本文關(guān)鍵詞：結(jié)腸N-甲基-D-天冬氨酸受體參與腸易激綜合征內(nèi)臟高敏感發(fā)病機(jī)制的研究

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【摘要】：背景和目的腸易激綜合征(irritable bowel syndrome, IBS)是一種常見的功能性胃腸病,嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量,增加醫(yī)療資源消費(fèi),帶來嚴(yán)重的社會及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。腹痛、腹部不適是IBS最常見的就診癥狀,而內(nèi)臟高敏感被認(rèn)為是腹痛、腹部不適發(fā)生的最主要機(jī)制。然而,直到目前,對于IBS內(nèi)臟高敏感的具體發(fā)病機(jī)制仍處于不斷探索之中。既往關(guān)于此方面的研究主要集中于消化道相關(guān)神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元和神經(jīng)纖維的功能,主要包括中樞致敏和外周致敏。作為消化道重要組成部分的結(jié)腸黏膜細(xì)胞,一方面能夠直接觸腸腔環(huán)境,另一方面在解剖結(jié)構(gòu)上還同時直接毗鄰結(jié)腸黏膜下層組織。這些結(jié)腸黏膜細(xì)胞能夠感知結(jié)腸腔內(nèi)環(huán)境的各種信號,并傳遞給位于結(jié)腸深層的腸神經(jīng)系統(tǒng),進(jìn)而參與多種消化系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展過程。因此,結(jié)腸黏膜細(xì)胞或許是研究IBS內(nèi)臟高敏感的一個非常有意義的靶點。N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate, NMDA)受體是一種離子型谷氨酸受體,以NR1為其組成的必需亞基,此受體在神經(jīng)系統(tǒng)廣泛表達(dá)并參與興奮性突觸傳遞過程。既往多項研究已經(jīng)證實中樞和外周廣泛表達(dá)的NMDA受體參與了內(nèi)臟高敏感狀態(tài)的發(fā)生過程。而且,既往的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn),NMDA受體不僅表達(dá)在神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞,在非神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞和組織,如巨噬細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、骨細(xì)胞以及甲狀旁腺中均有表達(dá)并發(fā)揮相應(yīng)的病理生理作用。然而,目前尚不清楚NMDA受體是否在內(nèi)臟高敏感狀態(tài)的結(jié)腸黏膜表達(dá)以及是否參與內(nèi)臟高敏感的發(fā)生。之前的研究已經(jīng)證實,神經(jīng)細(xì)胞表面的NMDA受體被激活之后,能夠活化細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellular-signal-regulated kinase, ERK)信號通路,從而使腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)的合成和釋放增加。而BDNF是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子,參與多種疼痛過程的發(fā)生。