本文關(guān)鍵詞：新基因GDDR在小鼠急慢性胃粘膜損傷中的作用

  更多相關(guān)文章： GDDR 水浸應(yīng)激 慢性胃損傷 IL-6/STAT3

【摘要】：背景:基因GDDR(Gastric Drastic Down-Related gene)由本研究組發(fā)現(xiàn)并成功將其從體外克隆,它能編碼大小為18.3 k Da的蛋白。我們先前的研究工作顯示GDDR在正常胃粘膜表層上皮小凹細(xì)胞表達(dá)豐度高。三葉草因子家族TFF是存在于胃粘膜中含量較為豐富的蛋白,由胃粘膜細(xì)胞合成并分泌。TFF1和TFF2是其家族的主要成員,他們可通過調(diào)節(jié)胃粘膜上皮細(xì)胞之間的粘附,增加細(xì)胞遷移,增加粘蛋白以及減少胃酸的分泌,調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞增值、分化以及凋亡等多種方式來扮演著胃粘膜修復(fù)和保護(hù)的角色。相關(guān)研究顯示,GDDR特異性結(jié)合TFF1和TFF2形成的異源二聚體在正常胃粘膜上皮特異表達(dá)并共同發(fā)揮著保護(hù)胃粘膜的作用。我們據(jù)此推測GDDR也可能在胃粘膜中起著重要作用,且可能與TFF家族有著密切聯(lián)系。本研究將初步探索GDDR在急慢性胃粘膜損傷中的作用。目的:1.對GDDR基因敲除小鼠進(jìn)行全方位鑒定。2.建立小鼠急性胃損傷模型,探究GDDR在急性胃粘膜損傷中的作用。3.初步探討GDDR在小鼠急性胃粘膜損傷中發(fā)揮作用所涉及的相關(guān)機(jī)制。4.建立小鼠慢性胃損傷模型,研究GDDR在慢性胃粘膜損傷中的作用。方法:1.從基因組DNA水平、m RNA轉(zhuǎn)錄再到蛋白表達(dá)水平以及組織定位水平對GDDR基因敲除小鼠進(jìn)行全方位鑒定。2.利用水浸法應(yīng)激性小鼠胃潰瘍來建立GDDR-/-和GDDR+/+小鼠急性胃損傷模型,從胃組織大體標(biāo)本、HE染色和電鏡等不同層面觀察兩種小鼠胃粘膜損傷情況,利用血常規(guī)和檢測髓過氧化物酶(MPO)活性來分析中性粒細(xì)胞數(shù)量和活性來初步探究GDDR在急性胃損傷中發(fā)揮的作用。3.通過實(shí)時(shí)定量PCR篩選小鼠急性胃粘膜損傷中涉及的相關(guān)炎癥分子和胃粘膜防御相關(guān)分子,并用ELISA、免疫組化方法進(jìn)行驗(yàn)證。利用western blot來初步探索其中涉及的信號通路。4.采用Hp感染小鼠胃粘膜來建立上述兩種小鼠的慢性胃損傷模型,從胃組織大體標(biāo)本和HE染色鏡下觀察胃粘膜損傷情況,初步探究GDDR在慢性胃損傷中發(fā)揮的作用。結(jié)果:1.GDDR-/-型小鼠從基因組DNA水平、m RNA轉(zhuǎn)錄到蛋白表達(dá)水平以及組織定位水平檢測發(fā)現(xiàn)無GDDR的表達(dá),而對應(yīng)的GDDR+/+小鼠組織中GDDR表達(dá)正常。2.GDDR+/+小鼠急性胃黏膜損傷程度明顯重于GDDR-/-型,血液中的中性粒細(xì)胞數(shù)和胃組織的MPO活性均高于GDDR-/-組和對照組。3.實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示GDDR+/+小鼠胃組織趨化因子CXCL2和炎癥分子IL-6的表達(dá)明顯高于GDDR-/-組和同期對照組,ELISA和免疫組織化學(xué)結(jié)果與上述結(jié)果相一致。Western blot結(jié)果提示GDDR+/+急性胃損傷組小鼠的磷酸化STAT3的表達(dá)量明顯強(qiáng)于GDDR-/-組。4.胃組織大體標(biāo)本、HE染色結(jié)果初步表明:GDDR-/-小鼠慢性胃損傷程度重于GDDR+/+組和同期對照組。結(jié)論:1.GDDR基因敲除小鼠構(gòu)建成功。2.新基因GDDR可能通過增加CXCL2和IL-6的表達(dá),激活STAT3炎癥信號通路促進(jìn)細(xì)胞凋亡從而加重小鼠急性應(yīng)激性胃粘膜損傷。3.新基因GDDR可能減輕由HP感染引起的小鼠慢性胃粘膜損傷,具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：GDDR 水浸應(yīng)激 慢性胃損傷 IL-6/STAT3
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R573
【目錄】：

