本文關(guān)鍵詞：異甘草素對IFN-γ誘導(dǎo)的肝細(xì)胞炎癥反應(yīng)的作用及其機(jī)制研究

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【摘要】：背景和目的肝炎是一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題,病毒性肝炎是肝炎中的主要類型,在我國尤其是HBV感染引起的乙型肝炎。這類疾病的發(fā)生和發(fā)展與病毒、宿主遺傳易感性和機(jī)體免疫力受損等多種因素相關(guān)。這些因素不僅引起急慢性肝炎,而且與肝纖維化、肝衰竭、肝癌等密切相關(guān)。趨化因子和細(xì)胞因子之間的相互作用是促進(jìn)肝臟炎癥進(jìn)展的一個(gè)重要決定因素。γ干擾素(Interferon-y,IFN-γ)在抵御病毒感染中起著關(guān)鍵的作用,主要介導(dǎo)Th1型炎癥反應(yīng),可誘導(dǎo)趨化因子(C-X-C基序)配體(Chemokine (C-X-C motif) ligand) (CXCL9,CXCL10,CXCL11)和細(xì)胞因子,如白介素(Ⅰnterleukin,IL)-6,腫瘤壞死因子(Tumour necrosis factor,TNF)-a等產(chǎn)生。這些炎性因子之間相互影響可以形成一個(gè)炎性惡性循環(huán),是導(dǎo)致肝內(nèi)持續(xù)炎癥反應(yīng)的主要機(jī)制. CXCL9, CXCL10 和 CXCL11被統(tǒng)稱為IFN-γ誘導(dǎo)基因,均屬于趨化因子受體3 (C-X-C motif chemokine receptor 3,CXCR3)配體,其中CXCL10在肝病中研究最為廣泛,它又被稱為IFN-γ誘導(dǎo)蛋白10(IFN-gamma inducible protein 10,IP-10).多項(xiàng)研究表明,IFN-γ誘導(dǎo)基因具有多種生物學(xué)效應(yīng),與其受體CXCR3結(jié)合有助于病毒清除的同時(shí),也通過募集炎性效應(yīng)細(xì)胞分泌各種炎癥介質(zhì)。IFN-γ誘導(dǎo)基因在多種病毒性肝炎中表達(dá)水平異常增高,進(jìn)一步加重組織損傷,在慢性肝炎的發(fā)生、發(fā)展、治療、預(yù)后等都起著重要的作用。抑制這些炎性因子可改善各種肝炎引起的不良后果。而CXCR3及其配體成為治療肝炎新的治療靶點(diǎn)。異甘草素(4,2',4'-trihydroxychalcone, Isoliquiritigenin, ISL)是一種異黃酮類化合物。它是甘草抗炎的活性成分之一,在甘草中含量極少卻具有廣泛的藥理活性,如抗氧化、抗炎、抗血小板聚集和抗癌等。其中,ISL的抗炎作用是近年來研究的熱點(diǎn)。本研究旨在探索ISL抗肝臟炎癥的作用及其在肝細(xì)胞內(nèi)可能的抗炎機(jī)制。研究方法1、檢測不同病情程度的乙型肝炎患者血清中的CXCL10水平。研究人群被分為以下幾組：乙肝病毒攜帶者、輕度慢性乙型肝炎患者、中度慢性乙型肝炎患者、重度慢性乙型肝炎患者和健康對照組,每組各21例。用ELISA法檢測各組血清中CXCL10的表達(dá)水平。2、構(gòu)建IFN-γ誘導(dǎo)肝細(xì)胞炎癥反應(yīng)細(xì)胞模型及分析ISL對炎性因子的影響。HepG2和L02細(xì)胞暴露于不同濃度的IFN-γ和／或ISL作用不同時(shí)間。用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8(CCK8)法進(jìn)行細(xì)胞活力評估；再分別用qRT-PCR和ELISA檢測細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞上清中趨化因子CXCL9, CXCL10, CXCL11或(和)IL-6的mRNA水平或者蛋白水平。3、分析ISL影響IFN-γ誘導(dǎo)的肝細(xì)胞炎性因子高表達(dá)的分子機(jī)制將HepG2和L02細(xì)胞暴露于WN-γ,不同濃度的ISL,以及IFN-γ聯(lián)合不同濃度ISL中,用免疫印跡法Western Blot (WB)檢測IFN-γ誘導(dǎo)的信號(hào)通路或ISL作用相關(guān)信號(hào)通路Janus激酶(Janus kinase, JAK)／信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子1 (Signal transducer and activator of transcription 1, STAT1),核因子-κB (Nuclear factor kappa B, NF-κB),干擾素調(diào)節(jié)因子3(Interferon regulatory factor 3, IRF3)／髓樣分化因子88(Myeloid differentiation factor 88, MyD88),促分裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases, MAPK),磷酸肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol 3 kinase, PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B, PKB/Akt)的磷酸化和(或)總蛋白水平。