我們課題組前期的研究發(fā)現(xiàn),BDNF廣泛表達(dá)于結(jié)腸黏膜細(xì)胞,并通過影響結(jié)腸相關(guān)神經(jīng)的結(jié)構(gòu)和功能介導(dǎo)IBS的內(nèi)臟高敏感。因此,我們推測,結(jié)腸黏膜表達(dá)NMDA受體,并參與了IBS內(nèi)臟高敏感的發(fā)生。而這一過程的可能機(jī)制是,結(jié)腸黏膜NMD A受體活化之后激活細(xì)胞內(nèi)的ERK信號通路,進(jìn)而引起疼痛介質(zhì)BDNF的合成和釋放增多,從而進(jìn)一步導(dǎo)致了IBS內(nèi)臟高敏感的發(fā)生。本研究分兩個部分,對以上問題和假說進(jìn)行探討和驗證。第一部分內(nèi)容探討NMDA受體在結(jié)腸黏膜中的表達(dá)改變及與內(nèi)臟高敏感癥狀的相關(guān)性,包括：1.IBS患者及健康對照者結(jié)腸黏膜NMD A受體的表達(dá)改變,及其表達(dá)水平與患者腹部癥狀的關(guān)聯(lián)性分析；2.內(nèi)臟高敏感小鼠模型的建立,小鼠結(jié)腸黏膜NMD A受體的表達(dá)水平、內(nèi)臟敏感性變化及二者的關(guān)聯(lián)性分析。第二部分內(nèi)容通過體內(nèi)及體外實驗,探討結(jié)腸NMDA受體參與腸易激綜合征內(nèi)臟高敏感發(fā)生的可能機(jī)制及信號通路,包括：1.使用動物實驗,探討結(jié)腸黏膜NMDA受體活化之后是否會引起內(nèi)臟敏感性的相應(yīng)變化,并探討NMDA受體活化對BDNF和ERK通路蛋白的影響；2.使用體外培養(yǎng)的結(jié)腸細(xì)胞,進(jìn)一步對上述假說進(jìn)行驗證,探索結(jié)腸NMDA受體活化之后可能的下游信號通路及蛋白變化。方法第一部分依據(jù)功能性胃腸病羅馬Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)納入IBS患者,并根據(jù)糞便性狀不同,將納入的IBS患者進(jìn)一步分為腹瀉型腸易激綜合征(IBS with diarrhea, IBS-D)和便秘型腸易激綜合征(IBS with constipation, IBS-C)。對照組納入人群為因為結(jié)腸息肉或結(jié)腸癌篩查而接受結(jié)腸鏡檢查者,所有的內(nèi)鏡檢查均無異常。首先使用癥狀評分量表對所有納入受試對象的腹痛、腹部不適癥狀發(fā)作的嚴(yán)重程度和發(fā)作頻率進(jìn)行評分量化,之后進(jìn)行結(jié)腸鏡檢查,并在直腸乙狀結(jié)腸交界處鉗取結(jié)腸黏膜標(biāo)本,用于NMDA受體免疫組化染色及western blot檢測,并分析NMDA受體蛋白表達(dá)水平與腹部癥狀評分之間的相關(guān)性。因為NR1是組成NMDA受體的必需亞基,因此使用NRl抗體可以標(biāo)記所有的NMDA受體亞型,在本研究的免疫組化和western b lot實驗中我們使用NR1抗體對NMDA受體的表達(dá)進(jìn)行檢測,并使用縮寫“NRl”代表NMDA受體的表達(dá)。將體重為20-30g的雄性C57BL/6、鼠,使用TNBS進(jìn)行灌腸處理,建立內(nèi)臟高敏感動物模型。對照組小鼠使用同樣方法,給予同等劑量的50%乙醇溶液灌腸。使用針對小鼠腸炎的疾病活動指數(shù)(disease activity index, DAI)對灌腸后小鼠腸炎的嚴(yán)重程度進(jìn)行評估。灌腸結(jié)束4周后,應(yīng)用結(jié)直腸擴(kuò)張(colorectal distention, C D)后小鼠腹部撤回反射(abdominal withdrawal reflex, AWR)評分對小鼠內(nèi)臟敏感性進(jìn)行檢測。獲取小鼠結(jié)腸標(biāo)本,進(jìn)行蘇木素-伊紅(hematoxylin and eosin, HE)染色,評估小鼠結(jié)腸組織學(xué)炎癥狀況。