本文關(guān)鍵詞：CD36棕櫚�；揎椩诟渭�(xì)胞凋亡中的分子機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： CD36 棕櫚�；� 凋亡 炎癥 NASH

【摘要】：目的:隨著人們生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變,非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)已經(jīng)成為嚴(yán)重影響人類(lèi)健康的常見(jiàn)病,有1/3的病人會(huì)發(fā)展為相對(duì)兇險(xiǎn)的非酒精性脂肪性肝炎(Non-alcoholic steatohepatitis,NASH),但其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚且缺乏有效的臨床治療。大量的臨床數(shù)據(jù)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明,肝細(xì)胞凋亡可以進(jìn)一步促進(jìn)炎癥、纖維化、硬化等反應(yīng),在NASH發(fā)生中有重要作用。CD36又稱(chēng)為脂肪酸轉(zhuǎn)位酶(Fatty acid translocase,FAT)是清道夫受體B型成員,CD36缺失或者過(guò)表達(dá)都會(huì)引發(fā)NASH。棕櫚�；揎検堑鞍追g后修飾的一種,有研究報(bào)道蛋白的棕櫚�；揎棔�(huì)影響細(xì)胞凋亡。CD36也可進(jìn)行棕櫚�；揎�,然而CD36棕櫚�；c細(xì)胞凋亡的關(guān)系卻無(wú)人報(bào)道。因此本文旨在探討CD36棕櫚�；揎検欠駞⑴c了肝細(xì)胞凋亡導(dǎo)致NASH的發(fā)生,并對(duì)其中機(jī)制作初步探討。方法:第一部分:以C57BL/6J雄性小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,給予正常飲食(Nornal chow diet,NCD)和高脂飲食(High fat diet,HFD)喂養(yǎng)22周,建立NASH動(dòng)物模型。HE染色觀察形態(tài)學(xué),油紅O染色觀察脂質(zhì)積聚情況,檢測(cè)小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanineaminotransferase,alt)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspertateaminotransferase,ast)含量。體外模型中,hepg2給予棕櫚酸(palmitateacid,pa)處理,油紅o觀察脂質(zhì)積聚情況。在體內(nèi)外模型中,用�；�-生物素置換法(acyl-biotinylexchange,abe)方法檢測(cè)cd36棕櫚�；揎椝�。westernblot用來(lái)檢測(cè)腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor,tnf-α)的表達(dá)和junn-terminalkinase(jnk)的磷酸化,用tunel染色和caspase-3活性檢測(cè)細(xì)胞凋亡,適時(shí)熒光定量pcr(rt-pcr)檢測(cè)凋亡基因bax,bcl-2的表達(dá)。第二部分:選擇c57bl/6j小鼠,通過(guò)尾靜脈注射慢病毒,使小鼠高表達(dá)野生型cd36(wt-cd36)或棕櫚�；稽c(diǎn)突變型cd36(aa-ss),并全程給予高脂喂養(yǎng)8周,構(gòu)建體內(nèi)模型。在hepg2細(xì)胞中,轉(zhuǎn)染慢病毒,使hepg2穩(wěn)定高表達(dá)野生型cd36(wt-cd36)或棕櫚酰化位點(diǎn)突變型cd36(aa-ss),建立穩(wěn)定細(xì)胞系。另采用蛋白棕櫚�；种苿�2-溴軟脂酸乙烯(2-bromopalmitate,2-bp)處理hepg2完成體外實(shí)驗(yàn)。用abe方法檢測(cè)cd36棕櫚�；揎椝�;進(jìn)行he、油紅o染色和小鼠血清中alt和ast含量測(cè)定;用tunel染色及caspase-3檢測(cè)反應(yīng)凋亡情況;用rt-pcr檢測(cè)凋亡基因bax、bcl-2的表達(dá)。第三部分:利用第二部分的動(dòng)物和細(xì)胞模型,用westernblot檢測(cè)體內(nèi)外tnf-α表達(dá)及jnk磷酸化水平;利用免疫共沉淀的方法檢測(cè)cd36和tlr4共聚體的形成;用去垢劑抵抗(detergent-resistantmembranes,drms)的方法分離提取脂筏,并觀察cd36在脂筏的分布。