本文關鍵詞：RHL抑制大鼠肝纖維化及LX-2細胞增殖的機制

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【摘要】：目的通過體內(nèi)動物實驗探討賴氨大黃酸(RHL)抗大鼠膽汁淤積性肝纖維化的具體分子機制。于此同時,體外培養(yǎng)人肝星形細胞(HSC)中的LX-2細胞株,探討RHL抑制HSC活化、增殖的具體作用機制。為RHL治療膽汁淤積性肝纖維化提供實驗依據(jù)。方法1)體內(nèi)動物實驗:(1)將30只雄性SD大鼠隨機分為假手術組、模型組、賴氨酸組、35 mg·kg-1及70 mg·kg-1RHL組,每組6只,膽總管結扎(BDL)手術制備膽汁淤積性肝纖維化動物模型。(2)進行HE染色,鏡下觀察各組大鼠肝臟組織病理學改變;Masson染色觀察各組大鼠肝臟組織纖維化程度。(3)應用實時熒光定量PCR(q RT-PCR)檢測各組大鼠肝臟組織中Smad2、Smad3 m RNA的相對表達量。(4)采用Western blotting方法,檢測各組大鼠肝臟組織中Smad2、Smad3的蛋白相對表達量。2)體外細胞實驗:(1)體外培養(yǎng)HSC中的LX-2細胞株,分成四個實驗組,分別為對照組、RHL三個劑量組(50、100和150μmol·l-1)。(2)用流式細胞術方法檢測各實驗組LX-2細胞的細胞凋亡及細胞周期情況。(3)免疫組織化學檢測Smad2和Smad3在各實驗組LX-2細胞中的表達情況。(4)應用q RT-PCR檢測各實驗中Smad2、Smad3 m RNA的相對表達。(5)采用Western blotting方法,檢測各實驗組LX-2細胞中Smad2、Smad3蛋白相對表達量。結果1)體內(nèi)動物實驗:(1)病理學檢查結果可見,與假手術組比較,模型組大鼠肝臟組織中肝小葉結構大量被破壞,匯管區(qū)顯著增生并伴纖維大量增生;與模型組比較,RHL組大鼠肝臟組織中的肝臟小葉結構較為完整,結構損傷輕微,膽管周圍輕度增生,纖維堆積較少且不明顯。動物模型建立成功。(2)q RT-PCR和Western blotting結果顯示,與假手術組比較,模型組大鼠肝臟組織中Smad2、Smad3 m RNA和蛋白表達水平升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與模型組比較,RHL組大鼠肝臟組織中Smad2、Smad3 m RNA和蛋白表達水平降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2)體外細胞實驗:(1)流式細胞術檢測結果顯示,與對照組比較,RHL組LX-2細胞GO/1期細胞比例明顯升高,S期細胞比例明顯降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(2)免疫組織化學染色結果顯示Smad2和Smad3在LX-2細胞胞漿中表達,與對照組相比,RHL組細胞的表達量明顯減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(3)q RT-PCR和Western blotting結果顯示,與對照組比較,RHL組處理過得LX-2細胞中Smad2、Smad3 m RNA和蛋白表達水平下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論1)RHL可能是通過抑制TGF-β1/Smads信號通路的傳導,達到抗纖維化的作用。2)RHL可能是通過促進LX-2細胞的凋亡,達到抑制LX-2細胞增殖的作用。3)RHL可能是通過抑制TGF-β1/Smads信號通路轉(zhuǎn)導,達到抑制HSC細胞活化的作用。
【關鍵詞】：賴氨大黃酸 肝纖維化 LX-2 Smad2 Smad3
【學位授予單位】：華北理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R575.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• abstract6-10
• 英文縮略表10-11
• 引言11-13
• 第1章 RHL抑制大鼠肝纖維化及LX-2 細胞增殖的機制13-42
• 1.1 實驗材料13-17
• 1.1.1 實驗動物13
• 1.1.2 實驗細胞13
• 1.1.3 實驗試劑13-14
• 1.1.4 實驗主要配制試劑14-17
• 1.2 實驗方法17-26
• 1.2.1 動物分組及模型的建立17-18
• 1.2.2 實驗BDL大鼠標本收集18
• 1.2.3 實驗大鼠病理學檢測18-19
• 1.2.4 qRT-PCR 檢測大鼠肝臟組織中Smad2和Smad3 mRNA相對含量19-21
• 1.2.5 West blotting檢測大鼠肝臟組織中Smad2和Smad3蛋白含量21-22
• 1.2.6 細胞學分組22
• 1.2.7 細胞的復蘇、傳代與凍存22-23
• 1.2.8 流式細胞術檢測RHL對LX-2 細胞周期及凋亡的影響23
• 1.2.9 免疫組化檢測LX-2 細胞中Smad2和Smad3的表達量23-24
• 1.2.10 qRT-PCR檢測LX-2 細胞中Smad2和Smad3 mRNA相對表達量水平24-25
• 1.2.11 West blotting檢測LX-2 細胞中Smad2和Smad3的蛋白相對含量25-26
• 1.2.12 統(tǒng)計學分析26
• 1.3 結果26-39
• 1.3.1 實驗大鼠造模結果26-27
• 1.3.2 RHL治療后實驗大鼠肝臟組織病理學結果27-29
• 1.3.3 RHL治療后各實驗組大鼠肝臟組織中Smad2和Smad3 mRNA相對表達水平29-31
• 1.3.4 RHL治療后各實驗組大鼠肝臟組織中Smad2和Smad3蛋白相對表達水平31-32
• 1.3.5 RHL處理后LX-2 細胞的細胞周期及凋亡32-34
• 1.3.6 RHL處理后LX-2 細胞中Smad2和Smad3的蛋白表達34-36
• 1.3.7 RHL處理后LX-2 細胞中Smad2和Smad3 mRNA相對表達水平36-37
• 1.3.8 RHL處理后LX-2 細胞中Smad2和Smad3蛋白的相對表達水平37-39
• 1.4 討論39-42
• 1.5 小結42
• 參考文獻42-44
• 第2章 綜述44-55
• 前言44
• 2.1 肝纖維化的發(fā)病機制44-48
• 2.1.1 肝纖維化中ECM的作用44-45
• 2.1.2 肝纖維化中HSC的作用45-46
• 2.1.3 肝纖維化相關細胞因子及相關信號傳導通路46-48
• 2.2 中醫(yī)藥治療肝纖維化48-51
• 2.3 小結51
• 參考文獻51-55
• 結論55-56
• 致謝56-57
• 導師簡介57-59
• 作者簡介59-60
• 學位論文數(shù)據(jù)集60

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