使用免疫組化及western blot對小鼠結(jié)腸黏膜NMD A受體表達(dá)水平進(jìn)行檢測,并分析蛋白表達(dá)水平與內(nèi)臟敏感性AWR評分之間的關(guān)聯(lián)性。第二部分取第一部分研究中TNBS灌腸造模之后的小鼠糞便,檢測糞便中NMDA受體潛在激動劑glutamate 和 ammonia的含量變化,并與對照組小鼠作對比。對正常小鼠進(jìn)行ammonia灌腸處理(200 mM、500 mM及1 M,每只小鼠0.1mL),每天灌注1次,連續(xù)3天；對照組小鼠使用生理鹽水灌腸。為驗證NMDA受體的作用,在抑制性實驗中,每天ammonia灌注之前30分鐘,給予小鼠灌注配制好的NMDA受體拮抗劑MK801 (0.1、1.0及10mg/kg)。第三天灌注結(jié)束后,對各組小鼠進(jìn)行CRD之后的AWR評分檢測,以評估接受不同處理之后小鼠內(nèi)臟敏感性的變化。使用NMDA受體特異性的激動劑NMDA溶液對正常小鼠進(jìn)行結(jié)腸灌注(10mg/kg),每天灌注1次,連續(xù)3天；對照組小鼠使用PBS灌腸。另取小鼠,在每天NMDA灌注之前30分鐘,灌注配制好的NMDA受體拮抗劑MK801溶液(10mg/kg),或ERK通路拮抗劑U0126 (10 mg/kg),或BDNF特異性受體TrkB的特異性拮抗劑TrkB/Fc (10 ng/小鼠)。第三天灌注結(jié)束后,對各組小鼠進(jìn)行CRD之后的腹壁肌電檢測,評估各組小鼠內(nèi)臟敏感性的變化。腹壁肌電檢測結(jié)束之后,將小鼠處死,獲取遠(yuǎn)端結(jié)腸標(biāo)本,在解剖顯微鏡下,使用解剖剪、眼科鑷等工具將結(jié)腸黏膜層與黏膜下層進(jìn)行鈍性分離,獲得結(jié)腸黏膜標(biāo)本。使用western blot技術(shù)對小鼠結(jié)腸黏膜標(biāo)本中BDNF、ERK通路蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行檢測。生長狀態(tài)良好的體外培養(yǎng)的結(jié)腸上皮細(xì)胞HT29,饑餓處理24小時后,加入不同濃度的NMDA (50μM、100 μM及200μM)刺激細(xì)胞。在抑制性實驗中,NMDA加入之前30分鐘,分別加入NMDA受體拮抗劑MK801(10μM)或ERK通路拮抗劑U0126 (1 0nM)。PBS處理組細(xì)胞作為對照組。收集各組細(xì)胞上清,ELISA方法檢測上清中BDNF的含量變化；提取細(xì)胞蛋白,western blot方法檢測細(xì)胞中BDNF、ERK通路蛋白的變化。結(jié)果第一部分1.研究對象臨床資料研究總共納入18位健康對照者,以及37位IBS患者,其中21位(56.8%)為IBS-D患者,16位(43.2%)為IBS-C患者。對于腹部癥狀嚴(yán)重程度評分,IBS患者顯著高于對照者(2.41±1.01 vs.0.17±0.38,P0.001),而IBS-D患者和IBS-C患者之間無差異(2.48±1.03 vs.2.31±1.01,P0.63)。對于腹部癥狀發(fā)作頻率評分,IBS患者同樣顯著高于對照者(2.30±1.10 vs.0.22±0.55,P0.001), IBS-D患者和IBS-C患者之間無差異(2.33±1.24 vs.2.25±0.93,P=0.82)。2.NRl蛋白在人結(jié)腸黏膜的表達(dá)使用免疫組化技術(shù),我們發(fā)現(xiàn),目的蛋白NR1在人結(jié)腸黏膜廣泛表達(dá),主要表達(dá)在結(jié)腸上皮細(xì)胞和固有層細(xì)胞。3.人結(jié)腸黏膜NRl的免疫組化定量分析及與腹部癥狀之間的關(guān)聯(lián)性分析免疫組化定量分析結(jié)果顯示,IBS患者結(jié)腸黏膜NR1的表達(dá)顯著高于對照組(IBS：中位數(shù)33.51,IQR 26.66-46.70；對照組：中位數(shù)25.35,IQR 13.60-35.66；P=0.004)。