本文關(guān)鍵詞：糖皮質(zhì)激素受體在肝衰竭患者中的表達(dá)及其機(jī)制的探討

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【摘要】：目的:探討慢加急性肝衰竭(ACLF)患者體內(nèi)糖皮質(zhì)激素受體(GR)亞型的表達(dá)情況及與ACLF患者預(yù)后的關(guān)系;并通過(guò)建立動(dòng)物模型,研究GR在肝衰竭時(shí)發(fā)生變化的分子機(jī)制,為臨床治療提供思路。方法:1.收集2015年6月至2016年3月期間在蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院感染科住院的26例慢加急性肝衰竭病人及10例健康體檢者(HCs)EDTA抗凝血,采用RT-PCR檢測(cè)單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)內(nèi)GRa及GRβ的表達(dá),比較兩組的GRa及GRβ表達(dá)差異,以及ACLF死亡者與存活者GRa及GRβ表達(dá)差異,分析GR與預(yù)后的關(guān)系。2.建立動(dòng)物模型,將35只Balb/c小鼠隨機(jī)分成正常對(duì)照組(第1組)、慢性肝損害組(第2組)、肝衰竭組(第3組)、1mg/Kg甲強(qiáng)龍治療組(第4組)、2mg/Kg甲強(qiáng)龍治療組(第5組)。除了正常組外,其余四組采用食用油稀釋成20%的四氯化碳(CCl4)5ml/Kg腹腔注射,2次/周共8周,8周末第3、4、5組用D-氨基半乳糖(D-GalN)500mg/Kg及內(nèi)毒素(LPS)100ug/Kg腹腔注射,建立慢加急性肝衰竭模型,同時(shí)第4、5組分別用1mg/Kg及2mg/Kg甲強(qiáng)龍治療5天。3.HE后染色觀(guān)察肝臟病理鑒定造模成功,并用免疫組化及Western blot檢測(cè)GRa及GRβ的表達(dá)情況。同時(shí)用Western blot測(cè)定p38MAPK信號(hào)通路的活化情況,分析p38MAPK信號(hào)通路在肝衰竭時(shí)與GR亞型改變的關(guān)系及對(duì)GR的調(diào)控。結(jié)果:1.與健康人相比,ACLF患者外周血單個(gè)核細(xì)胞的GRαmRNA的表達(dá)水平降低(P0.05),而ACLF患者外周血單個(gè)核細(xì)胞的GRβmRNA的表達(dá)水平卻高于健康人(P0.05)。2.ACLF好轉(zhuǎn)組外周血單個(gè)核細(xì)胞的GRαmRNA的表達(dá)水平高于死亡組(P0.05),而GRβmRNA的表達(dá)水平無(wú)明顯差異(P0.05)。3.HE染色:8周后,第1組7只老鼠無(wú)死亡,肝臟表面光滑,肝細(xì)胞完整,形態(tài)正常;第2組死亡2只,肝臟增大,表面粗糙,鏡下出現(xiàn)脂肪變及纖維化;第3組死亡3只,肝組織充血腫脹,肝細(xì)胞在纖維化的基礎(chǔ)上出現(xiàn)大塊及亞大塊壞死,中央靜脈及膽管周?chē)霈F(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn);第4、5組經(jīng)激素干預(yù)后均死亡1只,肝臟損傷的程度有所減輕。4.免疫組化:GRa在5組老鼠肝細(xì)胞均有表達(dá),肝衰竭組GRa的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)最少,正常組慢性肝損害組、激素治療組肝衰竭組,而肝衰竭組GRβ陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)最多。5.Western blot:GRa及GRβ的表達(dá)情況與免疫組化檢測(cè)的五組GRa及GRβ的表達(dá)的強(qiáng)弱趨勢(shì)相同。肝衰竭組老鼠肝臟磷酸化的p38MAPK表達(dá)量增加,經(jīng)激素干預(yù)后,磷酸化的p38MAPK表達(dá)量降低,且與GRa的改變相平行。結(jié)論:1.肝衰竭時(shí)GRa表達(dá)降低而GRβ的表達(dá)增高,可能與肝衰竭時(shí)的炎癥細(xì)胞因子顯著上調(diào)GRβ的表達(dá),對(duì)GRa的作用較弱,而增高的GRβ可以與GRa結(jié)合成二聚體干擾其生物學(xué)活性。2.ACLF好轉(zhuǎn)組GRαmRNA的表達(dá)水平高于死亡組(P0.05),而GRβmRNA的表達(dá)水平無(wú)明顯差異(P0.05),說(shuō)明可以用GRa來(lái)預(yù)測(cè)ACLF的預(yù)后。3.從HE染色的結(jié)果觀(guān)察,CCl4能夠誘導(dǎo)小鼠形成慢性肝損害,聯(lián)合D-GalN及LPS可以誘導(dǎo)慢加急性肝衰竭,而激素干預(yù)可以改善肝臟損害程度。4.p38MAPK信號(hào)通路在肝衰竭時(shí)被激活,并參與了GR改變的調(diào)控,而激素干預(yù)通過(guò)抑制通路的激活發(fā)揮抗炎作用。
【關(guān)鍵詞】：慢加急性肝衰竭 GRα GRβ 模型 p38MAPK
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R575.3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 前言10-13
• 參考文獻(xiàn)11-13
• 第一部分 糖皮質(zhì)激素受體在慢加急性肝衰竭患者中的表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系13-20
• 材料13-14
• 實(shí)驗(yàn)方法14-16
• 結(jié)果16-17
• 討論17-20
• 第二部分 慢加急性肝衰竭動(dòng)物模型的建立及鑒定20-29
• 材料20-21
• 實(shí)驗(yàn)方法21-23
• 結(jié)果23-26
• 討論26-29
• 第三部分 P38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在肝衰竭時(shí)對(duì)糖皮質(zhì)激素受體的調(diào)控29-36
• 材料29-31
• 實(shí)驗(yàn)方法31-33
• 結(jié)果33
• 討論33-36
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 綜述39-46
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 中英文縮率詞表46-47
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文47-48
• 致謝48-49

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