本文關(guān)鍵詞：Th-1型和Th-17型細胞因子在小鼠自身免疫性膽管炎和結(jié)腸炎中的作用

  更多相關(guān)文章： 原發(fā)性膽汁性肝硬化 膽管炎 炎癥性腸病 IL-2Rα~(-/-)小鼠 IFN-γ IL-17A IL-12p40

【摘要】：原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)是一種慢性的自身免疫性肝臟疾病,主要以肝內(nèi)小膽管的慢性非化膿性破壞的膽管炎癥和血清中高滴度的抗線粒體抗體(AMA)為特征。肝內(nèi)小膽管的破壞可能由一系列的天然免疫應(yīng)答與體液和細胞的適應(yīng)性免疫應(yīng)答所介導,患者的肝臟匯管區(qū)可以檢測到自身反應(yīng)性的CD4+T細胞和CD8+T細胞的浸潤,同時伴隨著NKT細胞,樹突狀細胞和其他專職的抗原提呈細胞等天然免疫細胞對適應(yīng)性免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)。與此同時,作為重要的免疫調(diào)控分子—細胞因子在PBC的發(fā)病過程中也參與了機體免疫失衡的調(diào)控過程。PBC患者的血清和肝臟中的細胞因子分泌以Th1型占主導,存在高水平的Thl型細胞因子--IFN-γ的升高。同時,在PBC患者的匯管區(qū)也有Th17型細胞因子IL-17A陽性細胞的浸潤,但是Th1型與Th17型反應(yīng)在PBC的發(fā)病過程中所發(fā)揮的作用仍需要進一步探索。 炎癥性腸病(IBD)是一種慢性復發(fā)性以胃腸道和上皮損傷為主要特征的自身免疫性疾病�？肆_恩病和潰瘍性結(jié)腸炎是兩種主要類型的IBD。典型的IBD患者會遭受著腹瀉、腹痛、直腸出血和營養(yǎng)不良等影響日常生活質(zhì)量的癥狀。IBD的發(fā)病由遺傳因素和粘膜免疫應(yīng)答的功能異常所導致。研究報道細胞因子直接參與了IBD的發(fā)病過程。在克羅恩病患者體內(nèi),細胞因子的特征傾向于Th1細胞。Th17細胞在腸道疾病中也發(fā)揮了重要的作用。而且全基因組學疾病相關(guān)性分析顯示細胞因子IL-12與克羅恩病相關(guān)。 由于臨床樣本研究的諸多局限性,研究者嘗試建立原發(fā)性膽汁性肝硬化的疾病動物模型,進而探究PBC疾病進程的相關(guān)因素。本研究組前期研究工作建立了IL-2Rα-/-小鼠模型,該小鼠自發(fā)膽管炎癥,從免疫學指標和組織病理學指標檢測均與人類PBC類似。而IL-2Rα-/-小鼠也是一個典型的克羅恩病的模型。之前的工作表明在IL-2Rα-/-小鼠中,CD8+T細胞介導了肝臟膽管炎癥,而CD4+T細胞介導了腸道炎癥。與此同時,IL-2Rα-/-的血清中可以檢測到高水平的Th1型細胞相關(guān)的細胞因子-IFN-γ,和Th17細胞典型的細胞因子—IL-17A,而且IL-6和IL-12等炎性細胞因子的水平也升高。 本研究嘗試利用IL-2Rα-/小鼠探究IFN-γ和IL-17A在自身免疫性膽管炎癥和結(jié)腸炎的發(fā)病過程中的作用,主要工作可分為兩部分： 第一部分：在IL-2Rα-/-小鼠中,IFN-γ和IL-17A在膽管炎和結(jié)腸炎的作用。 1.IFN-γ的缺失不影響IL-2Rα-/-小鼠的膽管炎和結(jié)腸炎。 我們將IFN-γ-/.小鼠與IL-2Rα-/-小鼠進行雜交,得到IFN-γ-/-IL-2Rα-/.小鼠,肝臟和腸道組織HE病理結(jié)果顯示,IFN-γ-/-IL-2Rα-/-小鼠與IL-2Rα-/-小鼠的膽管炎癥和結(jié)腸炎之間沒有顯著性差異。肝臟單個核細胞的檢測與病理結(jié)果相一致,沒有顯著性改變。推測IFN-γ不參與IL-2Rα-/-小鼠的膽管炎癥和結(jié)腸炎的發(fā)生。 2.IL-17A的缺失導致IL-2Rα-/-小鼠的膽管炎癥加重而結(jié)腸炎減輕。 