本文關(guān)鍵詞：糖原合成酶激酶3β在肝功能衰竭的變化與意義

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【摘要】：目的:肝功能衰竭是多種因素引起的嚴(yán)重肝臟損害,是臨床常見的嚴(yán)重肝病癥候群,病死率極高。多年來,各國學(xué)者對肝衰竭的發(fā)病機制不斷進行探索,目前尚未完全闡明。糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)為糖原合成酶激酶3(glycogen synthase kinase 3,GSK3)的亞型。最新研究證實,GSK3參與炎癥的進程,其中GSK3β影響轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活性。本研究旨在通過檢測GSK3β在肝衰竭的表達,探討GSK3β對肝衰竭病情演變的影響。方法:1動物實驗通過D-氨基半乳糖(D-Galactosamine,D-Gal N)腹腔注射構(gòu)建小鼠急性肝衰竭(Acute liver failure,ALF)模型。檢測小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine transaminase,ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate transam inase,AST)、總膽紅素(Total bilirubin,TB)、凝血酶原時間(Prothrombintime,PT)水平;部分肝組織石蠟包埋后切片,用于蘇木素-伊紅(Hematoxylin-eosin,HE)染色觀察肝臟病理變化;余肝組織經(jīng)液氮速凍后,-80℃冰箱保存,用于實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-PCR)檢測肝組織GSK3βm RNA表達,免疫組織化學(xué)染色法檢測肝組織GSK3β、p-GSK3β的表達及分布,Western blot檢測肝組織GSK3β、p-GSK3β的表達。2臨床實驗選取2015年1月至2015年10月河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院門診或住院患者,共47例,其中慢性乙型病毒性肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)患者22例(CHB組)、HBV相關(guān)慢加急性肝功能衰竭(Acute on chronic liver failure,ACLF)患者25例(ACLF組),另外同期于河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院體檢中心選取20例健康體檢者作為健康對照(Healthy control)組。除此之外,收集接受肝移植的ACLF患者肝組織12例、肝組織活檢的CHB患者肝組織23例及正常供體肝組織4例。檢測入組患者血清ALT、ˉAST、TB、DB、INR、HBV DNA水平;酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-Linked Immunosorbent Assays,ELISA)檢測患者血清p-GSK3β、TNFα水平;RT-PCR檢測肝組織GSK3βm RNA表達;免疫組織化學(xué)染色法檢測肝組織GSK3β、p-GSK3β表達及分布;Western blot檢測肝組織GSK3β、p-GSK3β的表達。結(jié)果:1動物實驗部分1.1成功構(gòu)建小鼠肝衰竭模型實驗結(jié)果可見正常對照組小鼠毛發(fā)有光澤,精神狀態(tài)好,飲食量多;肝衰竭組小鼠毛發(fā)凌亂沒有光澤,飲食量、活動減少,精神欠佳,反應(yīng)遲鈍。1.2小鼠血清生化指標(biāo)肝衰竭組小鼠血清ALT、AST、TB、PT水平高于正常對照組(P均0.01)。1.3肝組織病理學(xué)改變正常對照組:肝小葉結(jié)構(gòu)清晰,以中央靜脈為軸,肝細胞索呈放射狀排列,肝細胞結(jié)構(gòu)完整,大小均勻,無變性及壞死,無炎細胞浸潤;肝衰竭組:肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂,肝細胞索消失,可見多處出血壞死灶,壞死灶可見細胞核的碎裂及壞死并有大量炎細胞浸潤。1.4肝組織GSK3βm RNA的表達肝衰組小鼠肝組織GSK3βm RNA表達水平較正常對照組明顯升高(P0.01)。1.5肝組織GSK3β、p-GSK3β的分布與表達免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:GSK3β、p-GSK3β主要表達于肝細胞胞漿。Western blot結(jié)果顯示:正常對照組、ALF組小鼠肝組織GSK3β表達水平無明顯差異(P0.05);ALF組小鼠肝組織p-GSK3β蛋白表達較正常對照組明顯降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。2臨床實驗部分2.1各組研究對象年齡及性別比例具有可比性。ACLF組患者血清ALT、TB、DB、INR水平明顯高于CHB組及健康對照組(P0.01);ACLF組患者Alb則明顯低于CHB組及健康對照組(P0.01);ACLF組和CHBˉ組AST水平、HBV DNA載量無明顯差異(P0.05)。2.2血清TNFα與p-GSK3β水平CHB組血清TNFα水平較正常對照組升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);ACLF組TNFα水平較正常對照組、CHB組明顯升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。CHB組血清p-GSK3β水平較正常對照組降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);ACLF組p-GSK3β水平較正常對照組、CHB組明顯降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。2.3肝組織GSK3βm RNA的表達CHB組GSK3βm RNA表達水平較正常對照組無明顯差異(P0.05);ACLF組GSK3βm RNA表達水平較正常對照組、CHB組明顯升高(P0.01),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。2.4肝組織GSK3β、p-GSK3β的分布與表達免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:GSK3β、p-GSK3β主要表達于肝細胞胞漿。蛋白印跡法結(jié)果顯示:正常對照組、CHB組、ACLF組患者肝組織GSK3β表達水平無明顯差異(P0.05);CHB組p-GSK3β表達水平較正常對照組降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);ACLF組p-GSK3β表達水平較正常對照組、CHB組明顯下降,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。2.5 ACLF患者血清p-GSK3β與TNFα相關(guān)性分析ACLF患者血清p-GSK3β與TNFα呈負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)為r=-0.761(P0.01)。結(jié)論:1 GSK3β通過調(diào)節(jié)磷酸化/去磷酸化水平參與了肝衰竭的病理生理過程。2 HBV相關(guān)ACLF患者GSK3β活性增強,TNFα表達升高,提示GSK3β在HBV相關(guān)ACLF中發(fā)揮作用,推測其機制可能通過上調(diào)TNFα合成和(或)分泌,影響疾病進程。
【關(guān)鍵詞】：糖原合成酶激酶3β 肝功能衰竭 肝炎 乙型 慢性 炎癥 腫瘤壞死因子α
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575.3
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-23
• 結(jié)果23-25
• 附圖25-34
• 附表34-37
• 討論37-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-44
• 綜述 HBV感染與腎功能損傷44-68
• 參考文獻58-68
• 致謝68-69
• 個人簡歷69

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本文編號：689099