本文關(guān)鍵詞：JAZF1在非酒精性脂肪肝形成與發(fā)展中的作用機(jī)制研究

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【摘要】：第一部分JAZF1抵抗老齡化誘導(dǎo)的NAFLD的形成目的:探討JAZF1基因過表達(dá)在老齡化誘導(dǎo)的NAFLD形成中的作用。方法:15只8周齡的JAZF1轉(zhuǎn)基因小鼠(JAZF1-Tg鼠)和15只同年齡匹配的C57BL/6J小鼠(WT鼠)普食喂養(yǎng)3個(gè)時(shí)間段(3個(gè)月,6個(gè)月,12個(gè)月),每個(gè)時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)抽取JAZF1-Tg和WT鼠各5只,檢測(cè)隨著年齡的增長(zhǎng)各組小鼠的基礎(chǔ)生理代謝指標(biāo)以及肝臟中涉及脂肪酸從頭合成和氧化相關(guān)基因的m RNA及蛋白水平。結(jié)果:隨著年齡的增長(zhǎng),WT鼠肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯累積明顯增多(P0.05);與同齡的WT鼠比較,JAZF1-Tg鼠肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量明顯減少(P0.05);與同齡的WT鼠比較,喂養(yǎng)12個(gè)月后的JAZF1-Tg鼠血TG、TC含量明顯減少(P0.05);基因m RNA水平檢測(cè)顯示,與同齡WT鼠比較,喂養(yǎng)6個(gè)月和12個(gè)月后的JAZF1-Tg鼠肝臟中脂肪酸從頭合成相關(guān)基因(SREBP-1c,SCD-1,FAS,ACC-1)表達(dá)明顯下調(diào)(P0.05),而與脂肪酸氧化相關(guān)的基因((PPAR-α,CPT-1)表達(dá)變化不明顯(p0.05);隨著年齡的增長(zhǎng),JAZF1基因的m RNA和蛋白水平表達(dá)明顯下調(diào)(P0.05),而SREBP-1c基因的m RNA和蛋白水平表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05)。結(jié)論:隨著年齡的增長(zhǎng),肝臟中JAZF1基因表達(dá)下調(diào),JAZF1過表達(dá)可抵抗老齡化誘導(dǎo)的NAFLD的形成。第二部分JAZF1改善高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)的NAFLD的形成與發(fā)展目的:探討JAZF1在高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)的NAFLD的形成與發(fā)展中的作用及相關(guān)分子機(jī)制。方法:30只8周齡的JAZF1-Tg鼠和30只WT鼠分別隨機(jī)分為2組:普食喂養(yǎng)組(n=15)和高脂喂養(yǎng)組(n=15),各組小鼠喂養(yǎng)3個(gè)時(shí)間段(3個(gè)月,6個(gè)月,12個(gè)月),每個(gè)時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)抽取高脂和普食喂養(yǎng)的JAZF1-Tg和WT鼠各5只。檢測(cè)各時(shí)間段小鼠的基礎(chǔ)生理代謝指標(biāo)以及肝臟中涉及脂肪酸從頭合成與氧化相關(guān)基因的m RNA及蛋白水平。分析每個(gè)喂養(yǎng)階段小鼠肝臟中AMPK/ACC信號(hào)變化情況。結(jié)果:HE染色結(jié)果顯示,隨著喂養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),高脂喂養(yǎng)的WT鼠肝臟中脂肪變性程度逐漸加重,由最初少量肉眼可見的脂滴沉積,到彌漫性的脂肪變性,甚至高脂12個(gè)月的時(shí)候出現(xiàn)了大泡性脂肪變性以及炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)。但是,與同階段高脂喂養(yǎng)WT鼠比較,JAZF1-Tg鼠的基礎(chǔ)代謝指標(biāo)和肝臟中的TG,TC含量,以及組織學(xué)HE染色和油紅O染色結(jié)果均明顯改善。基因檢測(cè)顯示,與同階段喂養(yǎng)的高脂WT鼠比較,JAZF1-Tg鼠肝臟中脂肪從頭合成相關(guān)基因的m RNA(SREBP-1c,SCD-1,FAS,ACC-1)明顯下調(diào),相關(guān)蛋白SREBP-1和FAS表達(dá)也呈現(xiàn)明顯下調(diào)(P0.05),而與脂肪酸氧化相關(guān)基因的m RNA(PPAR-α,CPT-1)表達(dá)變化不明顯(p0.05);且在高脂喂養(yǎng)3個(gè)月和6個(gè)月時(shí),與WT鼠比較,JAZF1-Tg鼠肝臟AMPK信號(hào)檢測(cè)顯示,AMPK及其下游靶蛋白ACC的磷酸化均明顯增加(P0.05)。結(jié)論:JAZF1過表達(dá)主要通過減少脂肪的從頭合成,改善高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)的NAFLD的形成與發(fā)展。第三部分JAZF1減少脂肪酸誘導(dǎo)的肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)累積及相關(guān)機(jī)制研究目的:探討JAZF1在脂肪酸誘導(dǎo)的肝細(xì)胞脂肪變性中的作用及相關(guān)分子機(jī)制。