我們首先將IL-17A-/-小鼠與IL-2Rα-/-小鼠進行雜交,對得到的IL-17A-/-IL-2Rα-/-雙缺陷小鼠進行HE組織病理分析結(jié)果顯示,IL-17A缺失的IL-2Rα-/-小鼠門脈炎癥加重、小葉間炎癥加劇和膽管損傷程度加劇。對雙缺陷小鼠的細胞免疫學檢測發(fā)現(xiàn),效應(yīng)性CD8+T細胞大量增多,其分泌IFN-γ的能力顯著提高。有趣的是IL-17A缺失后,IL-2Rα-/-小鼠的結(jié)腸炎癥減輕,而且其細胞免疫學特征顯示效應(yīng)/記憶性CD4+T細胞顯著減少。 結(jié)論一：在IIL-2Rα-/-小鼠中,IL-17A而非IFN-γ在自身免疫性膽管炎中發(fā)揮著一定的保護作用,但是IL-17A在腸道中卻行使著促進炎癥的功能。因此臨床研究中,重組IL-17A抗體可能有潛力用于PBC的治療,但是對于IBD的治療時要慎重考慮。 第二部分：IL-12p40在IL-2Rα-/-小鼠腸道炎癥中的作用 我們將IL.-12p40-/-與IL-2Ra-/-小鼠進行雜交,得到IL-12p40-/-IL-2Rα-/-雙缺陷小鼠,對其腸道病理檢測的結(jié)果顯示IL-12p40缺失后,IL-2Rα-/-小鼠的腸道炎癥得到緩解,細胞免疫學上顯示CD4+T細胞顯著減少,并且伴隨著IL-17A分泌的下調(diào)和IFN-γ分泌的上調(diào)。 結(jié)論二在IL-2Rα-/-小鼠的腸道炎癥模型中,IL-12p40可能通過促進Th17型反應(yīng)進而促進腸道炎癥的發(fā)生。同時,在IL-2Rα-/-小鼠中,可能存在著非IL-12的細胞因子調(diào)控著IFN-γ的表達。
【關(guān)鍵詞】：原發(fā)性膽汁性肝硬化 膽管炎 炎癥性腸病 IL-2Rα~(-/-)小鼠 IFN-γ IL-17A IL-12p40
【學位授予單位】：中國科學技術(shù)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R575.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 符號說明10-15
• 圖序15-17
• 表序17-18
• 第一章 緒論18-52
• 1.1 原發(fā)性膽汁性肝硬化的研究進展18-34
• 1.1.1 原發(fā)性膽汁性肝硬化簡介18-19
• 1.1.2 原發(fā)性膽汁性肝硬化的自身免疫性特征19-23
• 1.1.3 原發(fā)性膽汁性肝硬化的免疫發(fā)病機制23-27
• 1.1.4 原發(fā)性膽汁性肝硬化的治療27-28
• 1.1.5 原發(fā)性膽汁性肝硬化小鼠模型28-34
• 1.2 Th1型和Th17型細胞因子在PBC中的重要作用34-37
• 1.3 炎癥性腸病的研究進展37-45
• 1.3.1 炎癥性腸病簡介37
• 1.3.2 遺傳因素與炎癥性腸病37-38
• 1.3.3 環(huán)境因素與炎癥性腸病38-39
• 1.3.4 炎癥性腸病的免疫學發(fā)病機制39-42
• 1.3.5 炎癥性腸病小鼠模型42-45
• 1.4 細胞因子在炎癥性腸病中的關(guān)鍵作用45-52
• 1.4.1 天然免疫細胞因子與IBD46-48
• 1.4.2 適應(yīng)性免疫細胞相關(guān)細胞因子與IBD48-52
• 第二章 材料與方法52-72
• 2.1 實驗材料52-56
• 2.1.1. 實驗動物52
• 2.1.2. 小鼠基因鑒定相關(guān)試劑52-53
• 2.1.3. 小鼠各臟器單個核細胞分離試劑及材料53
• 2.1.4. 肝臟及腸道病理染色相關(guān)試劑53-54
• 2.1.5. 熒光定量PCR相關(guān)試劑54-55
• 2.1.6. 血清細胞因子檢測相關(guān)試劑55
• 2.1.7. 流式細胞術(shù)檢測相關(guān)試劑55-56
• 2.2 實驗儀器和設(shè)備56-58
