本文關(guān)鍵詞：KLF4基因沉默大鼠肝星狀細(xì)胞中Smad 2、3、7 mRNA及蛋白表達(dá)觀察

  更多相關(guān)文章： Kruppel樣因子基因 人肝星狀細(xì)胞 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β Smad 基因沉默 肝纖維化

【摘要】：目的觀察Kruppel樣因子4(KLF4)基因沉默對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞HSC-T6中Smad 2、3、7 mRNA及蛋白表達(dá)的影響。方法設(shè)計(jì)并構(gòu)建針對(duì)大鼠KLF4基因的3個(gè)干擾質(zhì)粒(p GPU6-1、p GPU6-2、p GPU6-3),將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HSC-T6細(xì)胞,檢測(cè)KLF4 mRNA及蛋白,篩選出沉默效果最好的重組質(zhì)粒用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。將HSC-T6細(xì)胞分為A、B、C、D組,A組常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞;B組在培養(yǎng)液中加入TGF-β_1 50 ng/m L;C組轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒p GPU6-3;D組轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒p GPU6-3 24 h后,再加入TGF-β_1 50 ng/m L。采用real-time PCR法檢測(cè)各組細(xì)胞中的Smad2、Smad3、Smad7mRNA。采用Western blotting法檢測(cè)各組細(xì)胞中的Smad2、Smad3、Smad7蛋白和磷酸化Smad2、3(p-Smad2、3)蛋白。結(jié)果 B、D組細(xì)胞中Smad2、Smad3、Smad7 mRNA相對(duì)表達(dá)量高于A組,C組細(xì)胞中Smad7 mRNA相對(duì)表達(dá)量高于A組(P均0.05)。C組、D組細(xì)胞中p-Smad2、p-Smad3蛋白相對(duì)表達(dá)量低于A組,Smad7蛋白相對(duì)表達(dá)量高于A組(P均0.05)。B組細(xì)胞中Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、Smad7蛋白相對(duì)表達(dá)量均高于A組(P均0.05)。結(jié)論 KLF4基因沉默后,HSC-T6細(xì)胞(包括被TGF-β_1激活的HSC-T6)中p-Smad2、p-Smad3蛋白表達(dá)下調(diào),Smad7 mRNA及蛋白表達(dá)上調(diào);抑制KLF4基因表達(dá)可能有抗纖維化作用,作用機(jī)制與抑制TGF-β_1/Smad信號(hào)通路激活有關(guān)。
【作者單位】： 河北醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院;石家莊市第三醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： Kruppel樣因子基因 人肝星狀細(xì)胞 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β Smad 基因沉默 肝纖維化
【基金】：河北省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題計(jì)劃項(xiàng)目(20150627)
【分類號(hào)】：R575.2
【正文快照】： 肝損傷到肝纖維化至肝癌的病變過(guò)程中,肝纖維化是關(guān)鍵的中間環(huán)節(jié),許多細(xì)胞因子和信號(hào)通路在其中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用[1,2]。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)已被廣泛證明是加速肝纖維化的一個(gè)重要因子[3]。TGF-β1主要通過(guò)TGF-β1/Smad信號(hào)通路激活肝星狀細(xì)胞(HSCs),增加細(xì)胞外基質(zhì)(ECM

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本文編號(hào)：669442