• 縮略語表7-9
• 中文摘要9-12
• ABSTRACT12-15
• 前言15-16
• 文獻(xiàn)回顧16-27
• 第一部分GDDR基因敲除（GDDR-/-）小鼠的鑒定27-38
• 1 材料27-28
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物27
• 1.2 主要試劑27-28
• 1.3 主要抗體28
• 1.4 主要儀器28
• 2 方法28-34
• 2.1 基因組DNA鑒定28-30
• 2.2 轉(zhuǎn)錄m RNA鑒定30-32
• 2.3 western blot鑒定32-33
• 2.4 免疫組織化學(xué)染色鑒定33-34
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析34
• 3 結(jié)果34-37
• 3.1 基因組DNA鑒定34-35
• 3.2 轉(zhuǎn)錄m RNA鑒定35-36
• 3.3 western blot鑒定36
• 3.4 免疫組織化學(xué)染色鑒定36-37
• 4 討論37-38
• 第二部分GDDR在急性胃損傷中的作用研究38-50
• 1 材料38-39
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物38
• 1.2 主要試劑38-39
• 1.3 主要儀器39
• 2 方法39-42
• 2.1 建立小鼠急性胃損傷模型39-40
• 2.2 HE染色40
• 2.3 電鏡下觀察胃粘膜損傷情況40-41
• 2.4 兩種小鼠造模前后胃粘膜組織MPO的檢測41
• 2.5 血涂片瑞氏染色41
• 2.6 小鼠血常規(guī)檢測中性粒細(xì)胞含量41
• 2.7 TUNEL實(shí)驗(yàn)檢測胃粘膜細(xì)胞凋亡情況41-42
• 2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析42
• 3 結(jié)果42-49
• 3.1 肉眼觀察兩種小鼠急性應(yīng)激后胃粘膜損傷情況42-44
• 3.2 HE染色后顯微鏡下觀察兩種小鼠造模后胃粘膜損傷情況44
• 3.3 電鏡觀察兩種小鼠胃粘膜損傷情況44-45
• 3.4 兩種小鼠造模前后MPO的活性測定45
• 3.5 檢測兩種小鼠在WIR前后血液中中性粒細(xì)胞數(shù)目45-47
• 3.6 TUNEL實(shí)驗(yàn)檢測胃粘膜細(xì)胞凋亡情況47-49
• 4 討論49-50
• 第三部分 初步探究GDDR在急性胃損傷中的機(jī)制50-61
• 1 材料50-51
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物50
• 1.2 主要試劑50-51
• 1.3 主要儀器51
• 2 方法51-56
• 2.1 實(shí)時(shí)定量PCR篩選促炎因子及相關(guān)保護(hù)分子51-55
• 2.2 免疫組織化學(xué)染色檢測小鼠胃粘膜CXCL2和IL-6 的表達(dá)55
• 2.3 ELISA實(shí)驗(yàn)檢測小鼠胃粘膜CXCL2和IL-6 的含量55
• 2.4 western blot檢測兩種小鼠胃粘膜STAT3及p-STAT3的表達(dá)55-56
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析56
• 3 結(jié)果56-59
• 3.1 實(shí)時(shí)定量PCR篩選促炎因子及胃粘膜相關(guān)分子56-57
• 3.2 免疫組織化學(xué)染色檢測小鼠胃粘膜CXCL2和IL-6 的表達(dá)57-58
• 3.3 ELISA法檢測小鼠胃粘膜CXCL2和IL-6 的含量58
• 3.4 western blot檢測兩種小鼠胃粘膜STAT3及p-STAT3的表達(dá)58-59
• 4 討論59-61
• 第四部分GDDR在小鼠慢性胃粘膜損傷中的作用61-70
• 1 材料61-62
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物61
• 1.2 幽門螺旋桿菌61
• 1.3 主要試劑61-62
• 1.4 主要儀器62
• 2 方法62-64
• 2.1 Hp的培養(yǎng)62
• 2.2 Hp的染色鑒定62-63
• 2.3 建立Hp感染小鼠胃粘膜慢性損傷模型63
• 2.4 Hp感染小鼠胃粘膜模型的鑒定63-64
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析64
• 3 結(jié)果64-67
• 3.1 Hp染色鑒定64-65
• 3.2 大體標(biāo)本觀察65-66
• 3.3 微需氧細(xì)菌培養(yǎng)66
• 3.4 快速尿素酶實(shí)驗(yàn)66-67
• 3.5 HE染色67
• 4 討論67-70
• 小結(jié)70-71
• 參考文獻(xiàn)71-78
• 個(gè)人簡歷和研究成果78-79
• 致謝79

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 杜建軍,竇科峰,彭淑牖,李江濤,劉穎斌,王為忠,管文賢,高志清;胃癌相關(guān)新基因GDDR的研究[J];中華外科雜志;2005年01期

2 谷滿倉;劉俊瑩;錢亞芳;陳眉;;抗腫瘤天然藥物抑制STAT3信號通路的分子機(jī)制研究進(jìn)展[J];藥學(xué)進(jìn)展;2014年08期

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本文編號：647658