• 2.2.1. 小鼠手術(shù)器械56
• 2.2.2. 小鼠基因型鑒定相關(guān)儀器56
• 2.2.3. 小鼠各臟器單個核細胞分離相關(guān)儀器56
• 2.2.4. 病理染色相關(guān)儀器56
• 2.2.5. 熒光定量PCR相關(guān)儀器56-57
• 2.2.6. 流式細胞儀57-58
• 2.3 實驗方法58-72
• 2.3.1 小鼠雜交58
• 2.3.2 小鼠基因鑒定58-60
• 2.3.3 小鼠各臟器單個核細胞分離60-61
• 2.3.4 流式細胞術(shù)檢測61-62
• 2.3.5 肝臟及腸道病理制備及HE染色62-66
• 2.3.6 肝臟及腸道病理打分標準66-67
• 2.3.7 血清的制備67
• 2.3.8 肝臟及腸道組織細胞因子檢測67-69
• 2.3.9 血清細胞因子檢測69-70
• 2.3.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析70-72
• 第三章 結(jié)果與討論72-88
• 3.1 引言72
• 3.2 實驗結(jié)果72-84
• 3.2.1 檢測IL-2Rα~(-/-)小鼠肝臟和脾臟中T細胞分泌IFN-γ和IL-17A特征72-74
• 3.2.2 IFN-γ敲除后IL-2Rα~(-/-)小鼠肝臟炎癥無顯著變化74-76
• 3.2.3 IFN-γ敲除后IL-2Rα~(-/-)小鼠腸道炎癥無顯著變化76-77
• 3.2.4 IL-17A敲除后IL-2Rα~(-/-)小鼠肝臟炎癥加重77-80
• 3.2.5 IL-17A敲除后IL-2Rα~(-/-)小鼠腸道炎癥減輕80-82
• 3.2.6 IL-17A~(-/-)敲除后IL-2Rα~(-/-)小鼠體內(nèi)細胞因子情況82-84
• 3.3 結(jié)果討論84-86
• 3.3.1 IFN-γ對IL-2Rα~(-/-)小鼠肝臟炎癥和腸道炎癥的探究84-85
• 3.3.2 IL-17A對IL-2Rα~(-/-)小鼠肝臟炎癥和腸道炎癥的探究85-86
• 3.4 總結(jié)86-88
• 第四章 IL-12p40在IL-2Rα~(-/-)小鼠腸道炎癥中的作用88-92
• 4.1 引言88
• 4.2 實驗結(jié)果88-91
• 4.3 結(jié)果討論91-92
• 參考文獻92-108
• 致謝108-110
• 第五章 攻讀博士期間的主要研究成果110-111
• 5.1 發(fā)表和擬發(fā)表學術(shù)論文情況110
• 5.2 攻讀博士期間參加的學術(shù)會議110-111
• 附錄111-114

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 Andrea Crosignani;Pier Maria Battezzati;Pietro Invernizzi;Carlo Selmi;Elena Prina;Mauro Podda;;Clinical features and management of primary biliary cirrhosis[J];World Journal of Gastroenterology;2008年21期

2 Ana Lleo;Pietro Invernizzi;M Eric Gershwin;Ian R Mackay;Harry Prince;;Etiopathogenesis of primary biliary cirrhosis[J];World Journal of Gastroenterology;2008年21期

3 Marcus Mottershead;James Neuberger;;Transplantation in autoimmune liver diseases[J];World Journal of Gastroenterology;2008年21期

，

本文編號：600912