本文關(guān)鍵詞：VE-cadherin對血管穩(wěn)態(tài)的作用及調(diào)控機(jī)制

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【摘要】：血管內(nèi)皮細(xì)胞鈣粘連蛋白(VE-cadherin)是血管內(nèi)皮細(xì)胞(EC)之間粘著連接(adherens junctions)的關(guān)鍵分子,其結(jié)構(gòu)和功能異常會導(dǎo)致EC粘著連接解離。近年研究表明,VE-cadherin細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域雖然不直接參與EC之間的粘著連接,但它對VE-cadherin在細(xì)胞膜的穩(wěn)定分布和EC粘著連接的功能至關(guān)緊要。EC位于血管壁內(nèi)層,直接與各種血液細(xì)胞和病理因子接觸,多種病理因子可作用于EC,引起EC異常激活和損傷,導(dǎo)致細(xì)胞膜VE-cadherin失去穩(wěn)定性而發(fā)生內(nèi)吞,使細(xì)胞膜VE-cadherin減少,EC之間細(xì)胞粘著連接力降低,粘著連接削弱,但其調(diào)控機(jī)理不明。此外,多種病理因子如何改變VE-cadherin的結(jié)構(gòu)和功能,造成EC粘著連接破壞和血管穩(wěn)態(tài)失衡,迄今仍然是個謎,成為EC粘著連接和血管穩(wěn)態(tài)研究亟需解決的一個關(guān)鍵科學(xué)問題。本文研究了VE-cadherin介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞粘著連接的調(diào)控機(jī)制,細(xì)胞學(xué)研究揭示,內(nèi)外源性因素對VE-cadherin的分布有極大影響。凝血酶(Thrombin)引起內(nèi)皮細(xì)胞體積變小,VE-cadherin內(nèi)吞,細(xì)胞膜分布量減少,VE-cadherin介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞的粘著連接削弱,造成內(nèi)皮細(xì)胞層通透性增加。而香煙煙霧提取物(CSE)則會引起內(nèi)皮細(xì)胞體積明顯增大,減少VE-cadherin細(xì)胞膜分布,導(dǎo)致EC粘著連接解離,同樣造成內(nèi)皮細(xì)胞層通透性增加。分子機(jī)制研究表明,凝血酶和CSE能夠使VE-cadherin蛋白731位酪氨酸發(fā)生磷酸化,導(dǎo)致VE-cadherin和β-catenin內(nèi)吞,內(nèi)皮細(xì)胞粘著連接解離;基因芯片分析揭示,CSE可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞中645個基因異常高表達(dá),并對IL-13RA2、IL-1和DDIT3等多種炎癥和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激基因進(jìn)行了研究;CSE還可激活P38和CREB應(yīng)激信號傳遞通路,并抑制STAT3信號通路。此外,我們研究了血管內(nèi)皮蛋白酪氨酸磷酸酶(VE-PTP)對VE-cadherin及其EC粘著連接的保護(hù)作用,VE-PTP可有效防止CSE誘導(dǎo)的VE-cadherin的731位酪氨酸磷酸化,增加內(nèi)皮細(xì)胞VE-cadherin蛋白水平,增強(qiáng)EC間粘著連接,拮抗CSE對內(nèi)皮細(xì)胞粘著的干擾破壞作用。綜上所述,本研究揭示了凝血酶和CSE能夠使VE-cadherin蛋白的731位酪氨酸磷酸化,導(dǎo)致EC粘著連接解離。VE-cadherin蛋白的731位酪氨酸是否發(fā)生磷酸化,是VE-cadherin介導(dǎo)的細(xì)胞粘著連接的調(diào)控機(jī)制的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn);VE-PTP可以有效地降低VE-cadherin的731位酪氨酸的磷酸化,增強(qiáng)VE-cadherin介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞間粘著連接,為研究內(nèi)皮細(xì)胞粘附連接和血管穩(wěn)態(tài)提供了新的思路。
【關(guān)鍵詞】：VE-cadherin VE-PTP Thrombin CSE 細(xì)胞粘著連接
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R543
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 一、前言10-17
• 二、材料與方法17-30
• （一）材料17-20
• 1. 細(xì)胞系17
• 2. 主要實(shí)驗(yàn)藥物17
• 3. 主要試劑17-18
• 4. 主要儀器18-19
• 5. 主要抗體19-20
• （二）方法20-30
• 1. 主要試劑的配制20-22
• 2. 細(xì)胞培養(yǎng)22
• 3. 瑞姬氏染色22
• 4. 細(xì)胞免疫熒光22-23
• 5. DNA microarray23
• 6. CSE對內(nèi)皮細(xì)胞基因表達(dá)的作用23-27
• 7. CSE和Thrombin對內(nèi)皮細(xì)胞的相關(guān)蛋白表達(dá)水平的作用27-28
• 8. 掃描電鏡樣品制備方法28
• 9. 細(xì)胞膜通透性的檢測28-29
• 10. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染29
• 11. 統(tǒng)計學(xué)分析29-30
• 三、結(jié) 果30-47
• （一）凝血酶和CSE降低VE-cadherin介導(dǎo)的細(xì)胞粘著連接30-41
• 1. 凝血酶對VE-cadherin介導(dǎo)的細(xì)胞粘著連接的破壞作用30-34
• 2. CSE對VE-cadherin介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞粘著連接的破壞作用34-41
• （二） VE-PTP對VE-cadherin介導(dǎo)的細(xì)胞粘著連接保護(hù)作用41-47
• 1. VE-PTP過表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞株的建立42
• 2. VE-PTP拮抗CSE對VE-cadherin介導(dǎo)的細(xì)胞粘著連接的破壞作用42-44
• 3. VE-PTP對VE-cadherin介導(dǎo)的細(xì)胞粘著連接的保護(hù)作用的機(jī)制探索44-47
• 四、討 論47-50
• 1. 凝血酶和CSE使VE-cadherin介導(dǎo)的細(xì)胞粘著連接的解離的機(jī)制及其意義47-48
• 2. VE-PTP對VE-cadherin介導(dǎo)的粘著連接的保護(hù)作用的機(jī)制及其意義48-49
• 3. CSE使內(nèi)皮細(xì)胞中IL13RA2基因高表達(dá)的發(fā)現(xiàn)與意義49-50
• 五、小 結(jié)50-51
• 六、參考文獻(xiàn)51-56
• 綜述56-70
• 參考文獻(xiàn)64-70
• 攻讀學(xué)位期間本人出版或公開發(fā)表的論著、論文70-71
• 攻讀學(xué)位期間獲獎情況71-72
• 中英文縮寫詞表72-73
• 致謝73-75

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