發(fā)布時(shí)間：2017-08-13 23:09

  本文關(guān)鍵詞：AAT失代償在脂肪肝大鼠急性胰腺炎中的作用和機(jī)制研究

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【摘要】：研究背景急性胰腺炎(AP)是胰腺的一種炎癥性疾病,大多數(shù)患者病程為自限性,預(yù)后良好,但有一部分患者病情較重,常常進(jìn)展為致命的重癥急性胰腺炎(SAP)。SAP的總死亡率接近20%。SAP的危險(xiǎn)因素包括酒精、肥胖、阿片類藥物以及非酒精性脂肪肝(NAFLD,也被稱為肝脂肪變)。NAFLD不是一種特異的疾病,而是一種臨床上非常普遍的現(xiàn)象。它以肝細(xì)胞的炎癥、壞死和凋亡為特征,發(fā)病率在全世界人口中高達(dá)10-24%。脂肪肝加重胰腺炎的機(jī)制至今尚未完全闡明。然而目前有以下幾種可能的機(jī)制。脂肪肝常常合并高脂血癥,而后者可以引起胰腺微循環(huán)障礙、氧化應(yīng)激、游離氧自由基的積聚以及導(dǎo)管壞死。高脂血癥還能削弱紅細(xì)胞的攜氧能力,增加血紅蛋白的氧親和力從而導(dǎo)致組織缺氧。而且游離的氧自由基和氧化應(yīng)激也會(huì)促進(jìn)胰腺炎的進(jìn)展,甘油三酯的代謝產(chǎn)物也會(huì)加劇胰腺導(dǎo)管的損傷。脂肪肝確實(shí)能夠從許多方面促進(jìn)胰腺炎的進(jìn)展。α-1抗胰蛋白酶(AAT)是一種可以穿過(guò)組織的水溶性的糖蛋白,超過(guò)80%的AAT是由肝細(xì)胞合成分泌。此外巨噬細(xì)胞和一些腫瘤細(xì)胞也能合成。當(dāng)組織損傷時(shí)AAT合成增加,因此它又被稱為急性反應(yīng)期蛋白。除了抑制中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶外,AAT還抑制cathepsin-G和proteinase-3之類的蛋白水解酶。然而在一些情況下aat的活性是降低的,例如吸煙的有害成分過(guò)氧化氫可以使aat失活。aat的缺乏會(huì)導(dǎo)致蛋白酶和其抑制劑間的平衡被打破,從而促使copd,肝硬化,肝癌等許多疾病的進(jìn)展。然而aat在急性胰腺中的作用機(jī)制尚未完全闡明。本研究中我們成功建立了脂肪肝胰腺炎大鼠模型(hsap)和非脂肪肝胰腺炎大鼠模型(nhsap),首先我們采用蛋白組學(xué)的方法篩選hsap和nhsap血清差異表達(dá)蛋白,結(jié)果發(fā)現(xiàn)aat蛋白在兩組間差異表達(dá)顯著,接著我們又使用臨床血清樣本進(jìn)行了驗(yàn)證。為了進(jìn)一步探索脂肪肝加重胰腺炎的分子機(jī)制,我們采用rna-seq高通量測(cè)序的方法分析hsap和nhsap組間差異表達(dá)基因和相關(guān)分子通路,為臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。研究一目的探索hsap和nhsap間差異表達(dá)蛋白方法使用�；悄懰徕c逆行胰膽管注射的方法建立大鼠急性胰腺炎模型。采用二維凝膠電泳和質(zhì)譜鑒定的方法篩選脂肪肝胰腺炎大鼠與非脂肪肝胰腺炎大鼠血清中差異表達(dá)的蛋白。為了驗(yàn)證蛋白組學(xué)的結(jié)果,我們用elisa的方法檢測(cè)了正常飲食組(nd),高脂飲食組(hfd),非脂肪肝胰腺炎組(nhsap組),脂肪肝胰腺炎組(hsap組)4組血清中aat的含量,接著采用westernblot和免疫組化做進(jìn)一步的驗(yàn)證。結(jié)果我們成功建立了hsap與nhsap模型,二維凝膠電泳圖顯示共有14個(gè)表達(dá)下調(diào)的蛋白,4個(gè)表達(dá)上調(diào)的蛋白,經(jīng)質(zhì)譜鑒定aat為兩組間差異表達(dá)的蛋白之一。elisa結(jié)果顯示:hsap組血清aat含量與nhsap組相比明顯下降,與蛋白組學(xué)的結(jié)果一致。免疫組化的結(jié)果同樣顯示hsap組aat的表達(dá)量與nhsap組相比明顯下降。