本文關(guān)鍵詞：槲皮素及1-5-O-槲皮素糖苷對(duì)高糖引起內(nèi)皮細(xì)胞損傷保護(hù)作用的對(duì)比研究

  更多相關(guān)文章： 槲皮素 1-5-O-槲皮素糖苷 內(nèi)皮細(xì)胞 高糖損傷氧化應(yīng)激

【摘要】：目的:1、構(gòu)建內(nèi)皮細(xì)胞高糖損傷模型并檢測(cè)氧化應(yīng)激的相關(guān)指標(biāo)。2、探索槲皮素(Quercetin,Qu)和1-5-O-槲皮素糖苷(1-5-O-Quercetin Glycoside,1-5-O-QG)能否通過降低氧化應(yīng)激水平來減輕高糖引起內(nèi)皮細(xì)胞損傷的程度并比較兩者的差異。方法:體外培養(yǎng)人血管內(nèi)皮細(xì)胞,選取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的對(duì)數(shù)期細(xì)胞入組。實(shí)驗(yàn)分4組:①低糖對(duì)照組(葡萄糖濃度為5.5 mmol/L+24.5mmol/L甘露醇);②高糖損傷組(葡萄糖濃度為30mmo1/L);③高糖+Qu組(30mmol/L葡萄糖+50μmol/LQu);④高糖+1-5-O-QG組(30mmol/L葡萄糖+50μmol/L1-5-O-QG);在高糖處理前2h加入藥物,培養(yǎng)48小時(shí)后對(duì)各組進(jìn)行以下方面檢測(cè):CCK-8檢測(cè)各組血管內(nèi)皮細(xì)胞活力,測(cè)定血管內(nèi)皮細(xì)胞的乳酸脫氫酶(LDH)活性、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)水平,DCF-DA法檢測(cè)各組細(xì)胞ROS水平,qRT-PCR測(cè)定還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶4(NADPH oxidase4,NOX4)mRNA、SODmRNA及CATm RNA的水平。結(jié)果:(1)血管內(nèi)皮細(xì)胞活力高糖組細(xì)胞活力明顯低于低糖對(duì)照組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。Qu干預(yù)組及1-5-O-QG干預(yù)組細(xì)胞活力均較高糖組升高,且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但兩組細(xì)胞活力差異對(duì)比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)LDH活性與低糖組比較,高糖組的細(xì)胞LDH活性高(P0.05),Qu組及1-5-O-QG組的細(xì)胞LDH活性均較高糖組下降,且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但兩組細(xì)胞LDH活性差異對(duì)比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。說明Qu及1-5-O-QG均能降低高糖導(dǎo)致的LDH活性增高,且兩者作用程度無差異。(3)SOD活性與低糖組比較,高糖組的細(xì)胞SOD的活性低(P0.05),Qu組及1-5-O-QG組細(xì)胞的sod的活性均較高糖組升高,且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),但兩組細(xì)胞sod活性差異對(duì)比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。說明qu及1-5-o-qg均能緩和高糖導(dǎo)致的sod活性下降,且兩者作用程度無差異。(4)gsh-px活性與低糖組比較,高糖組細(xì)胞的谷胱甘肽過氧化物酶活性低(p0.05),qu組及1-5-o-qg組細(xì)胞的谷胱甘肽過氧化物酶活性均較高糖組升高(p0.05),但兩組細(xì)胞gsh-px活性差異對(duì)比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。說明qu及1-5-o-qg均能緩和高糖導(dǎo)致的谷胱甘肽過氧化物酶活性的降低,且兩者作用程度無明顯差異。(5)mda的生成水平與低糖組比較,高糖組細(xì)胞的mda的生成水平高(p0.05),qu組及1-5-o-qg組細(xì)胞mda的生成水平均較高糖組下降,且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),但兩組細(xì)胞mda生成水平差異對(duì)比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。說明qu及1-5-o-qg均能降低高糖導(dǎo)致的mda生成水平升高,但兩者作用程度無明顯差異。(6)dcf-da法檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)活性氧水平結(jié)果:與低糖組比較,高糖組細(xì)胞的活性氧水平增高(p0.05),qu組及1-5-o-qg組細(xì)胞的活性氧水平均較高糖組降低(p0.05),但兩組細(xì)胞內(nèi)活性氧水平差異對(duì)比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。