IBS-D和IBS-C結(jié)腸黏膜NR1的表達(dá)量無顯著差異(IBS-D：中位數(shù)33.97,IQR 26.66-47.30；IBS-C中位數(shù)：33.15,IQR 26.28-42.75；P=0.705)。在對照組、IBS患者組以及所有納入者組,結(jié)腸黏膜NR1表達(dá)量與腹痛/腹部不適癥狀嚴(yán)重程度評分之間均存在顯著關(guān)聯(lián)性(對照組：r=0.560,P=0.016；IBS組：r=0.522,P=0.001；所有納入者組：r=0.596,P0.001)。結(jié)腸黏膜NR1表達(dá)量與腹痛/腹部不適癥狀發(fā)作頻率之間在各分組中同樣存在顯著關(guān)聯(lián)性(對照組：r=0.568,P=0.014；IBS組：r=0.632,P0.001；所有納入者組：r=0.663,P0.001)。4.人結(jié)腸黏膜NR1的western blot定量分析及與腹部癥狀之間的關(guān)聯(lián)性分析對所得條帶的光密度分析結(jié)果顯示,與對照組相比,IBS-D與IBS-C患者結(jié)腸黏膜NR1的表達(dá)水平分別是對照組的1.71倍(P0.05)和1.51倍(P0.05),而IBS-D患者NR1表達(dá)量稍微高于IBS-C患者,但未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。關(guān)聯(lián)性分析統(tǒng)計結(jié)果顯示,在對照組、IBS患者組以及所有納入者組,結(jié)腸黏膜NR1表達(dá)量與腹痛/腹部不適癥狀嚴(yán)重程度評分之間均存在顯著關(guān)聯(lián)性(對照組：r=0.646,O=0.004；IBS組：r=0.586,P0.001；所有納入者組：r=0.669,P0.001)。結(jié)腸黏膜NR1表達(dá)量與腹痛/腹部不適癥狀發(fā)作頻率之間在各分組中同樣存在顯著關(guān)聯(lián)性(對照組：r=0.649,P=0.004；IBS組：r=0.551,P0.001；所有納入者組：r=0.708,P0.001)。5.內(nèi)臟高敏感小鼠模型的建立在對小鼠進(jìn)行灌腸處理后,NBS灌腸小鼠的DAI評分在灌腸之后第1至7天時最高,之后逐漸降低,第21天時評分降至為0,表明結(jié)腸炎癥恢復(fù)正常。灌腸處理后4周,顯微鏡下觀察到的HE染色結(jié)果顯示,TNBS組和對照組小鼠均無顯著炎性表現(xiàn)。灌腸處理后4周,對兩組小鼠結(jié)直腸擴(kuò)張后的AWR評分進(jìn)行記錄,在15mmHg擴(kuò)張壓力下,TNBS組和對照組小鼠的內(nèi)臟敏感性無顯著差異；但是,在30、45和60 mmHg擴(kuò)張壓力下,TNBS組小鼠的AWR評分顯著高于對照組小鼠,提示內(nèi)臟敏感性的升高。6.NR1蛋白在小鼠結(jié)腸黏膜的表達(dá)免疫組化結(jié)果顯示,NR1蛋白表達(dá)散布于整個小鼠結(jié)腸黏膜標(biāo)本,其中在結(jié)腸上皮細(xì)胞和固有層細(xì)胞表達(dá)豐富。7.小鼠結(jié)腸黏膜NR1的免疫組化定量分析及與內(nèi)臟敏感性之間的關(guān)聯(lián)性分析免疫組化定量分析結(jié)果顯示,TNBS處理組小鼠結(jié)腸黏膜NR1的表達(dá)量顯著高于對照組小鼠(TNBS組：中位數(shù)19.7,IQR 15.4-26.9；對照組：11.7,IQR 9.8-14.5；P=0.019)。在TNBS組以及對照組小鼠,結(jié)腸黏膜NR1表達(dá)量與AWR評分之間存在顯著關(guān)聯(lián)性,尤其是45mmHg (TNBS組小鼠：r=0.831,P=0.003；對照組小鼠：r=0.766,P0.01)和60mmHg (TNBS組小鼠：r=0.668,P=0.035;對照組小鼠：r=0.875,P0.001)的結(jié)直腸擴(kuò)張壓力下。