本文關(guān)鍵詞：SREBP-1c在白藜蘆醇預(yù)防大鼠非酒精性脂肪肝發(fā)生發(fā)展中的作用

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【摘要】：非酒精性脂肪肝病(NAFLD),包含一系列從簡單的脂肪變性到非酒精性脂肪性肝炎等臨床癥狀,甚至肝硬化[1,2]。在西方國家,NAFLD占據(jù)大多數(shù)的慢性肝病,有近30%的成年人和大多數(shù)肥胖人患有[3,4]。雖然大量的研究已經(jīng)進(jìn)行,但NAFLD的具體病理原因仍然在很大程度上未知[5]。一種改進(jìn)的“二次打擊”模式已經(jīng)總結(jié)出NAFLD的引發(fā)和進(jìn)展,其中胰島素抵抗被認(rèn)為是對(duì)肝臟的“一次打擊”,并導(dǎo)致接下來的打擊,包括氧化應(yīng)激,炎癥,纖維化和細(xì)胞凋亡的發(fā)生[6]。經(jīng)全面匯總分析[7]和詳盡的審查[8],NAFLD的治療仍存在爭議。各種藥理學(xué)方法已被探索,主要側(cè)重于減輕重量,或者通過單純的生活方式干預(yù)或與藥物治療相結(jié)合。然而,除了持續(xù)減重,沒有其他單獨(dú)的介入已經(jīng)證明了對(duì)NAFLD的治療有明確的顯著療效[9,10],這突出表明,需要新的方法用于NAFLD的預(yù)防和治療。白藜蘆醇(3,4',5-三羥基二苯乙烯)是一種自然的酚類化合物,存在于某些水果、蔬菜和飲料中,包含紅葡萄酒。已有報(bào)告顯示白藜蘆醇具有很多的生物健康益處,包括抗氧化、抗衰老、抗癌癥、誘導(dǎo)自噬作用以及改善脂質(zhì)代謝[11,12]。在最近的動(dòng)物研究中,白藜蘆醇顯示出很有前景的效果在于保護(hù)肝臟抵抗高脂飲食誘導(dǎo)的脂質(zhì)積聚[13-16]。其作用機(jī)制可能是通過單磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)抑制脂肪生成的相關(guān)基因(如固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1c(SREBP-1c)和脂肪酸合成酶(FAS))來預(yù)防和改善肝臟脂肪變性,最后,降低肝脂肪酸利用率。在NAFLD的這些動(dòng)物模型中,動(dòng)物發(fā)展為肝臟炎癥,白藜蘆醇的抗炎潛力被認(rèn)為是該作用效果的核心機(jī)制。然而,更多的可能機(jī)制還是一個(gè)未知數(shù)。在本研究中,通過提高肝脂質(zhì)積聚的大鼠模型,我們探索白藜蘆醇在防治NAFLD方面的潛力,并深入探討白藜蘆醇對(duì)AMPK、SIRT1、SREBP-1c、FAS等基因表達(dá)的影響以及對(duì)轉(zhuǎn)錄因子SREBP-1c的轉(zhuǎn)錄活性的影響。8周齡雄性SD大鼠110只隨機(jī)分為4組:基礎(chǔ)飼料對(duì)照組((C1,n=20),高脂膳食組(HF1,n=70),高脂膳食加每天每kg體重50 mg RSV組(HF1R50,n=10)和高脂膳食加每天每kg體重100 mg RSV組(HF1R100,n=10)。8周后,每組十只大鼠實(shí)施安樂死并取出肝臟和血液做后續(xù)分析。剩余HF1組大鼠被隨機(jī)分成六組,每組十只大鼠:基礎(chǔ)飼料對(duì)照組(hfc2),高脂膳食組(hf2),高脂膳食加每天每kg體重50mgrsv組(hf2r50),高脂膳食加每天每kg體重100mgrsv組(hf2r100),基礎(chǔ)飼料加每天每kg體重50mgrsv組(hfc2r50),基礎(chǔ)飼料加每天每kg體重100mgrsv組(hfc2r100)。繼續(xù)喂養(yǎng)8周后,所有大鼠實(shí)施安樂死并取出肝臟和血液做后續(xù)分析。每周稱量動(dòng)物體重和食物消耗量,干預(yù)后檢測血清和肝臟中脂質(zhì)含量,肝臟組織he染色觀察脂肪變情況,westernblot檢測pampk、sirt1、srebp-1c、fas的蛋白表達(dá)以及實(shí)時(shí)定量pcr分析srebp-1c和fasmrna表達(dá),chip試驗(yàn)分析fas啟動(dòng)子序列sre與srebp-1c的結(jié)合程度。結(jié)果:1.rsv干預(yù)對(duì)大鼠攝食量和體重的影響通過8周的干預(yù),hf1組大鼠體重顯著重于c1組(p0.05),由基礎(chǔ)飼料轉(zhuǎn)為高脂飼料后,大鼠的攝食量出現(xiàn)了不同程度的下降,說明大鼠對(duì)不同能量密度和營養(yǎng)素組成的食物有相應(yīng)的識(shí)別和自我調(diào)節(jié)能力,而rsv干預(yù)在不影響大鼠每日能量攝入的情況下能使高脂飼養(yǎng)大鼠體重下降(p0.05)。但50mg和100mgrsv干預(yù)未觀察到劑量效應(yīng)關(guān)系。2.rsv對(duì)大鼠脂代謝影響脂代謝紊亂被普遍認(rèn)為是nafld的根本。