本文關鍵詞：異甘草素對IFN-γ誘導的肝細胞炎癥反應的作用及其機制研究

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【摘要】：背景和目的肝炎是一個嚴重的公共衛(wèi)生問題,病毒性肝炎是肝炎中的主要類型,在我國尤其是HBV感染引起的乙型肝炎。這類疾病的發(fā)生和發(fā)展與病毒、宿主遺傳易感性和機體免疫力受損等多種因素相關。這些因素不僅引起急慢性肝炎,而且與肝纖維化、肝衰竭、肝癌等密切相關。趨化因子和細胞因子之間的相互作用是促進肝臟炎癥進展的一個重要決定因素。γ干擾素(Interferon-y,IFN-γ)在抵御病毒感染中起著關鍵的作用,主要介導Th1型炎癥反應,可誘導趨化因子(C-X-C基序)配體(Chemokine (C-X-C motif) ligand) (CXCL9,CXCL10,CXCL11)和細胞因子,如白介素(Ⅰnterleukin,IL)-6,腫瘤壞死因子(Tumour necrosis factor,TNF)-a等產(chǎn)生。這些炎性因子之間相互影響可以形成一個炎性惡性循環(huán),是導致肝內(nèi)持續(xù)炎癥反應的主要機制. CXCL9, CXCL10 和 CXCL11被統(tǒng)稱為IFN-γ誘導基因,均屬于趨化因子受體3 (C-X-C motif chemokine receptor 3,CXCR3)配體,其中CXCL10在肝病中研究最為廣泛,它又被稱為IFN-γ誘導蛋白10(IFN-gamma inducible protein 10,IP-10).多項研究表明,IFN-γ誘導基因具有多種生物學效應,與其受體CXCR3結(jié)合有助于病毒清除的同時,也通過募集炎性效應細胞分泌各種炎癥介質(zhì)。IFN-γ誘導基因在多種病毒性肝炎中表達水平異常增高,進一步加重組織損傷,在慢性肝炎的發(fā)生、發(fā)展、治療、預后等都起著重要的作用。抑制這些炎性因子可改善各種肝炎引起的不良后果。而CXCR3及其配體成為治療肝炎新的治療靶點。異甘草素(4,2',4'-trihydroxychalcone, Isoliquiritigenin, ISL)是一種異黃酮類化合物。它是甘草抗炎的活性成分之一,在甘草中含量極少卻具有廣泛的藥理活性,如抗氧化、抗炎、抗血小板聚集和抗癌等。其中,ISL的抗炎作用是近年來研究的熱點。本研究旨在探索ISL抗肝臟炎癥的作用及其在肝細胞內(nèi)可能的抗炎機制。研究方法1、檢測不同病情程度的乙型肝炎患者血清中的CXCL10水平。研究人群被分為以下幾組：乙肝病毒攜帶者、輕度慢性乙型肝炎患者、中度慢性乙型肝炎患者、重度慢性乙型肝炎患者和健康對照組,每組各21例。用ELISA法檢測各組血清中CXCL10的表達水平。2、構建IFN-γ誘導肝細胞炎癥反應細胞模型及分析ISL對炎性因子的影響。HepG2和L02細胞暴露于不同濃度的IFN-γ和／或ISL作用不同時間。用細胞計數(shù)試劑盒8(CCK8)法進行細胞活力評估；再分別用qRT-PCR和ELISA檢測細胞內(nèi)和細胞上清中趨化因子CXCL9, CXCL10, CXCL11或(和)IL-6的mRNA水平或者蛋白水平。3、分析ISL影響IFN-γ誘導的肝細胞炎性因子高表達的分子機制將HepG2和L02細胞暴露于WN-γ,不同濃度的ISL,以及IFN-γ聯(lián)合不同濃度ISL中,用免疫印跡法Western Blot (WB)檢測IFN-γ誘導的信號通路或ISL作用相關信號通路Janus激酶(Janus kinase, JAK)／信號轉(zhuǎn)導子和轉(zhuǎn)錄激活子1 (Signal transducer and activator of transcription 1, STAT1),核因子-κB (Nuclear factor kappa B, NF-κB),干擾素調(diào)節(jié)因子3(Interferon regulatory factor 3, IRF3)／髓樣分化因子88(Myeloid differentiation factor 88, MyD88),促分裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases, MAPK),磷酸肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol 3 kinase, PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B, PKB/Akt)的磷酸化和(或)總蛋白水平。結(jié)果1、CXCL10表達水平與乙型肝炎患者病情嚴重程度有正相關性與健康對照組相比,乙型肝炎患者血清中CXCL10水平均顯著增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。在慢性重度乙型肝炎患者血清中CXCL10表達水平最高,提示與乙型肝炎嚴重程度有相關性。2、在H epG2和L02的細胞中,用IFN-γ處理后CXCL9, CXCL10, CXCL11和IL-6的表達水平增高,這種高表達可被ISL抑制,呈劑量依賴性(IFN-γ+5μg/mlISL組vs IFN-y誘導組,P0.05)。當ISL處理劑量達到5μg/ml時,與IFN-γ誘導組相比,ISL對IL-6抑制水平小于50%,而對三種趨化因子抑制水平均大于50%。說明ISL對高表達CXCL9-11的抑制效果比ISL對IL-6的抑制效果更顯著。3、ISL預處理可抑制JAK1/STAT1、IRF3/MyD88、ERK/MAPK、JNK/MAPK和PI3K/Akt信號途徑的激活,且呈劑量依賴效應(IFN-γ+5μg/ml ISL組vs IFN-γ誘導組,P0.05),但對JAK2, NF-κB和p38/MAPK信號途徑的激活沒有作用。結(jié)論在肝細胞內(nèi)ISL可下調(diào)IFN-γ誘導的炎性因子的表達水平。其分子機制是通過影響JAK1/STAT1, ERK/MAPK, JNK/MAPK, IRF3/MyD88 β Akt/PI3K信號通路的活化來發(fā)揮抗炎作用。
【關鍵詞】：異甘草素 γ干擾素誘導基因 CXCR3配體 HepG2 L02 CXCL9 CXCL10 CXCL11 IL-6
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R512.6
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 英文縮略詞簡表12-15
• 1. 引言15-17
• 2. 材料與方法17-38
• 3. 結(jié)果38-51
• 4. 討論51-55
• 5. 結(jié)論55-56
• 參考文獻56-61
• 綜述61-81
• 參考文獻73-81
• 作者簡歷81-82

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 Juan R Larrubia;Selma Benito-Martínez;Miryam Calvino;Eduardo Sanz-de-Villalobos;Trinidad Parra-Cid;;Role of chemokines and their receptors in viral persistence and liver damage during chronic hepatitis C virus infection[J];World Journal of Gastroenterology;2008年47期

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本文編號：733169