結(jié)論綜上所述,我們通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明了脂肪肝大鼠在發(fā)生胰腺炎時(shí)血清中aat處于失代償狀態(tài)。研究二目的探索肝脂肪變性時(shí)aat變化與ap的病程關(guān)系方法采用elisa的方法檢測(cè)健康對(duì)照組(nc)、脂肪肝組(fld)、非脂肪肝胰腺炎組(nhsap)和脂肪肝胰腺炎組(hsap)4組血清中aat的含量。將以上4組符合納入標(biāo)準(zhǔn)的病人靜脈采血,室溫放置半小時(shí)后860g,15min,4℃離心后獲得血清,并將其保存于-80℃冰箱。分析hsap組血清aat與apache-ii評(píng)分間的關(guān)系。結(jié)果elisa檢測(cè)aat在hsap組的水平:1.63±0.34mg/ml(range:0.74-2.59mg/ml);正常組2.54±0.21mg/ml(range:2.16-2.90mg/ml);nhsap組為3.92±0.37mg/ml(range:3.1-4.78mg/ml);fld組為2.30±0.27mg/ml(range:1.81-2.69mg/ml)。apache-ii評(píng)分和hsap病人血清aat水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.85,p0.01)。結(jié)論脂肪肝病人在發(fā)生胰腺炎后aat的合成處于失代償狀態(tài),脂肪肝導(dǎo)致的aat下調(diào)會(huì)加重胰腺炎病情。研究三目的利用rna-seq技術(shù)比較脂肪肝胰腺炎(apfl)與非脂肪肝胰腺炎(ap)發(fā)病機(jī)制的異同方法采用高通量測(cè)序rna-seq技術(shù)分析apfl與ap間差異表達(dá)的基因,之后將這些差異基因進(jìn)行g(shù)o功能分析和kegg通路富集分析,最后使用rt-pcr驗(yàn)證差異表達(dá)基因。結(jié)果kegg結(jié)果顯示pparγ信號(hào)通路以及所調(diào)節(jié)的脂肪酸代謝通路和jak/sata炎癥通路參與到apfl和ap的病理過(guò)程中,并且在apfl組中的富集程度更為明顯。qrt-pcr驗(yàn)證參與到ppar信號(hào)通路和脂肪酸代謝通路的部分基因,與rnaseq分析的結(jié)果一致。結(jié)論脂肪肝可能通過(guò)PPARγ通路影響脂肪代謝和炎癥反應(yīng),進(jìn)而加重胰腺炎的病情。
【關(guān)鍵詞】：α1抗胰蛋白酶 脂肪肝 急性胰腺炎 高通量測(cè)序
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R576
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-7
• 中文摘要7-11
• 英文摘要11-15
• 前言15-17
• 文獻(xiàn)回顧17-50
• 第一部分 脂肪肝在大鼠急性胰腺炎中降低AAT水平50-63
• 1 材料50-51
• 2.方法51-56
• 3.結(jié)果56-60
• 4.討論60-63
• 第二部分 肝脂肪變性時(shí)AAT變化與AP的病程關(guān)系63-72
• 1.材料63-65
• 2.方法65-67
• 3.結(jié)果67-70
• 4.討論70-72
• 第三部分 利用RNA-SEQ技術(shù)比較APFL與AP發(fā)病機(jī)制的異同72-99
• 1.材料72-74
• 2.方法74-77
• 3.結(jié)果77-95
• 4.討論95-99
• 小結(jié)99-100
• 參考文獻(xiàn)100-117
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果117-118
• 致謝118

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本文編號(hào)：669483