hf1組大鼠血清和肝臟中tc和tg的濃度顯著增加(p0.05),而rsv干預(yù)能顯著削弱高脂膳食所引起的tg含量的升高(p0.05),但rsv對(duì)tc的影響較小。3.白藜蘆醇能有效的減輕高脂誘導(dǎo)的nafld肝臟脂肪變性由高脂飲食誘導(dǎo)8周后,hf1組大鼠肝臟出現(xiàn)了大量的脂肪沉積,表明nafld的模型建立成功。為了評(píng)價(jià)白藜蘆醇對(duì)nafld進(jìn)展的預(yù)防效果,在給予高脂飲食的同時(shí)用白藜蘆醇干預(yù),白藜蘆醇能夠顯著降低高脂膳食引起的肝細(xì)胞脂肪滴的沉積。進(jìn)一步為了研究白藜蘆醇是否對(duì)nafld具有治療作用,將高脂喂養(yǎng)8周nafld建模成功的大鼠隨機(jī)分成六組:基礎(chǔ)飼料對(duì)照組(hfc2)、高脂膳食組(hf2)、高脂膳食rsv組(hf2r50、hf2r100)、基礎(chǔ)飼料加rsv組(hfc2r50、hfc2r100),繼續(xù)喂養(yǎng)8周后,hf2組大量的肝細(xì)胞脂肪變性,且具有明顯氣球樣變。hf2組的nas量化評(píng)分顯著高于c2組,hf2組的小葉內(nèi)炎癥和纖維化程度非常高;hfc2組的nas量化評(píng)分顯著低于hf2組,hfc2組的纖維化程度明顯降低了;hfc2r50和hfc2r100組的nas量化評(píng)分顯著低于hfc2組,特別是hfc2r50和hfc2r100組的小葉內(nèi)炎癥明顯改善;hf2r50和hf2r100組的nas量化評(píng)分顯著高于hfc2r50和hfc2r100組,它們的脂肪變性和小葉內(nèi)炎癥情況相對(duì)嚴(yán)重;但只要添加了白藜蘆醇干預(yù)或者從高脂膳食轉(zhuǎn)變?yōu)檎Ｉ攀?都會(huì)改善肝臟脂肪變性程度。NAS量化評(píng)分與HE染色結(jié)果是一致的。這些結(jié)果表明,白藜蘆醇有效地改善由高脂飲食誘導(dǎo)的肝脂肪變性。4.白藜蘆醇誘導(dǎo)SD大鼠肝臟中AMPK的激活,增加SIRT1的表達(dá)水平為了驗(yàn)證白藜蘆醇對(duì)肝臟的保護(hù)效應(yīng)是否通過AMPK和SIRT1信號(hào)通路,進(jìn)一步檢測肝臟組織中AMPK和SIRT1的蛋白表達(dá)量。結(jié)果顯示:高脂喂養(yǎng)SIRT1的蛋白表達(dá)水平、AMPK-Thr172位點(diǎn)的磷酸化水平顯著降低,白藜蘆醇干預(yù)后能夠有效逆轉(zhuǎn)蛋白水平的降低。5.白藜蘆醇抑制SREBP-1c基因表達(dá)為了檢驗(yàn)白藜蘆醇干預(yù)可能抑制NAFLD大鼠肝臟中過度活躍的SREBP-1c,我們檢測了SREBP-1c的蛋白表達(dá),在NAFLD大鼠肝臟中SREBP-1c的積累被白藜蘆醇干預(yù)后顯著減少。在HF飲食下肝臟SREBP-1c的m RNA水平被顯著增加,并且這種作用完全被白藜蘆醇逆轉(zhuǎn)。這些結(jié)果表明,白藜蘆醇下調(diào)肝臟SREBP-1c表達(dá),從而減少肝組織TG合成。6.白藜蘆醇抑制SREBP-1c表達(dá),抑制SREBP-1c的轉(zhuǎn)錄活性及其靶基因的表達(dá)為了確定通過白藜蘆醇干預(yù)抑制SREBP-1c后的結(jié)果,通過Western印跡法,定量RT-PCR和Ch IP實(shí)驗(yàn)評(píng)估SREBP-1c在肝臟中的關(guān)鍵靶點(diǎn)FAS基因的表達(dá)。白藜蘆醇顯著抑制FAS的啟動(dòng)子SRE與SREBP-1c的結(jié)合程度。FAS的mRNA和蛋白的表達(dá)改變均與SREBP-1c的改變相一致。這些數(shù)據(jù)表明,白藜蘆醇抑制SREBP-1c而改善脂肪肝至少一部分通過抑制SREBP-1c的自動(dòng)循環(huán)調(diào)節(jié)和降低其靶基因的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：白藜蘆醇 非酒精性脂肪肝 固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R575.5
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 英文摘要6-10
• 中文摘要10-13
• 1. 前言13-16
• 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線15-16
• 2. 材料與方法16-31
• 3. 結(jié)果31-37
• 4. 討論37-40
• 全文結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 文獻(xiàn)綜述 白藜蘆醇防治非酒精性脂肪性肝病的研究進(jìn)展45-65
• 參考文獻(xiàn)53-65
• 讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文65-66
• 致謝66

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