方法:在小鼠的原代肝細(xì)胞(PMH細(xì)胞)以及人Hep G2肝癌細(xì)胞中,利用1m M的FFAs(OA:PA=2:1的比例)誘導(dǎo)肝脂肪變性細(xì)胞模型,同時(shí),利用JAZF1過表達(dá)病毒(Ad-JAZF1)和JAZF1的抑制病毒(sh JAZF1)分別過表達(dá)和抑制JAZF1的表達(dá),探討JAZF1基因在FFAs誘導(dǎo)的肝細(xì)胞脂質(zhì)累積中的作用,檢測(cè)脂肪酸從頭合成相關(guān)基因(SREBP-1c,SCD-1,FAS,ACC-1)的m RNA及相關(guān)蛋白的表達(dá),分析肝細(xì)胞中AMPK/ACC信號(hào)變化情況。同時(shí),構(gòu)建SREBP-1c基因啟動(dòng)子,雙熒光素酶報(bào)告基因分析JAZF1基因?qū)REBP-1c基因啟動(dòng)子的調(diào)控作用。結(jié)果:在小鼠的PMH和人Hep G2肝癌細(xì)胞中,均成功誘導(dǎo)了肝脂肪變性細(xì)胞模型。在兩種肝脂肪變性細(xì)胞中,JAZF1過表達(dá)減少FFAs誘導(dǎo)的PMH和Hep G2細(xì)胞內(nèi)脂滴的累積,與Ad-GFP組比較,Ad-JAZF1組在FFAs誘導(dǎo)的脂肪變性肝細(xì)胞中脂肪酸從頭合成基因的m RNA(SREBP-1c,SCD-1,FAS,ACC-1)和相關(guān)蛋白(SREBP-1,FAS)表達(dá)明顯下調(diào)(P0.05);JAZF1抑制增多FFAs誘導(dǎo)的PMH和Hep G2細(xì)胞內(nèi)脂滴的累積,與HK組比較,sh JAZF1組在FFAs誘導(dǎo)的兩種脂肪變性肝細(xì)胞中脂肪酸從頭合成相關(guān)基因的m RNA(SREBP-1c,SCD-1,FAS,ACC-1)和相關(guān)蛋白(SREBP-1,FAS)表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05);與Ad-GFP組比較,Ad-JAZF1組在FFAs誘導(dǎo)的兩種脂肪變性肝細(xì)胞中AMPK及其下游靶蛋白ACC的磷酸化均明顯增加;與HK組比較,sh JAZF1組在FFAs誘導(dǎo)的Hep G2脂肪變性肝細(xì)胞中AMPK及其下游靶蛋白ACC的磷酸化均明顯下降,在PMH脂肪變性肝細(xì)胞中,AMPK的磷酸化雖下降趨勢(shì)不明顯,但是ACC的磷酸化下降有明顯差異(P0.05);雙熒光素酶報(bào)告基因分析JAZF1基因在基礎(chǔ)狀態(tài)下對(duì)SREBP-1c基因啟動(dòng)子無明顯調(diào)控作用(p0.05),但是在胰島素刺激下,JAZF1基因可顯著下調(diào)胰島素誘導(dǎo)的SREBP-1c基因啟動(dòng)子的活性(p0.05)。結(jié)論:JAZF1激活A(yù)MPK信號(hào),減少肝細(xì)胞內(nèi)脂肪的從頭合成,改善脂肪酸誘導(dǎo)的肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的累積。同時(shí),在胰島素的刺激下,JAZF1過表達(dá)可抑制胰島素誘導(dǎo)的SREBP-1c啟動(dòng)子活性。
【關(guān)鍵詞】：NAFLD JAZF1 SREBP-1c 老齡化 NAFLD JAZF1 SREBP-1 AMPK NAFLD JAZF1 SREBP-1 AMPK
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575.5
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照4-7
• 中文摘要7-13
• 英文摘要13-20
• 引言20-23
• 第一部分 JAZF1抵抗老齡化誘導(dǎo)的NAFLD的形成23-43
• 1 實(shí)驗(yàn)材料23-26
• 2 實(shí)驗(yàn)方法26-34
• 3 結(jié)果34-40
• 4 討論40-43
• 第二部分 JAZF1改善高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)的NAFLD的形成與發(fā)展43-59
• 1 實(shí)驗(yàn)材料43-44
• 2 實(shí)驗(yàn)方法44
• 3 結(jié)果44-57
• 4 討論57-59
• 第三部分 JAZF1減少脂肪酸誘導(dǎo)的肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)累積及相關(guān)機(jī)制研究59-84
• 1 實(shí)驗(yàn)材料59-62
• 2 實(shí)驗(yàn)方法62-68
• 3 結(jié)果68-81
• 4 討論81-84
• 全文總結(jié)84-86
• 課題的創(chuàng)新點(diǎn)與局限性86-87
• 參考文獻(xiàn)87-95
• 文獻(xiàn)綜述95-109
• 參考文獻(xiàn)101-109
• 致謝109-110
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果及發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄110

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Monjur Ahmed;;Non-alcoholic fatty liver disease in 2015[J];World Journal of Hepatology;2015年11期

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本文編號(hào)：709067