本文關(guān)鍵詞：化合物抑制體內(nèi)外巨噬細(xì)胞活化釋放HMGB1及其機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 巨噬細(xì)胞 RAW264.7 LPS 肝衰竭 高遷移率族蛋白1 白藜蘆醇 紫草素

【摘要】：乙型肝炎病毒能引起人類乙型病毒性肝炎,采取早期干預(yù)措施減輕肝炎,對(duì)于降低“病死率”具有重要意義。巨噬細(xì)胞通過(guò)釋放促炎細(xì)胞因子在炎癥中起著重要作用。高遷移率族蛋白1(HMGB1)以主動(dòng)方式從活化巨噬細(xì)胞釋放出去,是一個(gè)重要晚期致炎因子。 本課題旨在用LPS活化巨噬細(xì)胞體外模型篩選較優(yōu)抗炎化合物,進(jìn)一步研究其抗炎作用是否與HMGB1有關(guān)并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行探析。本論文分為以下四個(gè)部分： 第一部分較優(yōu)抗炎化合物的篩選 目的從40種化合物中體外篩選較優(yōu)抗炎化合物。 方法RAW264.7細(xì)胞經(jīng)不同濃度的LPS和/或化合物處理24小時(shí)后,用ELISA或Griess法檢測(cè)上清液中NO、TNF-α和/或IL-6等指標(biāo)水平,確定LPS劑量并篩選較優(yōu)抗炎化合物。 結(jié)果1、在合適LPS劑量范圍內(nèi),暴露于LPS的RAW264.7細(xì)胞中NO、TNF-α和IL-6顯著升高,且呈劑量依賴性。2、篩選出白藜蘆醇(Res)和紫草素(Shik)等7種較優(yōu)抗炎化合物,均能顯著下調(diào)NO和TNF-α表達(dá)。3、Res和Shik劑量依賴地下調(diào)NO和TNF-α表達(dá)。 結(jié)論1、篩選出7種較優(yōu)抗炎化合物；2、Res和Shik具有較好劑量依賴抗炎效果。 第二部分白藜蘆醇(Res)減輕炎癥作用并減少RAW264.7細(xì)胞中LPS誘導(dǎo)的HMGB1和TLR4的表達(dá)。 目的研究Res抗炎作用及機(jī)制。 方法暴露于不同劑量LPS24小時(shí)的RAW264.7細(xì)胞,同時(shí)經(jīng)Res或不經(jīng)Res處理后用ELASA或Griess法測(cè)定上清液中TNF-α、IL-6、NO水平,并用qRT-PCR及Western Blot試驗(yàn)檢測(cè)3MGB1和TLR4表達(dá)。 結(jié)果1、Res顯著減少IL-6, NO和TNF-α表達(dá)。2、Res顯著減少HMGB1和TLR4表達(dá)。 結(jié)論1、Res能阻斷LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞的炎癥效應(yīng)。2、HMGB1表達(dá)下調(diào)是Res的作用機(jī)制之一。3、Res也可影響HMGB1-TLR4信號(hào)通路。第三部分紫草素(Shik)通過(guò)IFN-β和NF-κB信號(hào)通路抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞H[MGB1的釋放。目的研究Shik的抗炎作用及機(jī)制。 方法暴露于不同劑量LPS24小時(shí)的RAW264.7細(xì)胞,同時(shí)經(jīng)Shik或不經(jīng)Shik處理后用ELISA或Griess法測(cè)定上清液中NF-α、IL-6、NO水平,并用qRT-PCR、 ELISA或Western Blot試驗(yàn)檢測(cè)HMGB1、IFN-0和細(xì)胞核對(duì)細(xì)胞質(zhì)NF-K B比率表達(dá)。 結(jié)果1、Shik能顯著減少IL-6, NO和TNF-α表達(dá)。2、Shik顯著減少LPS組HMGB1、IFN-β表達(dá)和細(xì)胞核對(duì)細(xì)胞質(zhì)NF-κB蛋白表達(dá)比率。3、IFN-β信號(hào)分子JAK和NF-κB抑制劑顯著減少HMGB1表達(dá)。 結(jié)論1、Shik拮抗LPS引起RAW264.7細(xì)胞炎癥應(yīng)答；2、下調(diào)HMGB1表達(dá)是Shik抗炎機(jī)制之一,這與IFN-β和NF-κB信號(hào)通路有關(guān)。 第四部分白藜蘆醇(Res)和紫草素(Shik)通過(guò)調(diào)節(jié)HMGB1發(fā)揮抗炎作用的體內(nèi)研究 目的研究Res和Shik在肝衰竭小鼠抗炎作用。 方法用HE染色觀察半乳糖胺(GalN)/LPS急性肝衰竭小鼠肝損傷情況,檢測(cè)血清ALT/AST,和用ELISA檢測(cè)IMGB1水平。 結(jié)果1、GalN/LPS組ALT/AST顯著升高,且肝損傷明顯。2、與模型組相比,Res治療組ALT/AST未顯著降低,且肝損傷明顯。3、Shik治療組ALT/AST顯著降低,且肝損傷減輕,但小鼠血清HMGB1水平無(wú)顯著變化。 結(jié)論1、成功建立肝衰竭小鼠模型。2、Res無(wú)顯著體內(nèi)抗炎作用。3、Sh ik具有一定體內(nèi)抗炎作用,但未顯著下調(diào)血清HMGB1水平。
【關(guān)鍵詞】：巨噬細(xì)胞 RAW264.7 LPS 肝衰竭 高遷移率族蛋白1 白藜蘆醇 紫草素
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R512.62
【目錄】：

