本文關(guān)鍵詞：Erbin在TGF-β信號通路介導(dǎo)的胰腺星狀細(xì)胞（PSC）EMT改變中的表達(dá)

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【摘要】：第一部分組織塊法分離培養(yǎng)小鼠PSC目的:利用組織塊法分離培養(yǎng)CP模型組和對照組PSC,并分析兩組分選細(xì)胞的差異。方法:雨蛙素誘導(dǎo)制備小鼠CP模型,HE染色觀察胰腺纖維化改變;取CP組和對照組小鼠胰腺組織,胎牛血清清洗,剪切至小米粒大小貼壁培養(yǎng),觀察兩組細(xì)胞及傳代前后細(xì)胞形態(tài)學(xué)差異,采用油紅O染色鑒定靜息態(tài)PSC,免疫細(xì)胞化學(xué)/熒光法標(biāo)記α-SMA和Desmin,熒光定量PCR對比靜息和活化PSCα-SMA和Desmin的m RNA表達(dá)量;利用免疫細(xì)胞化學(xué)/熒光法標(biāo)記胰腺導(dǎo)管細(xì)胞標(biāo)志物CK19和SOX9,及腺泡細(xì)胞標(biāo)志物Chymotrypsin和Amylase。結(jié)果:(1)HE染色:造模組胰腺發(fā)生纖維化改變,腺泡細(xì)胞導(dǎo)管化;(2)形態(tài)學(xué)觀察:貼壁4天細(xì)胞多呈類圓形或星形,核周環(huán)繞脂滴,傳代細(xì)胞體積增大,立體感消失,呈“星芒狀”,脂滴消失,CP組細(xì)胞形態(tài)體積小于對照組;(3)油紅O染色:CP組和對照組早期細(xì)胞均染色,傳代細(xì)胞未著色;(4)免疫細(xì)胞化學(xué)/熒光:兩組細(xì)胞傳代后,α-SMA和Desmin標(biāo)記均陽性,CK19、SOX9、Chymotrypsin、Amylase標(biāo)記均陰性;(5)熒光定量PCR:對照組傳代細(xì)胞和CP組細(xì)胞α-SMA m RNA含量明顯高于對照組早期細(xì)胞。結(jié)論:組織塊法可成功分選CP模型組和對照組PSC,且兩組貼壁早期細(xì)胞均為靜息狀態(tài)。第二部分Erbin及TGF-β1在CP模型組和對照組PSC中的表達(dá)差異目的:探討Erbin及TGF-β1在CP模型組和對照組PSC中的表達(dá)差異方法:采用雨蛙素腹腔注射法制備CP模型鼠,組織塊法分離提取PSC,運(yùn)用熒光定量PCR和Western blot技術(shù)比較CP組和對照組PSC中Erbin及TGF-β1m RNA和蛋白表達(dá)量的差異。結(jié)果:(1)CP組Erbin表達(dá)較對照組顯著升高,其轉(zhuǎn)錄水平為對照組的6.36倍,蛋白水平為對照組的6.79倍,P0.05;(2)TGF-β1在CP組中的表達(dá)明顯高于對照組,其m RNA和蛋白分別為對照組的3.99倍和1.43倍,P0.05.結(jié)論:Erbin和TGF-β1在胰腺纖維化過程中呈一致性升高,Erbin可能通過調(diào)控TGF-β1通路參與胰腺纖維化的發(fā)生。第三部分Erbin在TGF-β1誘導(dǎo)的EMT過程中的表達(dá)目的:探討TGF-β1誘導(dǎo)PSC活化過程中是否發(fā)生EMT樣改變及Erbin和TGF-β信號通路在PSC發(fā)生EMT過程中的表達(dá)變化。方法:用10ng/ml TGF-β1刺激貼壁第4天PSC 48h,觀察細(xì)胞形態(tài)改變,并采用熒光定量PCR和Western blot技術(shù)檢測TGF-β1處理前后細(xì)胞E-cadherin、α-SMA、Erbin及TGF-β信號通路靶點(diǎn)分子的表達(dá)變化。結(jié)果:(1)TGF-β1處理過的PSC體積增大,立體感消失,脂滴減少、消失;(2)TGF-β1處理的細(xì)胞E-cadherin m RNA(0.33:1)和蛋白(0.07:1)表達(dá)均下調(diào)(P0.05),α-SMA m RNA(2.91:1)和蛋白(3.40:1)表達(dá)均上調(diào)(P0.05);(3)熒光定量PCR結(jié)果示,TGF-β1處理細(xì)胞Erbin(13.03倍)、TGF-β1(2.94倍)及其下游的Smad 3(2.08倍)和ERK(2.99倍)m RNA均表達(dá)增加(P0.05);(4)Western blot結(jié)果示,TGF-β1處理的細(xì)胞Erbin、TGF-β1、Smad 3及ERK蛋白表達(dá)均升高,分別為未處理細(xì)胞的2.28倍、1.30倍、3.15倍及1.73倍(P0.05)。結(jié)論:PSC活化過程發(fā)生EMT樣改變,并上調(diào)Erbin、TGF-β/Smad通路及ERK通路靶點(diǎn)分子表達(dá),參與胰腺纖維化的形成。
【關(guān)鍵詞】：組織塊法 胰腺星狀細(xì)胞(PSC) 分離 鑒定 慢性胰腺炎(CP) 慢性胰腺炎(CP) Erbin TGF-β1 胰腺星狀細(xì)胞(PSC) EMT Erbin TGF-β1 Smad 3 ERK
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R576
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 縮略詞表10-11
• 前言11-13
• 第一部分 組織塊法分離培養(yǎng)小鼠PSC13-31
• 一、實(shí)驗(yàn)材料13-16
• 二、實(shí)驗(yàn)方法16-23
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-28
• 四、討論28-31
• 第二部分ERBIN及TGFΒ-1 在CP模型組和對照組PSC中的表達(dá)差異31-44
• 一、實(shí)驗(yàn)材料31-35
• 二、實(shí)驗(yàn)方法35-40
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-42
• 四、討論42-44
• 第三部分ERBIN在TGF-Β1 誘導(dǎo)的EMT過程中的表達(dá)44-59
• 一、實(shí)驗(yàn)材料44-49
• 二、實(shí)驗(yàn)方法49-52
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果52-56
• 四、討論56-59
• 全文總結(jié)59-60
• 參考文獻(xiàn)60-66
• 綜述66-71
• 參考文獻(xiàn)69-71
• 碩士期間發(fā)表文章及科研工作71-72
• 致謝72-73

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本文編號：726232