說明qu及1-5-o-qg均能緩和高糖導(dǎo)致的活性氧水平升高,且兩者作用程度無明顯差異。(7)sodmrna的水平與低糖組比較,高糖組的細(xì)胞sodmrna的水平下調(diào)(p0.05),qu組及1-5-o-qg組細(xì)胞sodmrna的水平均比高糖組上調(diào)(p0.05),但兩者sodmrna的表達(dá)量無明顯差異(p0.05)。qu及qg均能降低高糖導(dǎo)致的細(xì)胞sodmrna水平下調(diào)且兩者作用無明顯差異。(8)catmrna的水平與低糖組比較,高糖組的細(xì)胞catmrna的水平下調(diào)(p0.05),qu組及1-5-o-qg組細(xì)胞catmrna的水平比高糖組上調(diào)(p0.05),但兩者catmrna的水平無明顯差異(p0.05)。qu及1-5-o-qg均能緩和高糖導(dǎo)致的細(xì)胞catmrna水平的下調(diào)且兩者作用無明顯差異。(9)nox4mrna的水平與低糖組比較,高糖組的細(xì)胞NOX4mRNA的水平上調(diào)(P0.05),Qu組及1-5-O-QG組細(xì)胞NOX4mRNA的水平均較高糖組下調(diào)(P0.05),但兩者NOX4mRNA的水平無明顯差異(P0.05)。說明Qu及1-5-O-QG均能降低高糖導(dǎo)致的細(xì)胞NOX4mRNA水平的上調(diào)且兩者作用無明顯差異。結(jié)論:①槲皮素及1-5-O-槲皮素糖苷均能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)氧化-抗氧化系統(tǒng)的平衡起到保護(hù)高糖引起內(nèi)皮細(xì)胞損傷的作用。②Qu及1-5-O-QG的抗氧化清除氧自由基的能力無明顯差異。
【關(guān)鍵詞】：槲皮素 1-5-O-槲皮素糖苷 內(nèi)皮細(xì)胞 高糖損傷氧化應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R543.5
【目錄】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-12
• 第1章 前言12-14
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料和方法14-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料14-15
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞14
• 2.1.2 主要試劑和藥品14-15
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)主要儀器15
• 2.2 試驗(yàn)方法15-22
• 2.2.1 器材的滅菌、去RNA酶處理15
• 2.2.2 相關(guān)液體的配制15-16
• 2.2.3 血管內(nèi)皮細(xì)胞株(EC-304血管內(nèi)皮細(xì)胞)的的體外培養(yǎng)16-17
• 2.2.4 實(shí)驗(yàn)分組17-18
• 2.2.5 CCK-8 檢測(cè)細(xì)胞活力18
• 2.2.6 LDH試劑盒測(cè)定細(xì)胞的LDH活性18
• 2.2.7 SOD試劑盒測(cè)定細(xì)胞的總SOD活性18-19
• 2.2.8 GSH-Px試劑盒測(cè)定細(xì)胞的GSH-PX活性19
• 2.2.9 MDA試劑盒測(cè)定細(xì)胞的MDA水平19
• 2.2.10 DCF-DA法檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)活性氧水平19
• 2.2.11 qRT-PCR檢測(cè)各組血管內(nèi)皮NOX4、SOD、CAT等mRNA的水平19-22
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法22-23
• 第3章 結(jié)果23-34
• 3.1 血管內(nèi)皮細(xì)胞（EC304）生長(zhǎng)特點(diǎn)23
• 3.2 CCK-8 檢測(cè)細(xì)胞活力23-24
• 3.3 細(xì)胞LDH活性檢測(cè)24-25
• 3.4 細(xì)胞SOD活性檢測(cè)25-26
• 3.5 細(xì)胞GSH-Px活性檢測(cè)26-27
• 3.6 細(xì)胞MDA水平27-28
• 3.7 DCF-DA法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS水平檢測(cè)28-29
• 3.8 qRT-PCR檢測(cè)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平29-34
• 3.8.1 SODmRNA水平29-31
• 3.8.2 CATmRNA水平31-32
• 3.8.3 NOX4mRNA水平32-34
• 第4章 討論34-38
• 第5章 結(jié)論38-39
• 5.1 結(jié)論38
• 5.2 不足與展望38-39
• 致謝39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 綜述44-48
• 參考文獻(xiàn)47-48

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本文編號(hào)：1012093