發(fā)布時間：2017-08-09 22:28

  本文關鍵詞：新基因GDDR在小鼠急慢性胃粘膜損傷中的作用

  更多相關文章： GDDR 水浸應激 慢性胃損傷 IL-6/STAT3

【摘要】：背景:基因GDDR(Gastric Drastic Down-Related gene)由本研究組發(fā)現(xiàn)并成功將其從體外克隆,它能編碼大小為18.3 k Da的蛋白。我們先前的研究工作顯示GDDR在正常胃粘膜表層上皮小凹細胞表達豐度高。三葉草因子家族TFF是存在于胃粘膜中含量較為豐富的蛋白,由胃粘膜細胞合成并分泌。TFF1和TFF2是其家族的主要成員,他們可通過調(diào)節(jié)胃粘膜上皮細胞之間的粘附,增加細胞遷移,增加粘蛋白以及減少胃酸的分泌,調(diào)節(jié)上皮細胞增值、分化以及凋亡等多種方式來扮演著胃粘膜修復和保護的角色。相關研究顯示,GDDR特異性結(jié)合TFF1和TFF2形成的異源二聚體在正常胃粘膜上皮特異表達并共同發(fā)揮著保護胃粘膜的作用。我們據(jù)此推測GDDR也可能在胃粘膜中起著重要作用,且可能與TFF家族有著密切聯(lián)系。本研究將初步探索GDDR在急慢性胃粘膜損傷中的作用。目的:1.對GDDR基因敲除小鼠進行全方位鑒定。2.建立小鼠急性胃損傷模型,探究GDDR在急性胃粘膜損傷中的作用。3.初步探討GDDR在小鼠急性胃粘膜損傷中發(fā)揮作用所涉及的相關機制。4.建立小鼠慢性胃損傷模型,研究GDDR在慢性胃粘膜損傷中的作用。方法:1.從基因組DNA水平、m RNA轉(zhuǎn)錄再到蛋白表達水平以及組織定位水平對GDDR基因敲除小鼠進行全方位鑒定。2.利用水浸法應激性小鼠胃潰瘍來建立GDDR-/-和GDDR+/+小鼠急性胃損傷模型,從胃組織大體標本、HE染色和電鏡等不同層面觀察兩種小鼠胃粘膜損傷情況,利用血常規(guī)和檢測髓過氧化物酶(MPO)活性來分析中性粒細胞數(shù)量和活性來初步探究GDDR在急性胃損傷中發(fā)揮的作用。3.通過實時定量PCR篩選小鼠急性胃粘膜損傷中涉及的相關炎癥分子和胃粘膜防御相關分子,并用ELISA、免疫組化方法進行驗證。利用western blot來初步探索其中涉及的信號通路。4.采用Hp感染小鼠胃粘膜來建立上述兩種小鼠的慢性胃損傷模型,從胃組織大體標本和HE染色鏡下觀察胃粘膜損傷情況,初步探究GDDR在慢性胃損傷中發(fā)揮的作用。結(jié)果:1.GDDR-/-型小鼠從基因組DNA水平、m RNA轉(zhuǎn)錄到蛋白表達水平以及組織定位水平檢測發(fā)現(xiàn)無GDDR的表達,而對應的GDDR+/+小鼠組織中GDDR表達正常。2.GDDR+/+小鼠急性胃黏膜損傷程度明顯重于GDDR-/-型,血液中的中性粒細胞數(shù)和胃組織的MPO活性均高于GDDR-/-組和對照組。3.實時定量PCR結(jié)果顯示GDDR+/+小鼠胃組織趨化因子CXCL2和炎癥分子IL-6的表達明顯高于GDDR-/-組和同期對照組,ELISA和免疫組織化學結(jié)果與上述結(jié)果相一致。Western blot結(jié)果提示GDDR+/+急性胃損傷組小鼠的磷酸化STAT3的表達量明顯強于GDDR-/-組。4.胃組織大體標本、HE染色結(jié)果初步表明:GDDR-/-小鼠慢性胃損傷程度重于GDDR+/+組和同期對照組。結(jié)論:1.GDDR基因敲除小鼠構(gòu)建成功。2.新基因GDDR可能通過增加CXCL2和IL-6的表達,激活STAT3炎癥信號通路促進細胞凋亡從而加重小鼠急性應激性胃粘膜損傷。3.新基因GDDR可能減輕由HP感染引起的小鼠慢性胃粘膜損傷,具體機制有待進一步研究。
【關鍵詞】：GDDR 水浸應激 慢性胃損傷 IL-6/STAT3
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R573
【目錄】：

