摘要4-7
• 英文縮寫詞7-8
• 第一章：前言8-11
• 第二章：材料與方法11-19
• 第三章：實驗結果19-26
• 第四章：討論26-32
• 第五章：結論32-33
• 參考文獻33-36
• 綜述36-42
• 參考文獻40-42
• 致謝42-43
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文目錄43-44

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1 徐歐繁;肺動脈平滑肌細胞內BRCC36在介導cGMP抑制TGF-β信號中的作用[D];揚州大學;2016年

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本文編號：1041840