本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-34a在非酒精性脂肪性肝病中的作用及機制研究

  更多相關(guān)文章： 非酒精性脂肪性肝病 miR-34a PPARα 脂質(zhì)代謝 AMPKⅣ

【摘要】：背景與目的： 近年來隨著人們生活水平的提高,非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)的患病率逐年增加,成為常見的慢性肝病之一。而NAFLD發(fā)生發(fā)展機制目前尚未完全明確。近年來的研究發(fā)現(xiàn),微小RNA (microRNA, miRNA)與肝臟疾病關(guān)系密切,我們前期發(fā)現(xiàn)miR-34a在兩種NAFLD模型肝臟中表達均顯著上調(diào),提示miR-34a可能在NAFLD發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。發(fā)掘并分析miR-34a的作用靶標(biāo),對于揭示該miRNA的具體調(diào)節(jié)機制有著重要的作用。本研究以定量PCR (qPCR)的方法驗證了miR-34a在NAFLD細胞和小鼠模型中的表達情況,并采用RNA干擾(RNAi)技術(shù)研究miR-34a在NAFLD中的生物學(xué)功能。同時,對所預(yù)測的miR-34a作用靶點PPARa進行驗證。 方法： 1、采用游離脂肪酸(free fatty acid, FFA)誘導(dǎo)L02細胞建立NAFLD細胞模型,用高脂飲食(high fat diet, HFD)喂養(yǎng)C57BL/6小鼠構(gòu)建NAFLD動物模型,采用qPCR法測定miR-34a在L02細胞及C57BL/6小鼠肝臟中的表達變化； 2、通過體外轉(zhuǎn)染niR-34a inhibitor或小鼠尾靜脈注射miR-34a基因敲減慢病毒載體的方式來進行功能實驗。以油紅O染色、HE染色、生化分析探討miR-34a表達抑制對脂變及炎癥程度的影響； 3、結(jié)合在線數(shù)據(jù)庫進行miR-34a靶基因的預(yù)測,并利用Western blot等進行靶蛋白表達量的驗證,同時利用熒光素酶報告系統(tǒng)對miR-34a的作用靶序列進行鑒定。進一步運用Western blot、 qPCR等方法觀察miR-34a表達變化后其靶標(biāo)基因PPARa下游脂變相關(guān)基因的表達變化； 4、進一步運用PPARa siRNA探討PPARa表達抑制對離體肝細胞脂變程度的影響,運用Western blot. qPCR等方法觀察PPARa表達變化后其下游脂變相關(guān)基因的表達變化。 結(jié)果： 1、在NAFLD細胞和小鼠肝組織中miR-34a的表達水平顯著上調(diào)； 2、通過對L02細胞轉(zhuǎn)染miR-34a inhibitor或小鼠尾靜脈注射miR-34a基因敲減慢病毒載體抑制miR-34a的表達,L02細胞胞漿及肝臟組織中脂滴沉積的程度得到顯著改善,甘油三酯的含量明顯下降,小鼠肝重/體重比值顯著下降,小鼠血清中AST水平顯著降低； 3、采用在線數(shù)據(jù)庫預(yù)測發(fā)現(xiàn)PPARa是miR-34a可能的調(diào)控靶基因。我們在L02細胞及C57BL/6小鼠中檢測到PPARa在miR-34a表達抑制后其基因及蛋白水平均有上調(diào)。進一步熒光素酶報告系統(tǒng)分析證實PPARa是miR-34a的直接作用靶點,其3’-UTR中存在miR-34a調(diào)控的作用序列. PPARa的下游脂變相關(guān)基因的表達隨著PPARa的改變而改變。另外,通過抑制miR-34a的表達后,可以激活能量代謝通路上關(guān)鍵蛋白AMPK的表達； 4、通過對細胞轉(zhuǎn)染PPARa siRNA抑制細胞中PPARa的表達,可以使細胞胞漿中脂滴沉積的程度明顯加重,甘油三酯的含量也顯著升高,PPARa的下游脂變相關(guān)基因的表達隨著PPARa的改變而改變。 結(jié)論： miR-34a的表達與NAFLD密切相關(guān),miR-34a的表達上調(diào)參與NAFLD的脂質(zhì)代謝過程,miR-34a可能通過靶向PPARa成為NAFLD的潛在治療靶點。
【關(guān)鍵詞】：非酒精性脂肪性肝病 miR-34a PPARα 脂質(zhì)代謝 AMPKⅣ
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R575
【目錄】：

• 致謝5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 英文縮寫詞對照表12-16
• 1 引言16-22
• 1.1 miRNA簡介16-17
• 1.2 miRNA的生物合成和功能17-18
• 1.3 miRNA在NAFLD中的意義18-20
• 1.4 miR-34a與NAFLD20-22
• 2 miR-34a在NAFLD模型中的表達情況22-38
• 2.1 前言22-23
• 2.2 材料與方法23-31
• 2.3 結(jié)果31-35
• 2.4 討論35-37
• 2.5 結(jié)論37-38
• 3 miR-34a對L02胞和C57BL/6小鼠肝臟脂變及炎癥的影響38-59
• 3.1 前言38-39
• 3.2 材料與方法39-49
• 3.3 結(jié)果49-56
• 3.4 討論56-58
• 3.5 結(jié)論58-59
• 4 miR-34a的靶基因及影響NAFLD的分子機制探討59-88
• 4.1 前言59-60
• 4.2 材料與方法60-73
• 4.3 結(jié)果73-84
• 4.4 討論84-86
• 4.5 結(jié)論86-88
• 5 總結(jié)與展望88-89
• 6 參考文獻89-95
• 綜述95-112
• 摘要95
• abstract95-106
• 5 參考文獻106-112
• 作者簡歷及在學(xué)期間參與課題和發(fā)表論文11

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 ;非酒精性脂肪性肝病診療指南[J];中華肝臟病雜志;2006年03期

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本文編號：849689