不考慮分組情況不同而將兩組小鼠作為整體分析,結(jié)腸黏膜NR1表達(dá)量與AWR評分之間同樣存在顯著關(guān)聯(lián)性,尤其是在30mmHg (r=0.741,P0.001)、45 mmHg (r=0.841,P0.001)和60 mmHg(r=0.738,P0.001)結(jié)直腸擴(kuò)張壓力下。8.小鼠結(jié)腸黏膜NR1的western blot定量分析及與內(nèi)臟敏感性之間的關(guān)聯(lián)性分析Western blot及光密度分析結(jié)果顯示,TNBS組小鼠結(jié)腸黏膜NR1的表達(dá)量是對照組小鼠的1.74倍(P=0.014)。在TNBS組以及對照組小鼠,結(jié)腸黏膜NR1表達(dá)量與AWR評分之間存在顯著關(guān)聯(lián)性,尤其是在30mmHg (TNBS組小鼠：r=0.828,P=0.003；對照組小鼠：r-0.654, P=0.040)、45 mmHg(TNBS組小鼠：r=0.757,P=0.011；對照組小鼠：r=0.883,P0.001)的結(jié)直腸擴(kuò)張壓力下。不考慮分組情況不同而將兩組小鼠作為整體分析,在所有4個不同的結(jié)直腸擴(kuò)張壓力下,結(jié)腸黏膜NR1表達(dá)量與AWR評分之間均存在顯著關(guān)聯(lián)性(15 mmHg:r=0.524,P=0.018; 30 mmHg:r=0.826,P 0.001; 45 mmHg:r=0.843,P0.001; 60 mmHg:r=0.641, P=0.002)。第二部分1.TNBS灌腸小鼠及對照組小鼠糞便中g(shù)lutamate和 ammonia的含量測定灌腸處理小鼠后4周,我們獲取TNBS組和對照組小鼠的糞便,并對糞便中潛在的NMDA受體激動劑glutamate和ammonia進(jìn)行定量檢測分析。兩組小鼠糞便中g(shù)lutamate的含量并無顯著差異(17.4±0.1 nmol/g vs.17.7±0.1 nmol/g,P=0.085),但是TNBS組小鼠糞便中ammonia的含量顯著高于對照組小鼠(15.4±1.7μg/g vs.10.2± 1.1 μg/g, P=0.017)。2.正常小鼠接受ammonia灌腸處理后內(nèi)臟敏感性變化為了驗證TNBS灌腸處理后小鼠腸腔糞便中有顯著變化的ammonia是否能夠激活結(jié)腸NMDA受體,并影響小鼠內(nèi)臟敏感性,我們使用ammonia對正常小鼠進(jìn)行灌腸處理,并記錄CRD之后的AWR評分。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對照組相比,ammonia灌腸處理能夠顯著增強(qiáng)小鼠的內(nèi)臟敏感性,特別是在30 mmHg和45 mmHg擴(kuò)張壓力下。而ammonia處理導(dǎo)致的內(nèi)臟敏感性的升高,能夠被預(yù)先使用的NMDA受體特異性拮抗劑MK801所拮抗。3.正常小鼠接受NMDA灌腸處理后內(nèi)臟敏感性變化為進(jìn)一步明確結(jié)腸黏膜NMDA受體活化對小鼠內(nèi)臟敏感性的作用,我們使用NMDA受體的特異性激動劑NMDA對正常小鼠進(jìn)行灌腸處理,以更特異性地激活結(jié)腸黏膜NMDA受體,并使用CRD之后小鼠的腹壁肌電變化評估N MDA受體激活對小鼠內(nèi)臟敏感性的改變。與對照組相比,在15 mmHg擴(kuò)張壓力下,NMDA (10mg/kg)對小鼠的內(nèi)臟敏感性并無改變,但是,在30、45和60mmHg擴(kuò)張壓力下,NMDA處理組小鼠顯示出對CRD更為強(qiáng)烈的反應(yīng)。分別預(yù)先使用MK801、U0126和TrkB/Fc對NMDA受體、ERK通路和TrkB (BDNF的特異性作用受體)進(jìn)行拮抗,均可顯著抑制NMDA處理引起的內(nèi)臟高敏感反應(yīng)。