發(fā)布時間：2017-09-02 04:33

  本文關(guān)鍵詞：G蛋白偶聯(lián)雌激素受體（GPER）在結(jié)腸肌間神經(jīng)叢的表達(dá)調(diào)節(jié)及其參與結(jié)腸傳輸調(diào)節(jié)的機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 17β-雌二醇 G蛋白偶聯(lián)雌激素受體 肌間神經(jīng)元 一氧化氮 nNOS 結(jié)腸傳輸 慢性傳輸型便秘

【摘要】：研究目的臨床及流行病學(xué)研究顯示女性月經(jīng)周期內(nèi)結(jié)腸傳輸速度發(fā)生周期性波動,女性功能性便秘發(fā)生率明顯高于男性,提示性激素在結(jié)腸運(yùn)動調(diào)節(jié)中具有重要作用,但其機(jī)制尚不明確。本課題旨在研究新型雌激素膜受體—PER (G protein coupled estrogen receptor)在雌性C57BL/6小鼠結(jié)腸的表達(dá)及表達(dá)調(diào)控機(jī)制,探究GPER在生理?xiàng)l件下結(jié)腸運(yùn)動功能調(diào)節(jié)中的作用及機(jī)制,并進(jìn)一步觀察17β雌二醇(E2)-GPER途徑在慢性傳輸型便秘發(fā)生中的作用。研究揭示E2調(diào)節(jié)結(jié)腸運(yùn)動的受體及受體后分子機(jī)制,為慢性傳輸型便秘新的治療靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究方法及內(nèi)容根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要分別選擇雌性或雄性成年C57BL/6小鼠。第一部分：RT-PCR, Western Blot免疫組化、免疫熒光三標(biāo)等方法明確GPER在結(jié)腸的表達(dá)及細(xì)胞定位。Real-time PCR、Western Blot分別在mRNA及蛋白水平檢測生理動情周期內(nèi)雌性C57BL/6小鼠結(jié)腸肌間神經(jīng)元GPER的表達(dá)變化。為進(jìn)一步研究E2調(diào)節(jié)GPER表達(dá)的機(jī)制,分離培養(yǎng)雄性成年C57BL/6小鼠肌間神經(jīng)元,在外源性E2處理神經(jīng)元2小時、6小時、12小時及24小時后收集神經(jīng)元,RT-PCR及Western Blot檢測神經(jīng)元GPER表達(dá)的改變；根據(jù)外源性E2調(diào)節(jié)GPER表達(dá)的時間反應(yīng)曲線,選取合適的作用時間點(diǎn),檢測選擇性雌激素膜受體阻斷劑G15及核受體阻斷劑ICI182.780對E2調(diào)節(jié)GPER表達(dá)的影響,明確E2調(diào)節(jié)GPER表達(dá)的受體機(jī)制。第二部分：利用玻璃珠推動實(shí)驗(yàn)在體檢測雌性C57BL/6小鼠結(jié)腸傳輸能力,觀察生理動情周期內(nèi)結(jié)腸傳輸時間的波動及E2急性替代治療對卵巢去勢雌性C57BL/6小鼠結(jié)腸傳輸?shù)挠绊?并進(jìn)一步觀察GPER在生理動情周期內(nèi)和E2急性替代治療后結(jié)腸傳輸變化中的作用。器官浴槽實(shí)驗(yàn)記錄離體卵巢去勢C57BL/6小鼠結(jié)腸環(huán)行肌運(yùn)動,檢測GPER選擇性激活對卡巴膽堿誘導(dǎo)的結(jié)腸肌條收縮的影響；分別用TTX和選擇性nNOS抑制劑NPLA預(yù)處理結(jié)腸肌條對GPER激活引起的結(jié)腸肌條收縮抑制的影響。免疫熒光、硝酸還原酶法及激光共聚焦顯微鏡檢測E2或選擇性GPER激動劑G1對肌間神經(jīng)元一氧化氮(Nitric Oxide, NO)生成的影響及nNOS抑制劑預(yù)處理對GPER激活誘導(dǎo)NO生成的影響。免疫組織化學(xué)、Western Blot檢測在體E2替代治療和外源性E2預(yù)處理對結(jié)腸組織nNOS蛋白表達(dá)的影響以及GPER選擇性阻斷劑G15預(yù)處理對E2調(diào)節(jié)nNOS表達(dá)的影響。最后,以冷水灌胃方式制備慢性傳輸型便秘小鼠模型,觀察E2-GPER途徑在慢性傳輸型便秘結(jié)腸傳輸抑制中的作用。研究結(jié)果第一部分：1.小鼠結(jié)腸隱窩上皮細(xì)胞、粘膜下及肌間神經(jīng)元均有GPER陽性表達(dá)。2.肌間神經(jīng)元GPER表達(dá)在生理動情周期內(nèi)發(fā)生波動,動情前期顯著高于動情間期。3.外源性E2預(yù)處理肌間神經(jīng)元,6小時后GPER mRNA和蛋白表達(dá)開始上調(diào),12小時達(dá)到高峰。4.選擇性阻斷GPER不影響E2上調(diào)GPER表達(dá)的作用；相反,選擇性雌激素核受體阻斷劑預(yù)處理后,E2上調(diào)GPER表達(dá)的作用被阻斷。第二部分：1.生理動情周期內(nèi)結(jié)腸推動力發(fā)生周期性波動,與內(nèi)源性雌激素水平負(fù)相關(guān)。選擇性阻斷GPER可以抑制內(nèi)源性雌激素水平波動引起的結(jié)腸傳輸抑制。急性E2替代治療延緩了卵巢去勢小鼠結(jié)腸傳輸速度,選擇性阻斷GPER阻斷了E2的作用。2.選擇性GPER激動劑G1濃度依賴性的抑制卡巴膽堿誘導(dǎo)的結(jié)腸環(huán)行肌肌條收縮,TTX和選擇性nNOS阻斷劑NPLA預(yù)處理能阻斷G1抑制結(jié)腸肌條收縮的作用。3.E2及選擇性GPER激動劑G1均可刺激肌間神經(jīng)元NO釋放,nNOS阻斷劑NPLA預(yù)處理阻斷GPER激活誘導(dǎo)的肌間神經(jīng)元NO生成。4.在結(jié)腸肌間神經(jīng)叢,GPER表達(dá)于nNOS陽性肌間神經(jīng)元。5.E2替代治療上調(diào)卵巢去勢小鼠結(jié)腸nNOS表達(dá)；外源性E2預(yù)處理結(jié)腸組織,肌間神經(jīng)叢nNOS蛋白表達(dá)上調(diào),以上作用均可以被選擇性GPER阻斷劑G15阻斷。6.冷水灌胃28天后卵巢去勢小鼠結(jié)腸傳輸時間明顯延長,E2替代治療加劇了結(jié)腸傳輸抑制,選擇性阻斷GPER能阻斷E2在STC模型中的作用。結(jié)論結(jié)腸肌間神經(jīng)元表達(dá)GPER,GPER表達(dá)水平受E2正調(diào)控。E2可能通過作用于雌激素核受體,上調(diào)GPER表達(dá)。E2作用于結(jié)腸肌間神經(jīng)元GPER,抑制結(jié)腸運(yùn)動,與生理動情周期內(nèi)結(jié)腸傳輸時間的抑制有關(guān)；E2對結(jié)腸傳輸?shù)囊种婆c激活GPER上調(diào)肌間神經(jīng)元nNOS表達(dá),誘導(dǎo)NO釋放有關(guān)；GPER參與了E2誘導(dǎo)的STC結(jié)腸傳輸?shù)囊种啤?br/> 【關(guān)鍵詞】：17β-雌二醇 G蛋白偶聯(lián)雌激素受體 肌間神經(jīng)元 一氧化氮 nNOS 結(jié)腸傳輸 慢性傳輸型便秘
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R574.62
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符號說明13-14
• 第一部分 雌激素膜受體GPER在C57BL/6小鼠結(jié)腸的表達(dá)及表達(dá)調(diào)控機(jī)制14-41
• 前言14-16
• 材料與方法16-28
• 1.材料16-19
• 2.實(shí)驗(yàn)步驟及方法19-27
• 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析27-28
• 結(jié)果28-30
• 討論30-33
• 結(jié)論33-34
• 附圖34-41
• 第二部分 GPER參與結(jié)腸運(yùn)動調(diào)節(jié)的生理機(jī)制及其在慢性傳輸性便秘形成中的作用41-67
• 前言41-43
• 材料與方法43-50
• 1.材料43-44
• 2.實(shí)驗(yàn)步驟及方法44-49
• 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析49-50
• 結(jié)果50-53
• 討論53-57
• 結(jié)論57-58
• 附圖58-67
• 參考文獻(xiàn)67-74
• 致謝74-75
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文75-76
• 附件76