• 縮略語表7-9
• 中文摘要9-12
• ABSTRACT12-15
• 前言15-16
• 文獻回顧16-27
• 第一部分GDDR基因敲除（GDDR-/-）小鼠的鑒定27-38
• 1 材料27-28
• 1.1 實驗動物27
• 1.2 主要試劑27-28
• 1.3 主要抗體28
• 1.4 主要儀器28
• 2 方法28-34
• 2.1 基因組DNA鑒定28-30
• 2.2 轉(zhuǎn)錄m RNA鑒定30-32
• 2.3 western blot鑒定32-33
• 2.4 免疫組織化學染色鑒定33-34
• 2.5 統(tǒng)計學分析34
• 3 結(jié)果34-37
• 3.1 基因組DNA鑒定34-35
• 3.2 轉(zhuǎn)錄m RNA鑒定35-36
• 3.3 western blot鑒定36
• 3.4 免疫組織化學染色鑒定36-37
• 4 討論37-38
• 第二部分GDDR在急性胃損傷中的作用研究38-50
• 1 材料38-39
• 1.1 實驗動物38
• 1.2 主要試劑38-39
• 1.3 主要儀器39
• 2 方法39-42
• 2.1 建立小鼠急性胃損傷模型39-40
• 2.2 HE染色40
• 2.3 電鏡下觀察胃粘膜損傷情況40-41
• 2.4 兩種小鼠造模前后胃粘膜組織MPO的檢測41
• 2.5 血涂片瑞氏染色41
• 2.6 小鼠血常規(guī)檢測中性粒細胞含量41
• 2.7 TUNEL實驗檢測胃粘膜細胞凋亡情況41-42
• 2.8 統(tǒng)計學分析42
• 3 結(jié)果42-49
• 3.1 肉眼觀察兩種小鼠急性應激后胃粘膜損傷情況42-44
• 3.2 HE染色后顯微鏡下觀察兩種小鼠造模后胃粘膜損傷情況44
• 3.3 電鏡觀察兩種小鼠胃粘膜損傷情況44-45
• 3.4 兩種小鼠造模前后MPO的活性測定45
• 3.5 檢測兩種小鼠在WIR前后血液中中性粒細胞數(shù)目45-47
• 3.6 TUNEL實驗檢測胃粘膜細胞凋亡情況47-49
• 4 討論49-50
• 第三部分 初步探究GDDR在急性胃損傷中的機制50-61
• 1 材料50-51
• 1.1 實驗動物50
• 1.2 主要試劑50-51
• 1.3 主要儀器51
• 2 方法51-56
• 2.1 實時定量PCR篩選促炎因子及相關保護分子51-55
• 2.2 免疫組織化學染色檢測小鼠胃粘膜CXCL2和IL-6 的表達55
• 2.3 ELISA實驗檢測小鼠胃粘膜CXCL2和IL-6 的含量55
• 2.4 western blot檢測兩種小鼠胃粘膜STAT3及p-STAT3的表達55-56
• 2.5 統(tǒng)計學分析56
• 3 結(jié)果56-59
• 3.1 實時定量PCR篩選促炎因子及胃粘膜相關分子56-57
• 3.2 免疫組織化學染色檢測小鼠胃粘膜CXCL2和IL-6 的表達57-58
• 3.3 ELISA法檢測小鼠胃粘膜CXCL2和IL-6 的含量58
• 3.4 western blot檢測兩種小鼠胃粘膜STAT3及p-STAT3的表達58-59
• 4 討論59-61
• 第四部分GDDR在小鼠慢性胃粘膜損傷中的作用61-70
• 1 材料61-62
• 1.1 實驗動物61
• 1.2 幽門螺旋桿菌61
• 1.3 主要試劑61-62
• 1.4 主要儀器62
• 2 方法62-64
• 2.1 Hp的培養(yǎng)62
• 2.2 Hp的染色鑒定62-63
• 2.3 建立Hp感染小鼠胃粘膜慢性損傷模型63
• 2.4 Hp感染小鼠胃粘膜模型的鑒定63-64
• 2.5 統(tǒng)計學分析64
• 3 結(jié)果64-67
• 3.1 Hp染色鑒定64-65
• 3.2 大體標本觀察65-66
• 3.3 微需氧細菌培養(yǎng)66
• 3.4 快速尿素酶實驗66-67
• 3.5 HE染色67
• 4 討論67-70
• 小結(jié)70-71
• 參考文獻71-78
• 個人簡歷和研究成果78-79
• 致謝79

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 杜建軍,竇科峰,彭淑牖,李江濤,劉穎斌,王為忠,管文賢,高志清;胃癌相關新基因GDDR的研究[J];中華外科雜志;2005年01期

2 谷滿倉;劉俊瑩;錢亞芳;陳眉;;抗腫瘤天然藥物抑制STAT3信號通路的分子機制研究進展[J];藥學進展;2014年08期

，

本文編號：647658