4.正常小鼠接受NMDA灌腸處理后結(jié)腸BDNF的表達(dá)改變和ERK通路的活化為進(jìn)一步探討結(jié)腸黏膜NMDA受體活化后下游通路的變化,我們獲取接受NMDA灌腸處理的小鼠結(jié)腸黏膜,使用western blot對結(jié)腸黏膜中的BDNF和ERK通路蛋白進(jìn)行檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn),NMDA處理組小鼠結(jié)腸黏膜的BDNF含量顯著高于對照組小鼠,MK801和U0126預(yù)處理均可顯著抑制此效應(yīng)。不同處理組小鼠結(jié)腸黏膜總的ERK含量并無差異,但是NMDA處理組小鼠結(jié)腸黏膜磷酸化的ERK (phosphorylated ERK, pERK)含量顯著高于對照組,而MK801和U0126預(yù)處理均可顯著抑制此效應(yīng)。5.結(jié)腸上皮細(xì)胞NMDA受體活化后上清中BDNF的分泌改變ELISA結(jié)果顯示,與對照處理組相比,使用NMDA對結(jié)腸上皮細(xì)胞HT29進(jìn)行刺激之后,細(xì)胞上清中BDNF蛋白水平顯著增加,并呈現(xiàn)劑量反應(yīng)性增加的表現(xiàn)。為驗證此種效應(yīng)是否由NMDA受體活化以及ERK通路激活所介導(dǎo),我們使用NMDA受體的拮抗劑MK801和ERK通路的拮抗劑U0126對細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理,結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩種拮抗劑均可顯著抑制NMDA引起的上清BDNF含量升高。6.結(jié)腸上皮細(xì)胞NMDA受體活化后細(xì)胞中BDNF的表達(dá)改變和ERK通路的活化Western blot結(jié)果顯示,結(jié)腸上皮細(xì)胞HT29接受50μM、100μM和200 μMNMDA刺激之后,測得的細(xì)胞中BDNF的含量分別是對照組的1.47倍、2.43倍和2.60倍。使用MK801和U0126預(yù)處理能夠抑制此效應(yīng)。與對照處理相比,NMDA刺激之后,結(jié)腸上皮細(xì)胞中總ERK的表達(dá)水平并無變化,但pERK表達(dá)水平呈現(xiàn)劑量依賴性增加。使用MK801和U0126預(yù)處理能夠抑制此效應(yīng)。結(jié)論第一部分1.人結(jié)腸黏膜廣泛表達(dá)NMD A受體,并且IBS患者中表達(dá)顯著升高,結(jié)腸黏膜NMDA受體表達(dá)量與腹痛、腹部不適癥狀評分呈顯著關(guān)聯(lián)性。2. TNBS灌腸處理小鼠28天后可建立IBS樣內(nèi)臟高敏感動物模型,其結(jié)腸黏膜NMDA受體表達(dá)顯著升高并與內(nèi)臟敏感性AWR評分呈顯著關(guān)聯(lián)性。第二部分1.內(nèi)臟高敏感小鼠腸腔內(nèi)ammonia含量顯著升高,腸腔內(nèi)應(yīng)用ammonia可引起正常小鼠內(nèi)臟敏感性的升高。2.結(jié)腸黏膜NMDA受體活化可引起結(jié)腸BDNF合成和釋放增加,進(jìn)而導(dǎo)致內(nèi)臟高敏感的發(fā)生。3.結(jié)腸黏膜NMDA受體活化后BDNF合成和釋放的增加是通過活化細(xì)胞內(nèi)ERK信號通路實現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)腸黏膜 N-甲基-D-天冬氨酸受體 腸易激綜合征 內(nèi)臟高敏感 發(fā)病機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R574.4
【目錄】：

