本文關(guān)鍵詞：RHL抑制大鼠肝纖維化及LX-2細(xì)胞增殖的機(jī)制

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【摘要】：目的通過體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討賴氨大黃酸(RHL)抗大鼠膽汁淤積性肝纖維化的具體分子機(jī)制。于此同時(shí),體外培養(yǎng)人肝星形細(xì)胞(HSC)中的LX-2細(xì)胞株,探討RHL抑制HSC活化、增殖的具體作用機(jī)制。為RHL治療膽汁淤積性肝纖維化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1)體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn):(1)將30只雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、賴氨酸組、35 mg·kg-1及70 mg·kg-1RHL組,每組6只,膽總管結(jié)扎(BDL)手術(shù)制備膽汁淤積性肝纖維化動(dòng)物模型。(2)進(jìn)行HE染色,鏡下觀察各組大鼠肝臟組織病理學(xué)改變;Masson染色觀察各組大鼠肝臟組織纖維化程度。(3)應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(q RT-PCR)檢測(cè)各組大鼠肝臟組織中Smad2、Smad3 m RNA的相對(duì)表達(dá)量。(4)采用Western blotting方法,檢測(cè)各組大鼠肝臟組織中Smad2、Smad3的蛋白相對(duì)表達(dá)量。2)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn):(1)體外培養(yǎng)HSC中的LX-2細(xì)胞株,分成四個(gè)實(shí)驗(yàn)組,分別為對(duì)照組、RHL三個(gè)劑量組(50、100和150μmol·l-1)。(2)用流式細(xì)胞術(shù)方法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組LX-2細(xì)胞的細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期情況。(3)免疫組織化學(xué)檢測(cè)Smad2和Smad3在各實(shí)驗(yàn)組LX-2細(xì)胞中的表達(dá)情況。(4)應(yīng)用q RT-PCR檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)中Smad2、Smad3 m RNA的相對(duì)表達(dá)。(5)采用Western blotting方法,檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組LX-2細(xì)胞中Smad2、Smad3蛋白相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果1)體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn):(1)病理學(xué)檢查結(jié)果可見,與假手術(shù)組比較,模型組大鼠肝臟組織中肝小葉結(jié)構(gòu)大量被破壞,匯管區(qū)顯著增生并伴纖維大量增生;與模型組比較,RHL組大鼠肝臟組織中的肝臟小葉結(jié)構(gòu)較為完整,結(jié)構(gòu)損傷輕微,膽管周圍輕度增生,纖維堆積較少且不明顯。動(dòng)物模型建立成功。(2)q RT-PCR和Western blotting結(jié)果顯示,與假手術(shù)組比較,模型組大鼠肝臟組織中Smad2、Smad3 m RNA和蛋白表達(dá)水平升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型組比較,RHL組大鼠肝臟組織中Smad2、Smad3 m RNA和蛋白表達(dá)水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn):(1)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,RHL組LX-2細(xì)胞GO/1期細(xì)胞比例明顯升高,S期細(xì)胞比例明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示Smad2和Smad3在LX-2細(xì)胞胞漿中表達(dá),與對(duì)照組相比,RHL組細(xì)胞的表達(dá)量明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)q RT-PCR和Western blotting結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,RHL組處理過得LX-2細(xì)胞中Smad2、Smad3 m RNA和蛋白表達(dá)水平下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1)RHL可能是通過抑制TGF-β1/Smads信號(hào)通路的傳導(dǎo),達(dá)到抗纖維化的作用。2)RHL可能是通過促進(jìn)LX-2細(xì)胞的凋亡,達(dá)到抑制LX-2細(xì)胞增殖的作用。3)RHL可能是通過抑制TGF-β1/Smads信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo),達(dá)到抑制HSC細(xì)胞活化的作用。
【關(guān)鍵詞】：賴氨大黃酸 肝纖維化 LX-2 Smad2 Smad3
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• abstract6-10
• 英文縮略表10-11
• 引言11-13
• 第1章 RHL抑制大鼠肝纖維化及LX-2 細(xì)胞增殖的機(jī)制13-42
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料13-17
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物13
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞13
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑13-14
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)主要配制試劑14-17
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法17-26
• 1.2.1 動(dòng)物分組及模型的建立17-18
• 1.2.2 實(shí)驗(yàn)BDL大鼠標(biāo)本收集18
• 1.2.3 實(shí)驗(yàn)大鼠病理學(xué)檢測(cè)18-19
• 1.2.4 qRT-PCR 檢測(cè)大鼠肝臟組織中Smad2和Smad3 mRNA相對(duì)含量19-21
• 1.2.5 West blotting檢測(cè)大鼠肝臟組織中Smad2和Smad3蛋白含量21-22
• 1.2.6 細(xì)胞學(xué)分組22
• 1.2.7 細(xì)胞的復(fù)蘇、傳代與凍存22-23
• 1.2.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)RHL對(duì)LX-2 細(xì)胞周期及凋亡的影響23
• 1.2.9 免疫組化檢測(cè)LX-2 細(xì)胞中Smad2和Smad3的表達(dá)量23-24
• 1.2.10 qRT-PCR檢測(cè)LX-2 細(xì)胞中Smad2和Smad3 mRNA相對(duì)表達(dá)量水平24-25
• 1.2.11 West blotting檢測(cè)LX-2 細(xì)胞中Smad2和Smad3的蛋白相對(duì)含量25-26
• 1.2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析26
• 1.3 結(jié)果26-39
• 1.3.1 實(shí)驗(yàn)大鼠造模結(jié)果26-27
• 1.3.2 RHL治療后實(shí)驗(yàn)大鼠肝臟組織病理學(xué)結(jié)果27-29
• 1.3.3 RHL治療后各實(shí)驗(yàn)組大鼠肝臟組織中Smad2和Smad3 mRNA相對(duì)表達(dá)水平29-31
• 1.3.4 RHL治療后各實(shí)驗(yàn)組大鼠肝臟組織中Smad2和Smad3蛋白相對(duì)表達(dá)水平31-32
• 1.3.5 RHL處理后LX-2 細(xì)胞的細(xì)胞周期及凋亡32-34
• 1.3.6 RHL處理后LX-2 細(xì)胞中Smad2和Smad3的蛋白表達(dá)34-36
• 1.3.7 RHL處理后LX-2 細(xì)胞中Smad2和Smad3 mRNA相對(duì)表達(dá)水平36-37
• 1.3.8 RHL處理后LX-2 細(xì)胞中Smad2和Smad3蛋白的相對(duì)表達(dá)水平37-39
• 1.4 討論39-42
• 1.5 小結(jié)42
• 參考文獻(xiàn)42-44
• 第2章 綜述44-55
• 前言44
• 2.1 肝纖維化的發(fā)病機(jī)制44-48
• 2.1.1 肝纖維化中ECM的作用44-45
• 2.1.2 肝纖維化中HSC的作用45-46
• 2.1.3 肝纖維化相關(guān)細(xì)胞因子及相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)通路46-48
• 2.2 中醫(yī)藥治療肝纖維化48-51
• 2.3 小結(jié)51
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 結(jié)論55-56
• 致謝56-57
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介57-59
• 作者簡(jiǎn)介59-60
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集60

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