本文關(guān)鍵詞：原發(fā)性膽汁性肝硬化患者B細胞中microRNA的異常表達

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【摘要】：背景:原發(fā)性膽汁性肝硬化(primarybiliarycirrhosis,PBC),現(xiàn)又稱原發(fā)性膽汁性膽管炎(primary biliary cholangitis,PBC),是一種以慢性進行性膽汁淤積為特征的自身免疫性肝臟疾病。PBC患者主要的診斷指標是抗線粒體抗體(anti-mitochondrial antibody,AMA)陽性,但有研究發(fā)現(xiàn)約5%-10%的PBC患者血清AMA為陰性。目前,肝穿刺活檢進行病理診斷是臨床診斷PBC病人的金標準,但肝穿刺的危險性限制其在臨床上的廣泛開展。近期研究發(fā)現(xiàn),AMA陽性和陰性患者肝臟組織的B細胞浸潤程度不同,提示B細胞在PBC發(fā)病過程中對于PBC特異性的門脈區(qū)破壞具有調(diào)節(jié)作用。微小RNA即micro RNA(mi RNA)是近年來發(fā)現(xiàn)的一類在轉(zhuǎn)錄后水平對目的基因的表達進行調(diào)控的非編碼RNA。micro RNA控制多種免疫細胞亞群的分化和免疫功能,參與B細胞發(fā)生、發(fā)展的不同階段的調(diào)控。且近期的研究發(fā)現(xiàn)PBC患者肝組織及外周血中均存在micro RNA的異常表達。但不同分期PBC患者B細胞中micro RNA譜是否存在異常尚無相關(guān)報道。目的:本研究擬通過對疾病各時期的PBC患者及健康對照者外周血B細胞中micro RNA譜進行檢測,篩選特異性表達改變的micro RNA或micro RNA表達譜,明確micro RNA與PBC疾病進展是否有關(guān)及探討可能的機制。方法:本研究收集2013年9月-2015年9月于吉林大學(xué)第一醫(yī)院肝膽胰內(nèi)科住院的PBC患者外周血32例,健康對照4例。將上述外周血提取B淋巴細胞凍存于-80℃,一并送往上�？党缮锕具M行micro RNA芯片檢測。異常表達micro RNA定義為錯誤發(fā)現(xiàn)率(FDR)小于0.05,倍數(shù)改變大于2。結(jié)果:32例PBC患者中病理分期I期患者7例,II期13例,III期6例,IV期6例,健康對照組4例。用micro RNA芯片篩選出各組間異常表達的micro RNA譜,與健康對照組相比,PBC患者外周血B細胞中共有558個micro RNA存在異常表達。其中表達差異倍數(shù)大于20的micro RNA有30個,其中24個表達上調(diào),6個表達下調(diào)。與健康對照者相比,hsa-mi R-133b在各期PBC患者外周血B細胞中存在明顯異常表達(差異倍數(shù)3713,FDR0.05;差異倍數(shù)2771,FDR0.05;差異倍數(shù)2960,FDR0.05;差異倍數(shù)3305,FDR0.05),但在各期PBC患者外周血B細胞中表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.39),hsa-mi R-4770和hsa-mi R-148a-3p只在I期PBC患者外周血B細胞中異常表達,且表達明顯上調(diào)。在四期中均有差異表達且隨病理分期加重逐漸下調(diào)的有兩個micro RNAs(hsa-mi R-223-3p,hsa-mi R-21-5p)。在8例健康對照組和37例各期PBC患者進行選取部分micro RNA進行real-time PCR驗證,其結(jié)果與芯片結(jié)果保持一致。研究結(jié)論:(1)hsa-mi R-4770和hsa-mi R-148a-3p只在I期PBC患者外周血B細胞中異常表達,且表達明顯上調(diào)。(2)hsa-mi R-223-3p,hsa-mi R-21-5p隨PBC病理分期加重逐漸下調(diào)的,可能參與了PBC的發(fā)病機制。
【關(guān)鍵詞】：原發(fā)性膽汁性肝硬化 B細胞 micro RNA 異常表達
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575.22
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 中英文縮略詞對照表11-12
• 第1章 緒論12-13
• 第2章 綜述13-19
• 2.1 microRNA簡介13
• 2.2 microRNA與肝臟疾病的關(guān)系13-14
• 2.2.1 病毒性肝炎14
• 2.2.2 非酒精性脂肪肝14
• 2.2.3 肝纖維化14
• 2.2.4 肝細胞癌14
• 2.3 microRNA與自身免疫性肝病的關(guān)系14-18
• 2.3.1 原發(fā)性膽汁性肝硬化15-17
• 2.3.2 自身免疫性肝炎17
• 2.3.3 原發(fā)性硬化性膽管炎17-18
• 2.4 展望18-19
• 第3章 研究對象與方法19-25
• 3.1 研究對象19-20
• 3.1.1 研究對象來源19
• 3.1.2 實驗組納入及排除標準19
• 3.1.3 健康對照組納入標準19-20
• 3.2 實驗試劑與儀器20
• 3.3 實驗步驟20-24
• 3.3.1 提取外周血單個核細胞（PBMC）20-21
• 3.3.2 提取CD19+B細胞21
• 3.3.3 抽取RNA21-22
• 3.3.4 mi RNA芯片測定22
• 3.3.5 q-PCR確證22-24
• 3.4 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析24-25
• 第4章 結(jié)果25-37
• 4.1 研究對象一般情況25-26
• 4.2 microRNA芯片結(jié)果26-34
• 4.2.1 PBC患者與健康對照組比較26-28
• 4.2.2 各期PBC與健康對照組對比28-29
• 4.2.3 PBC各病理分期之間對比29-33
• 4.2.4 hsa-mi R-133b33
• 4.2.5 在Ⅱ期差異表達明顯的mi RNA33
• 4.2.6 各期之間表達存在異常的microRNA33-34
• 4.3 microRNA芯片結(jié)果的real-time PCR驗證34-35
• 4.4 與PBC疾病進展有關(guān)的異常表達microRNA的靶點預(yù)測及功能分析35-37
• 第5章 討論37-41
• 第6章 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-48
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果48-49
• 致謝49

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本文編號：648972