本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療大鼠肝硬化的實(shí)驗研究

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【摘要】：目的:以標(biāo)準(zhǔn)的肝硬化大鼠為模型,探索同種異體的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植是否對肝部分切除術(shù)(Partial hepatectomy,PH)后的大鼠殘肝再生有影響,以及BMSCs移植是否對未實(shí)施PH的肝硬化大鼠有治療作用,并觀察移植的BMSCs在肝內(nèi)的定植和歸巢情況。方法:1.復(fù)合因素法(40%CCl4橄欖油溶液腹腔注射、10%酒精含量的白酒溶液為唯一飲用水、高脂低蛋白飼料)建立大鼠肝硬化模型,以肝臟組織學(xué)切片判斷肝硬化建模是否成功,生化和IV型膠原(Collegen IV,IV-Co)檢測了解成模時大鼠整體情況。2.手術(shù)獲取2周齡大鼠的骨髓,全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)BMSCs,流式細(xì)胞儀和免疫熒光檢測BMSCs表面抗原(CD29、CD34、CD44、CD90),體外對細(xì)胞進(jìn)行CM-Dil標(biāo)記,檢測標(biāo)記率和標(biāo)記后細(xì)胞成活率。3.成模大鼠隨機(jī)分為:A組,肝部分切除術(shù)+BMSCs移植組(n=18):行38%肝切除+術(shù)中門靜脈移植BMSCs lml(1×106個);B組,肝部分切除術(shù)組(n=18):行38%肝切除+術(shù)中門靜脈移植PBS lml;C組,細(xì)胞移植組(n=24):開腹門靜脈移植BMSCs lml(1×106個);D組,對照組(n=23):開腹門靜脈移植PBS lml;術(shù)后普通飲食,C、D組大鼠分別于術(shù)后1天、3天、7天、14天、1月、2月各組各隨機(jī)處死3至4只大鼠,行血液肝功能及IV-Co檢測,肝組織切片HE及Masson染色了解移植后組織病理改變,肝臟冰凍切片了解移植的bmscs肝內(nèi)定植和分布情況。結(jié)果:1.復(fù)合因素法誘導(dǎo)8周大鼠肝硬化模型建立,he染色及masson染色均見肝內(nèi)正常肝小葉結(jié)構(gòu)破壞,滿布纖維條索,假小葉形成。血清檢測示轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素及iv-co升高,白蛋白降低。2.分離培養(yǎng)的同種異體sd大鼠的bmscs生長良好、形態(tài)均一,呈長梭形或不規(guī)則形,以魚鱗或旋渦狀生長,免疫熒光檢測cd34陽性,cd44陰性,流式細(xì)胞術(shù)檢測示cd29、cd90、cd44陽性率分別為94.3%、97.5%和2.39%。細(xì)胞cm-dil標(biāo)記率為99.8%,標(biāo)記后細(xì)胞的存活率為96.7%。3.a、b組大鼠于術(shù)后短期內(nèi)全部死亡,主要死因為腹腔嚴(yán)重粘連導(dǎo)致的腸梗阻。c組bmscs移植術(shù)后2周alt、ast、alb及iv-co開始明顯改善(p0.05),術(shù)后1月tbil值開始明顯下降(p0.05),較d組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)。組織病理學(xué)示:細(xì)胞移植術(shù)后,c組肝細(xì)胞壞死、脂肪變性及纖維化程度等逐步改善,至術(shù)后2月肝纖維化laennec評分相比較差異有顯著性(p0.05)。4.c組大鼠bmscs移植術(shù)后1天,示蹤提示熒光主要出現(xiàn)在肝內(nèi)匯管區(qū)。術(shù)后1周,熒光主要出現(xiàn)在纖維隔附近。術(shù)后2周,熒光主要出現(xiàn)在肝小葉內(nèi)部。術(shù)后1月,熒光散在出現(xiàn)在肝小葉內(nèi)部。術(shù)后2月,熒光散在出現(xiàn)在肝小葉內(nèi)部,但強(qiáng)度減弱。d組大鼠所有時間點(diǎn)均未見熒光。結(jié)論:1.同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植能改善肝硬化大鼠的肝功能和減輕肝臟的纖維化程度。2.CM-Dil標(biāo)記技術(shù)能示蹤干細(xì)胞移植進(jìn)入體內(nèi)后的分布和研究干細(xì)胞的歸巢。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 肝硬化 肝纖維化 細(xì)胞移植 細(xì)胞治療
【學(xué)位授予單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575.2
【目錄】：

• 致謝4-5
• 摘要5-8
• Abstract8-13
• 前言13-16
• 第一部分 大鼠肝硬化模型的建立16-30
• 材料16-17
• 方法17-20
• 結(jié)果20-26
• 討論26-29
• 小結(jié)29-30
• 第二部分 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的制備30-42
• 材料30-31
• 方法31-34
• 結(jié)果34-38
• 討論38-41
• 小結(jié)41-42
• 第三部分 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植42-60
• 材料42
• 方法42-46
• 結(jié)果46-55
• 討論55-59
• 小結(jié)59-60
• 全文結(jié)論60-61
• 參考文獻(xiàn)61-66
• 綜述：干細(xì)胞移植治療肝硬化的研究進(jìn)展66-77
• 參考文獻(xiàn)73-77
• 附錄77-78
• 個人簡歷78

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本文編號：926514