結(jié)果1、CXCL10表達(dá)水平與乙型肝炎患者病情嚴(yán)重程度有正相關(guān)性與健康對照組相比,乙型肝炎患者血清中CXCL10水平均顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在慢性重度乙型肝炎患者血清中CXCL10表達(dá)水平最高,提示與乙型肝炎嚴(yán)重程度有相關(guān)性。2、在H epG2和L02的細(xì)胞中,用IFN-γ處理后CXCL9, CXCL10, CXCL11和IL-6的表達(dá)水平增高,這種高表達(dá)可被ISL抑制,呈劑量依賴性(IFN-γ+5μg/mlISL組vs IFN-y誘導(dǎo)組,P0.05)。當(dāng)ISL處理劑量達(dá)到5μg/ml時(shí),與IFN-γ誘導(dǎo)組相比,ISL對IL-6抑制水平小于50%,而對三種趨化因子抑制水平均大于50%。說明ISL對高表達(dá)CXCL9-11的抑制效果比ISL對IL-6的抑制效果更顯著。3、ISL預(yù)處理可抑制JAK1/STAT1、IRF3/MyD88、ERK/MAPK、JNK/MAPK和PI3K/Akt信號(hào)途徑的激活,且呈劑量依賴效應(yīng)(IFN-γ+5μg/ml ISL組vs IFN-γ誘導(dǎo)組,P0.05),但對JAK2, NF-κB和p38/MAPK信號(hào)途徑的激活沒有作用。結(jié)論在肝細(xì)胞內(nèi)ISL可下調(diào)IFN-γ誘導(dǎo)的炎性因子的表達(dá)水平。其分子機(jī)制是通過影響JAK1/STAT1, ERK/MAPK, JNK/MAPK, IRF3/MyD88 β Akt/PI3K信號(hào)通路的活化來發(fā)揮抗炎作用。
【關(guān)鍵詞】：異甘草素 γ干擾素誘導(dǎo)基因 CXCR3配體 HepG2 L02 CXCL9 CXCL10 CXCL11 IL-6
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R512.6
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 英文縮略詞簡表12-15
• 1. 引言15-17
• 2. 材料與方法17-38
• 3. 結(jié)果38-51
• 4. 討論51-55
• 5. 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-61
• 綜述61-81
• 參考文獻(xiàn)73-81
• 作者簡歷81-82

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 Juan R Larrubia;Selma Benito-Martínez;Miryam Calvino;Eduardo Sanz-de-Villalobos;Trinidad Parra-Cid;;Role of chemokines and their receptors in viral persistence and liver damage during chronic hepatitis C virus infection[J];World Journal of Gastroenterology;2008年47期

2 ;Expression of CXC chemokine IP-10 in patients with chronic hepatitis B[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2008年01期

3 Ronnie T.Poon;Jeremy Hughes;Wan-Ching Yu;Sheung-Tat Fan;;Desensitization of T lymphocyte function by CXCR3 ligands in human hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2005年02期

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本文編號(hào)：733169