本文關(guān)鍵詞：以RUNX3為靶點(diǎn)干預(yù)內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的研究

  更多相關(guān)文章： TGF-β1 心肌纖維化 內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化 Runx3

【摘要】：目的1.觀察轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)引起內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化及其與Runt相關(guān)性轉(zhuǎn)錄因子3(Runx3)的關(guān)系。2.觀察Runx3對(duì)內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的影響。3.探討Runx3影響血管內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的相關(guān)機(jī)制。方法1.將血管內(nèi)皮細(xì)胞分組:①Control組:普通培養(yǎng)液培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞6天;②1 ng/ml組:含1 ng/ml TGF-β1的普通培養(yǎng)液培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞6天;③5 ng/ml組:含5 ng/ml TGF-β1的普通培養(yǎng)液培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞6天;④10 ng/ml組:含10 ng/ml TGF-β1的普通培養(yǎng)液培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞6天;⑤10 ng/ml+Runx3-si RNA病毒組:待病毒轉(zhuǎn)染72小時(shí)后,再加含10 ng/ml TGF-β1的普通培養(yǎng)液培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞6天。2.應(yīng)用q RT-PCR法分別測(cè)定各組細(xì)胞Runx3、血小板-內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子(CD31)、α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)、SNAILm RNA的表達(dá);Western blot法測(cè)定各組細(xì)胞Runx3、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、SNAIL,(內(nèi)皮型一氧化氮合酶)e NOS蛋白的表達(dá)并比較。同時(shí)運(yùn)用ELISA檢測(cè)試劑盒檢驗(yàn)(血管內(nèi)皮生長因子)VEGF。結(jié)果1.成功構(gòu)建Runx3-si RNA慢病毒載體,病毒感染72h,感染復(fù)數(shù)(MOI)=30時(shí),病毒轉(zhuǎn)染效率最強(qiáng)。2.q RT-PCR法檢測(cè)各組細(xì)胞CD31m RNA、α-SMA m RNA、SNAILm RNA、Runx3m RNA表達(dá),結(jié)果顯示:與Control組相比,添加1ng/ml TGF-β1組血管內(nèi)皮細(xì)胞CD31m RNA表達(dá)下調(diào)(P0.05)、α-SMAm RNA表達(dá)上調(diào)(P0.05)、SNAILm RNA表達(dá)上調(diào)(P0.05)、Runx3m RNA表達(dá)上調(diào)(P0.05);添加5ng/ml TGF-β1組血管內(nèi)皮細(xì)胞CD31m RNA表達(dá)下調(diào)(P0.05)、α-SMAm RNA表達(dá)上調(diào)(P0.05)、SNAILm RNA表達(dá)上調(diào)(P0.05)、Runx3m RNA表達(dá)上調(diào)(P0.01);添加10ng/ml TGF-β1組血管內(nèi)皮細(xì)胞CD31m RNA表達(dá)下調(diào)(P0.05)、α-SMAm RNA表達(dá)上調(diào)(P0.05)、SNAILm RNA表達(dá)上調(diào)(P0.01)、Runx3m RNA表達(dá)上調(diào)(P0.01)。與10ng/ml TGF-β1組相比,添加Runx3-si RNA病毒相應(yīng)組血管內(nèi)皮細(xì)胞CD31m RNA表達(dá)上調(diào)(P0.05)、α-SMAm RNA表達(dá)下調(diào)(P0.05)、SNAILm RNA表達(dá)下調(diào)(P0.05)、Runx3m RNA表達(dá)下調(diào)(P0.05)。3.Western blot法檢測(cè)各組細(xì)胞Runx3、SNAIL、e NOS、p-AKT蛋白表達(dá),結(jié)果顯示:與Control組相比,添加1ng/ml TGF-β1組血管內(nèi)皮細(xì)胞Runx3表達(dá)上調(diào)(P0.05)、SNAIL表達(dá)上調(diào)(P0.05)、e NOS表達(dá)下調(diào)(P0.05)、p-AKT表達(dá)上調(diào)(P0.05);添加5ng/ml TGF-β1組血管內(nèi)皮細(xì)胞Runx3表達(dá)上調(diào)(P0.01)、SNAIL表達(dá)上調(diào)(P0.05)、e NOS表達(dá)下調(diào)(P0.05)、p-AKT表達(dá)上調(diào)(P0.05);添加10ng/ml TGF-β1組血管內(nèi)皮細(xì)胞Runx3表達(dá)上上調(diào)(P0.01)、SNAIL表達(dá)上調(diào)(P0.01)、e NOS表達(dá)下調(diào)(P0.05)、p-AKT表達(dá)上調(diào)(P0.05)。與10ng/ml TGF-β1組相比,添加Runx3-si RNA病毒相應(yīng)組血管內(nèi)皮細(xì)胞Runx3表達(dá)下調(diào)(P0.01)、SNAIL表達(dá)下調(diào)(P0.01)、e NOS表達(dá)上調(diào)(P0.01)、p-AKT表達(dá)上調(diào)(P0.01)。4.ELISA檢測(cè)試劑盒檢驗(yàn)VEGF表達(dá),結(jié)果顯示:與Control組相比,添加1ng/ml TGF-β1組血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF表達(dá)上調(diào)(P0.05);添加5ng/ml TGF-β1組血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF表達(dá)上調(diào)(P0.05);添加10ng/ml TGF-β1組血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF表達(dá)上調(diào)(P0.05)。與10ng/ml TGF-β1組相比,添加Runx3-si RNA病毒相應(yīng)組血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF表達(dá)上調(diào)(P0.05)。結(jié)論1.TGF-β1可以引起血管內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化,Runx3參與其中。2.下調(diào)Runx3的表達(dá)能夠減輕內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化。3.下調(diào)Runx3的表達(dá)能夠降低SNAIL的表達(dá),增加e NOS、VEGF的表達(dá),并激活A(yù)KT,可能參與減輕內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：TGF-β1 心肌纖維化 內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化 Runx3
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R541
【目錄】：

