本文關(guān)鍵詞：鹽霉素對大鼠肝星狀細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)分泌影響的研究

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【摘要】：目的:研究鹽霉素在體外對大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC-T6)增殖及細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)分泌的影響,并探討其作用的發(fā)揮是否通過抑制Wnt/β-catenin信號通路來實(shí)現(xiàn)。方法:以HSC-T6為研究對象,分別用不同濃度的鹽霉素及其溶媒DMSO處理HSC-T6不同時間后,用CCK-8法檢測鹽霉素對HSC-T6細(xì)胞增殖的影響,并得出最適濃度及時間,以調(diào)整后續(xù)實(shí)驗(yàn)的藥物濃度。用光學(xué)倒置顯微鏡觀察正常組、溶媒DMSO組及鹽霉素處理組的細(xì)胞形態(tài)變化。應(yīng)用化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)檢測肝纖維化指標(biāo)Ⅲ型前膠原(PCⅢ)及透明質(zhì)酸(HA)的表達(dá)情況。用流式細(xì)胞儀(PI單染法)測細(xì)胞周期。分別采用RT-PCR和Western Blot檢測Wnt/β-catenin信號通路中關(guān)鍵信號分子β-catenin、cyclin D1、c-Myc的mRNA及蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:鹽霉素體外抑制HSC-T6增殖,在一定范圍內(nèi)呈劑量、時間依賴關(guān)系,24小時的IC50為27.7μmol/L,以此調(diào)整接下來的處理組濃度分別為15μmol/L、30μmol/L及60μmol/L。光學(xué)倒置顯微鏡下可見處理組細(xì)胞縮小,胞核固縮,部分細(xì)胞碎裂成片,且隨著鹽霉素濃度增加,形態(tài)改變更加明顯�；瘜W(xué)發(fā)光免疫結(jié)果提示鹽霉素能降低PCⅢ、HA蛋白的表達(dá)水平,鹽霉素濃度越大,PCⅢ、HA水平越低。鹽霉素能阻滯HSC-T6于G1期:隨藥物濃度的加大,G1期細(xì)胞比例增大,而S期細(xì)胞比例減少。鹽霉素能下調(diào)β-catenin、cyclin D1、c-Myc mRNA的水平,鹽霉素能下調(diào)β-catenin、cyclin D1、c-Myc蛋白水平,呈劑量依賴關(guān)系。結(jié)論:鹽霉素在體外可抑制HSC-T6細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)分泌,其機(jī)制可能是通過抑制Wnt/β-catenin信號通路來實(shí)現(xiàn)。
【關(guān)鍵詞】：鹽霉素 大鼠肝星狀細(xì)胞 細(xì)胞外基質(zhì) Wnt/β-catenin信號通路
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 主要英文縮略語及索引8-11
• 第1章 緒論11-13
• 第2章 材料與方法13-25
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料13-15
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞13
• 2.1.2 主要試劑及配制13-14
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備14-15
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法15-25
• 2.2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)15-16
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)分組16-17
• 2.2.3 CCK-8 法檢測細(xì)胞增殖-毒性作用17-18
• 2.2.4 光學(xué)倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)18
• 2.2.5 化學(xué)發(fā)光法檢測HA、PCⅢ的表達(dá)18
• 2.2.6 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期（PI單染法）18-19
• 2.2.7 RT-PCR測 β-catenin、cyclin D1、c-Myc mRNA的表達(dá)19-22
• 2.2.8 WB檢測 β-catenin、cyclin D1、c-Myc蛋白的表達(dá)22-25
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-37
• 3.1 鹽霉素對HSC-T6增殖的抑制作用25-26
• 3.2 鹽霉素對HSC-T6細(xì)胞形態(tài)的影響26-27
• 3.3 鹽霉素抑制HA、PCⅢ的分泌27-29
• 3.4 鹽霉素對HSC-T6細(xì)胞周期的影響29-31
• 3.5 鹽霉素下調(diào) β-catenin、cyclin D1、c-Myc的mRNA表達(dá)31-34
• 3.6 鹽霉素下調(diào) β-catenin、cyclin D1、c-Myc的蛋白表達(dá)34-37
• 第4章 討論37-41
• 4.1 鹽霉素抑制HSC-T6細(xì)胞增殖37-38
• 4.2 鹽霉素抑制HA、PCⅢ分泌38
• 4.3 鹽霉素阻滯HSC-T6細(xì)胞周期于G1期38-39
• 4.4 鹽霉素抑制HSC-T6增殖及HA、PCⅢ分泌的機(jī)制探討39-40
• 4.5 總結(jié)與展望40-41
• 第5章 結(jié)論41-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 文獻(xiàn)綜述47-59
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 碩士期間科研成果59-61
• 致謝61

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1 張鵬偉;儲消和;郭美錦;儲炬;莊英萍;張嗣良;;響應(yīng)面設(shè)計(jì)優(yōu)化鹽霉素發(fā)酵條件[J];中國抗生素雜志;2010年02期