• 致謝5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 插圖和附表清單12-14
• 英文縮寫注釋表14-18
• 1 研究背景18-21
• 2 較優(yōu)抗炎化合物的篩選21-38
• 2.1 前言21-22
• 2.2 材料與試劑22-23
• 2.3 實(shí)驗(yàn)儀器23
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法23-27
• 2.5 統(tǒng)計(jì)方法27
• 2.6 結(jié)果27-34
• 2.7 討論34-37
• 2.8 結(jié)論37-38
• 3 白藜蘆醇減輕炎癥作用并減少RAW264.7細(xì)胞中LPS誘導(dǎo)的HMGB1和TLR4的表達(dá)38-62
• 3.1 前言38-39
• 3.2 材料與試劑39-41
• 3.3 實(shí)驗(yàn)儀器41-42
• 3.4 實(shí)驗(yàn)方法42-51
• 3.5 統(tǒng)計(jì)方法51
• 3.6 結(jié)果51-59
• 3.7 討論59-60
• 3.8 結(jié)論60-62
• 4 紫草素通過(guò)IFN-B和NF-KB信號(hào)通路抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞HMGB1的釋放62-82
• 4.1 前言62
• 4.2 材料與試劑62-65
• 4.3 實(shí)驗(yàn)儀器65-66
• 4.4 實(shí)驗(yàn)方法66-69
• 4.5 統(tǒng)計(jì)方法69
• 4.6 結(jié)果69-79
• 4.7 討論79-81
• 4.8 結(jié)論81-82
• 5 白藜蘆醇和紫草素通過(guò)調(diào)節(jié)HMGB1發(fā)揮抗炎作用的體內(nèi)研究82-93
• 5.1 前言82-83
• 5.2 材料與試劑83-84
• 5.3 實(shí)驗(yàn)儀器84-85
• 5.4 實(shí)驗(yàn)方法85-86
• 5.5 統(tǒng)計(jì)方法86
• 5.6 結(jié)果86-91
• 5.7 討論91-92
• 5.8 結(jié)論92-93
• 6 全文結(jié)論93-94
• 參考文獻(xiàn)94-105
• 綜述105-141
• 參考文獻(xiàn)131-141
• 作者簡(jiǎn)歷及在讀期間所取得的科研成果141-144

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

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本文編號(hào)：926422