結(jié)果:第一部分:HE和油紅O染色發(fā)現(xiàn)HFD小鼠肝臟脂肪樣變性、脂質(zhì)積聚和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯高于NCD小鼠,而且Western blot顯示TNF-α表達(dá)和JNK信號(hào)通路磷酸化水平增加同時(shí)伴有CD36棕櫚�；皆黾�,TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞增多,Bax表達(dá)增加,Bcl-2表達(dá)下降,Caspase-3活性增加,血清中ALT和AST明顯增加(P0.05),HFD小鼠肝臟明顯受損,小鼠肝臟CD36棕櫚酰化水平明顯增加(P0.05)。第二部分:HE和油紅O染色提示AA-SS小鼠肝臟病變較wt-CD36有所減輕,血清中ALT和AST水平下降,TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞減少,Caspase-3活性降低,Bcl-2表達(dá)明顯增加。體外實(shí)驗(yàn)采用突變或抑制劑處理都可以降低CD36棕櫚�；揎椝�,降低凋亡caspase-3活性,促進(jìn)Bcl-2表達(dá)增加(P0.05)。第三部分:Western blot、免疫共沉淀和脂筏的結(jié)果顯示,體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中,采用突變(AA-SS)或者抑制劑(2BP)處理均可降低TNF-α表達(dá)及JNK磷酸化水平,且CD36和TLR4形成共聚體減少,CD36在脂筏的分布比例降低,與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.高脂飲食可以導(dǎo)致NASH的發(fā)生,增加小鼠肝細(xì)胞凋亡及CD36棕櫚�；揎椝�;2.抑制CD36棕櫚酰化能夠減少CD36在脂筏中的分布,與TLR4形成共聚體減少,引起TNF-α減少JNK磷酸化降低,從而降低細(xì)胞凋亡,改善NASH。
【關(guān)鍵詞】：CD36 棕櫚酰化 凋亡 炎癥 NASH
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R575
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-15
• 第一部分 高脂促進(jìn)肝細(xì)胞凋亡及肝損傷伴有CD36棕櫚�；揎棾潭仍黾�15-37
• 第一章 非酒精性脂肪性肝炎體內(nèi)外模型的構(gòu)建及鑒定15-25
• 1.材料和方法15-23
• 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-25
• 第二章 高脂對(duì)細(xì)胞凋亡及CD36棕櫚酰化修飾程度的影響25-34
• 1.材料和方法25-32
• 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-34
• 討論34-37
• 第二部分 抑制CD36棕櫚�；揎椄纳萍�(xì)胞凋亡及肝損傷37-49
• 第一章 穩(wěn)定表達(dá)野生型及棕櫚酰化突變型CD36體內(nèi)外模型的構(gòu)建及鑒定37-42
• 1.材料和方法37-39
• 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-42
• 第二章 抑制CD36棕櫚�；揎棇�(duì)細(xì)胞凋亡及肝損傷的影響42-47
• 1.材料和方法42-43
• 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-47
• 討論47-49
• 第三部分 抑制CD36棕櫚�；纳萍�(xì)胞凋亡和肝損傷的分子機(jī)制探討制49-61
• 第一章 抑制CD36棕櫚酰化對(duì)體內(nèi)外炎癥反應(yīng)的影響49-52
• 1.材料和方法49-50
• 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果50-52
• 第二章 抑制CD36棕櫚�；瘜�(duì)CD36在脂筏分布的影響52-56
• 1.材料和方法52-54
• 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果54-56
• 第三章 抑制CD36棕櫚�；瘜�(duì)CD36與TLR4形成共聚體的影響56-58
• 1.材料和方法56-57
• 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果57-58
• 討論58-61
• 全文總結(jié)61-62
• 參考文獻(xiàn)62-68
• 文獻(xiàn)綜述68-75
• 參考文獻(xiàn)71-75
• 致謝75-76
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文76-77
• 攻讀碩士研究生期間參加的學(xué)術(shù)會(huì)議77

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 李丹檬;宓為峰;李玲芝;王志仁;王sユ，

本文編號(hào)：755660