2 陳代杰,周光悹,許文思;鹽霉素生物合成的研究——Ⅰ.淺藍(lán)菌素對鹽霉素生物合成的影響[J];抗生素;1988年03期

3 陳代杰,周光悹,許文思;鹽霉素生物合成的研究 Ⅱ.短鏈脂肪酸在鹽霉素生物合成中作用機(jī)制的初步探討[J];抗生素;1988年03期

4 蔣順進(jìn);湯曉林;;鹽霉素發(fā)酵工藝的優(yōu)化研究[J];今日藥學(xué);2010年10期

5 高圣君;杭海峰;陳中兵;郭美錦;儲炬;莊英萍;張嗣良;;流加葡萄糖策略對鹽霉素生物合成調(diào)控影響[J];中國抗生素雜志;2013年08期

6 董秀云;徐文浩;謝志斌;殷娟;何鵬;張靜;楊菲;;成功救治急性鹽霉素中毒一例[J];臨床合理用藥雜志;2011年25期

7 劉朋;杭海峰;儲消和;郭美錦;儲炬;莊英萍;張嗣良;;鹽霉素自身抗性高產(chǎn)突變菌株篩選[J];中國抗生素雜志;2012年02期

8 董秀云;徐文浩;謝志斌;殷娟;何鵬;張靜;楊菲;;成功救治急性鹽霉素中毒一例[J];中國全科醫(yī)學(xué);2010年32期

9 楊亞勇;蔣順進(jìn);;提高白色鏈霉菌鹽霉素產(chǎn)量的工藝研究[J];中國抗生素雜志;2006年11期

10 邵明舉;邢介玲;王興蕾;邵華;劉紅;許榮廷;姜篤銀;;誤食鹽霉素中毒致死亡1例[J];山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年03期

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1 馬立農(nóng);陳杖榴;;高效液相色譜柱前衍生化法測定飼料中的鹽霉素[A];第四屆中國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2001年

2 石永芝;王海;林建強(qiáng);曲音波;;鹽霉素發(fā)酵補(bǔ)油工藝研究[A];中國資源生物技術(shù)與糖工程學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2005年

3 陳智慧;;管碟法測定飼料中鹽霉素的不確定度評定[A];首屆中國獸藥大會動物藥品學(xué)暨中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物藥品學(xué)分會2008學(xué)術(shù)年會論文集[C];2008年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 山東魯抗動植物生物藥品事業(yè)部 張正海 孟偉民 朱志強(qiáng);鹽霉素的應(yīng)用及前景[N];中國畜牧水產(chǎn)報(bào);2000年

2 ;鹽霉素的應(yīng)用及前景[N];中國畜牧水產(chǎn)報(bào);2001年

3 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所　武書庚 張海軍 李鵬 齊廣海 寧夏多維藥業(yè)有限公司　秦耀明;鹽霉素對豬生產(chǎn)性能的影響[N];中國畜牧獸醫(yī)報(bào);2006年

4 ;鹽霉素的應(yīng)用及前景（未完待續(xù)）[N];中國畜牧水產(chǎn)報(bào);2001年

5 $$四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物營養(yǎng)研究所 張克英 陳代文 $$山東魯抗動植物生物藥品事業(yè)部 張正海 周慶舉;鹽霉素對生長豬生產(chǎn)性能的影響及適宜添加量的研究[N];中國畜牧水產(chǎn)報(bào);2001年

6 記者 陳青 通訊員 余飛;鹽霉素可抑制肝胰腺腫瘤生長[N];文匯報(bào);2013年

7 ;鹽霉素的應(yīng)用及前景（未完待續(xù)）[N];中國畜牧水產(chǎn)報(bào);2000年

8 ;鹽霉素的應(yīng)用及前景（未完待續(xù)）[N];中國畜牧水產(chǎn)報(bào);2001年

9 萊州市畜牧獸醫(yī)站 原麗麗;隨意加大鹽霉素用量不可取[N];山東科技報(bào);2006年

10 ;鹽霉素的應(yīng)用及前景（未完待續(xù)）[N];中國畜牧水產(chǎn)報(bào);2000年

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1 馬馳;聯(lián)合應(yīng)用甲萘醌、維生素C和鹽霉素治療膠質(zhì)瘤的體外研究[D];吉林大學(xué);2014年

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1 張祖雯;鹽霉素聯(lián)合17-AAG對胃癌細(xì)胞體外增殖的影響[D];延安大學(xué);2015年

2 甘生敏;鹽霉素對鼻咽癌CNE-2干細(xì)胞放療敏感性的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

3 李睿;鹽霉素抑制上皮性卵巢癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用及其機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2016年

4 李桂蓮;鹽霉素對大鼠肝星狀細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)分泌影響的研究[D];南華大學(xué);2016年

5 陳榮;鹽霉素通過Wnt/β-catenin信號通路誘導(dǎo)大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[D];南華大學(xué);2016年

6 吳濤;鹽霉素對DU145干細(xì)胞的抑制作用及其分子機(jī)制[D];南華大學(xué);2016年

7 儲消和;鹽霉素高產(chǎn)菌推理選育及發(fā)酵工藝研究[D];浙江工業(yè)大學(xué);2008年

8 張勁松;鹽霉素顆粒劑工藝的改進(jìn)研究[D];天津大學(xué);2011年

9 張鵬偉;鹽霉素發(fā)酵過程優(yōu)化與放大研究[D];華東理工大學(xué);2010年

10 戚鳳娥;鹽霉素發(fā)酵工藝的調(diào)控分析與放大[D];山東大學(xué);2006年

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本文編號：833804