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 徐向華,王曉良;中樞神經(jīng)系統(tǒng)中與G蛋白偶聯(lián)的內(nèi)向整流鉀通道[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2001年02期

2 金曦;趙建軍;;開郁顆粒對抑郁大鼠模型海馬區(qū)G蛋白偶聯(lián)的內(nèi)向整流型鉀通道(GIRK1)mRNA表達(dá)的影響[J];中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志;2009年03期

3 黃冰,沈秀華;N_2O通過抑制趨化肽與G蛋白偶聯(lián)而損害中性粒細(xì)胞的氧化反應(yīng)[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);2000年01期

4 陳泓,張幼怡,韓啟德;多巴胺D_2/血管緊張素AT_1嵌合受體:D_2受體第三細(xì)胞內(nèi)環(huán)影響受體與配基結(jié)合以及與G蛋白偶聯(lián)的特性(英文)[J];Acta Pharmacologica Sinica;1997年03期

5 ;[J];;年期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 高霄飛;張海林;路長林;何成;;背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元存在G蛋白偶聯(lián)的內(nèi)向整流型鉀通道[A];中國神經(jīng)科學(xué)學(xué)會第六屆學(xué)術(shù)會議暨學(xué)會成立十周年慶祝大會論文摘要匯編[C];2005年

2 陳群;魏偉;;木瓜苷對Ⅱ型膠原性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜細(xì)胞G蛋白偶聯(lián)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用及其機(jī)制[A];第八屆全國生化藥理學(xué)術(shù)討論會暨第七屆Servier獎頒獎大會會議摘要集[C];2003年

3 趙建軍;金曦;;開郁顆粒對慢性應(yīng)激大鼠海馬區(qū)G蛋白偶聯(lián)的內(nèi)向整流型鉀通道(GIRK1)mRNA表達(dá)的影響[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會腦病分會成立大會暨2008年全國中醫(yī)腦病學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2008年

4 金曦;;開郁顆粒對慢性應(yīng)激大鼠海馬區(qū)G蛋白偶聯(lián)的內(nèi)向整流型鉀通道(GIRK1)mRNA表達(dá)的影響[A];科技創(chuàng)新與節(jié)能減排——吉林省第五屆科學(xué)技術(shù)學(xué)術(shù)年會論文集（下冊）[C];2008年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李艷君;G蛋白偶聯(lián)雌激素受體（GPER）在結(jié)腸肌間神經(jīng)叢的表達(dá)調(diào)節(jié)及其參與結(jié)腸傳輸調(diào)節(jié)的機(jī)制[D];山東大學(xué);2016年

，

本文編號：776438