• 摘要3-5
• abstract5-11
• 第1章 引言11-13
• 第2章 材料與方法——實(shí)驗(yàn)材料13-27
• 2.1 實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞13
• 2.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器13-14
• 2.3 主要儀器14-15
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法15-26
• 2.4.1 器材的滅菌、去RNA酶處理15
• 2.4.2 相關(guān)液體的配制15-17
• 2.4.3 人血管內(nèi)皮細(xì)胞株(CRL-1730人血管內(nèi)皮細(xì)胞)的體外培養(yǎng)17-19
• 2.4.4 實(shí)驗(yàn)分組19
• 2.4.5 qRT-PCR檢測(cè)各組血管內(nèi)皮RUNX3、SNAIL、CD31、α-SMA等mRNA的表達(dá)19-21
• 2.4.6 Western blot Western blot檢測(cè)各組RUNX3、p-AKT、SNAIL、eNOS蛋白的表達(dá)21-24
• 2.4.7. 血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）ELISA檢測(cè)試劑盒檢驗(yàn)VEGF水平24-26
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析26-27
• 第3章 結(jié)果27-39
• 3.1 人血管內(nèi)皮細(xì)胞（CRL-1730細(xì)胞株）生長特點(diǎn)27
• 3.2 Runx3-siRNA病毒感染CRL-1730細(xì)胞株結(jié)果27-30
• 3.3 qRT-PCR檢測(cè)各組CRL-1730細(xì)胞Runx3 mRNA的表達(dá)30-31
• 3.4 Western blot檢測(cè)各組CRL-1730細(xì)胞Runx3蛋白的表達(dá)31-32
• 3.5 qRT-PCR檢測(cè)各組CRL-1730細(xì)胞CD31 mRNA的表達(dá)32-33
• 3.6 qRT-PCR檢測(cè)各組CRL-1730細(xì)胞 α-SMA mRNA的表達(dá)33-34
• 3.7 qRT-PCR檢測(cè)各組CRL-1730細(xì)胞SNAILmRNA的表達(dá)34-35
• 3.8 Western blot檢測(cè)各組CRL-1730細(xì)胞SNAIL蛋白的表達(dá)35-36
• 3.9 Western blot檢測(cè)各組CRL-1730細(xì)胞p-AKT蛋白的表達(dá)36-37
• 3.10 Western blot檢測(cè)各組CRL-1730細(xì)胞eNOS蛋白的表達(dá)37-38
• 3.11血管內(nèi)皮生長因子VEGF的檢測(cè)水平38-39
• 第4章 討論39-43
• 4.1 TGF-β1 誘導(dǎo)內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化39
• 4.2 Runx3在血管內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化中的作用39-40
• 4.3 Runx3影響血管內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化中的可能機(jī)制40-43
• 4.3.1 Runx3對(duì)SNAIL的影響在內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的作用40-41
• 4.3.2 Runx3對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響在內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的作用41-42
• 4.3.3 Runx3對(duì)AKT的影響在內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的作用。42-43
• 第5章 結(jié)論與展望43-44
• 5.1 結(jié)論43
• 5.2 展望與不足43-44
• 致謝44-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果49-50
• 綜述50-55
• 參考文獻(xiàn)53-55

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蘇震,鄭法雷,李艷,段琳;轉(zhuǎn)化生長因子-β1和表皮生長因子在誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中的作用[J];中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2002年05期

2 梅煜明,張t，

本文編號(hào)：1024323