• 中文摘要6-14
• 英文摘要14-24
• 符號說明24-26
• 第一部分 N-甲基-D-天冬氨酸受體在腸易激綜合征患者及內(nèi)臟高敏感小鼠結(jié)腸黏膜中的表達(dá)、改變及與內(nèi)臟高敏感癥狀的相關(guān)性分析26-57
• 前言26-27
• 研究對象與方法27-40
• 結(jié)果40-43
• 討論43-47
• 結(jié)論47-48
• 附圖表48-57
• 第二部分 結(jié)腸N-甲基-D-天冬氨酸受體參與腸易激綜合征內(nèi)臟高敏感發(fā)生的機(jī)制研究：體內(nèi)及體外實驗57-77
• 前言57-58
• 研究對象與方法58-66
• 結(jié)果66-68
• 討論68-71
• 結(jié)論71-72
• 附圖72-77
• 參考文獻(xiàn)77-84
• 致謝84-85
• 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文85-86
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表86-87
• 英文論文一87-111
• 英文論文二111-131

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1 董明;郭欣欣;吳煥淦;趙天平;劉慧榮;;內(nèi)臟高敏感發(fā)生機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國醫(yī)藥生物技術(shù);2012年01期

2 郭杰芳,屠振興,鄒曉平;非糜爛性胃食管反流病內(nèi)臟高敏感機(jī)制研究[J];臨床消化病雜志;2004年06期

3 焦黛妍;孫建華;;腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子在腸道高敏感中的研究進(jìn)展[J];胃腸病學(xué);2014年02期

4 趙宏宇;陳飛雪;曹靜;戚慶慶;李月月;左秀麗;李延青;;腦組織海馬區(qū)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子在焦慮調(diào)節(jié)內(nèi)臟高敏感中的作用[J];山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2014年03期

5 鄒多武;許國銘;;內(nèi)臟高敏感在功能性胃腸病中的作用[J];胃腸病學(xué);2006年08期

6 袁莉莉;余躍;蔣楠;陳鳳琴;王巧民;王烈成;;內(nèi)臟高敏感模型大鼠結(jié)腸特異背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)和興奮性研究[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2013年11期

7 石偉,李茂軍,葉長寧,陳昌輝;高敏感C反應(yīng)蛋白、前白蛋白測定在新生兒感染性疾病中的應(yīng)用[J];四川醫(yī)學(xué);2005年09期

8 周小平;李學(xué)良;;腸易激綜合征內(nèi)臟高敏感的研究進(jìn)展[J];胃腸病學(xué);2014年02期

9 魏磊;高峻;許國銘;;內(nèi)臟高敏感治療藥物研發(fā)進(jìn)展[J];中國新藥雜志;2010年19期

10 王靜;賴華梅;諸琦;張明鈞;高亞博;;內(nèi)臟高敏感大鼠腸道5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體的變化以及中藥腸吉安治療的研究[J];胃腸病學(xué);2008年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 印媛君;呂賓;楊午鳴;丁瑞峰;柯慶;;內(nèi)臟高敏感大鼠結(jié)腸電及運(yùn)動的研究[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會第十八次全國消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會議暨2006年全國中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2006年

2 李蒙;呂賓;扥莉;;樹突狀細(xì)胞介導(dǎo)肥大細(xì)胞活化促進(jìn)大鼠內(nèi)臟高敏感形成[A];第二十五屆全國中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2013年

3 楊小軍;錢偉;沈蕾;侯曉華;官陽;;突觸可塑性在急性束縛應(yīng)激所致內(nèi)臟高敏感中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國消化病學(xué)術(shù)會議論文匯編（上冊）[C];2007年

4 郭峗;呂賓;丁鶯;張璐;顧偉忠;;CRF-R在內(nèi)臟高敏感大鼠腦腸軸的表達(dá)[A];第二屆浙江省消化病學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2009年

5 郭峗;呂賓;丁鶯;張璐;顧偉忠;;CRF受體在內(nèi)臟高敏感大鼠腦腸軸的表達(dá)[A];第二屆浙江省消化病學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2009年

6 李蒙;扥莉;;內(nèi)臟高敏感大鼠腸道樹突狀細(xì)胞高表達(dá)蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3[A];第二十五屆全國中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2013年

7 李蒙;，

本文編號：803304