本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞自噬抑制肝細(xì)胞脂肪變性的作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 自噬 SIRT1 脂肪肝 白藜蘆醇 肝細(xì)胞

【摘要】：非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)目前已成為全球主要公共衛(wèi)生問(wèn)題之一,我國(guó)成年人患病率約占20%,且有逐步發(fā)展成肝硬化甚至肝癌的趨勢(shì),然而,至今尚未發(fā)現(xiàn)有效防治NAFLD的理想藥物。白藜蘆醇(Resveratrol,RSV)是一種天然多酚類植物化合物,已有報(bào)道稱其具有緩解NAFLD的生物學(xué)作用。但是其潛在的作用機(jī)制尚不清楚。自噬最近被認(rèn)為在防止NAFLD發(fā)展過(guò)程中有關(guān)鍵的保護(hù)作用。研究人員已經(jīng)發(fā)現(xiàn),自噬可將細(xì)胞內(nèi)部分或全部脂滴包裹在由自噬雙層膜結(jié)構(gòu)形成的囊泡內(nèi),并運(yùn)送至溶酶體,使之降解為脂肪酸。自噬的增加能促進(jìn)脂肪酸的β氧化,進(jìn)而減少肝臟脂質(zhì)的積累;同時(shí),當(dāng)自噬相關(guān)基因7(ATG7)敲除后自噬被沉默,進(jìn)一步加劇了NAFLD的進(jìn)展。有研究表明,RSV可通過(guò)激活內(nèi)皮細(xì)胞自噬,從而抑制內(nèi)皮細(xì)胞炎性反應(yīng)。RSV能否通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞自噬而抑制肝臟脂肪變性及RSV在細(xì)胞內(nèi)的確切作用靶點(diǎn)和機(jī)制還需要進(jìn)一步的研究。本課題使用PA處理HepG2細(xì)胞建立肝細(xì)胞脂肪變性實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?并用高脂肪飲食誘導(dǎo)小鼠建立NAFLD模型。首先,應(yīng)用油紅O染色法、HE染色法、甘油三酯(triglyceride,TG)含量檢測(cè)觀察RSV對(duì)肝細(xì)胞脂肪變性的影響;然后,應(yīng)用激光共聚焦、透射電鏡等技術(shù)檢測(cè)肝細(xì)胞自噬,并結(jié)合使用自噬激動(dòng)劑、自噬抑制劑、RNAi和質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,研究誘導(dǎo)肝細(xì)胞自噬在RSV改善肝脂肪變性中的作用。最后,應(yīng)用免疫印跡檢測(cè)了RSV對(duì)體內(nèi)外肝細(xì)胞上調(diào)沉默信息調(diào)節(jié)因子1(Silent information regulator1,SIRT1),蛋白激酶A(Protein kinase A,PRKA)和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phosphorylated Adenosine 5’-monophosphate activated protein kinase,pAMPK)的表達(dá)的影響,并應(yīng)用腺苷酸環(huán)化酶(Adenylyl cyclase,AC)抑制劑KH7,PRKA抑制劑H-89,AMPK抑制劑Compoud C或SIRT1抑制劑EX-527,或者使用PRKA,AMPK,SIRT1的siRNA處理細(xì)胞,深入研究cAMP/PRKA/AMPK/SIRT1信號(hào)通路在RSV誘導(dǎo)肝細(xì)胞自噬改善肝細(xì)胞脂肪變性中的作用。主要結(jié)果和結(jié)論如下:(1)RSV能明顯改善肝細(xì)胞脂肪變性,主要表現(xiàn)為能減少肝細(xì)胞中TG的含量。(2)自噬在RSV改善肝細(xì)胞脂肪變性中有關(guān)鍵作用。當(dāng)延長(zhǎng)RSV處理時(shí)間,及增加RSV的處理劑量,肝細(xì)胞的自噬表達(dá)水平都上升,而當(dāng)抑制自噬,RSV抑制肝細(xì)胞脂肪變性的作用減弱。(3)RSV調(diào)控肝細(xì)胞自噬過(guò)程中,SIRT1信號(hào)通路扮演著重要角色。RSV能顯著增加肝細(xì)胞cAMP的含量,促進(jìn)PRKA的表達(dá),進(jìn)而激活A(yù)MPK的表達(dá),并促進(jìn)SIRT1的表達(dá);而當(dāng)使用RNAi沉默干擾PRKA、AC、AMPK、SIRT1的表達(dá)或抑制PRKA、AC、AMPK、SIRT1的活性后,經(jīng)RSV處理,肝細(xì)胞的自噬表達(dá)水平明顯下降。實(shí)驗(yàn)證實(shí),在RSV促進(jìn)肝細(xì)胞自噬表達(dá)過(guò)程中,信號(hào)通路c AMP/PRKA/AMPK/SIRT1起著關(guān)鍵的調(diào)控作用。以上研究結(jié)果提示,RSV能通過(guò)調(diào)控SIRT1相關(guān)信號(hào)通路而激活自噬抑制肝細(xì)胞脂肪變性,從而實(shí)現(xiàn)其改善NAFLD的健康效應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：自噬 SIRT1 脂肪肝 白藜蘆醇 肝細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R575
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-7
• 英文摘要7-9
• 中文摘要9-11
• 第一章 前言11-14
• 實(shí)驗(yàn)方案與技術(shù)路線13-14
• 第二章 白藜蘆醇誘導(dǎo)細(xì)胞自噬改善肝細(xì)胞脂肪變性14-34
• 2.1 材料與方法14-27
• 2.2 結(jié)果27-34
• 第三章 SIRT1相關(guān)信號(hào)通路在白藜蘆醇誘導(dǎo)自噬中的作用34-51
• 3.1 材料與方法34-40
• 3.2 結(jié)果40-51
• 第四章 討論51-54
• 全文結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-58
• 文獻(xiàn)綜述 白藜蘆醇和槲皮素等多酚類物質(zhì)對(duì)肝脂肪變性的影響58-76
• 參考文獻(xiàn)69-76
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章76-77
• 致謝77

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 Sara Heeb鋂ll;Karen Louise Thomsen;Steen B Pedersen;Hendrik Vilstrup;Jacob George;Henning Gr鋂nb鈋k;;Effects of resveratrol in experimental and clinical non-alcoholic fatty liver disease[J];World Journal of Hepatology;2014年04期

，

本文編號(hào)：698919