本文關(guān)鍵詞：Th-1型和Th-17型細(xì)胞因子在小鼠自身免疫性膽管炎和結(jié)腸炎中的作用

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【摘要】：原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)是一種慢性的自身免疫性肝臟疾病,主要以肝內(nèi)小膽管的慢性非化膿性破壞的膽管炎癥和血清中高滴度的抗線粒體抗體(AMA)為特征。肝內(nèi)小膽管的破壞可能由一系列的天然免疫應(yīng)答與體液和細(xì)胞的適應(yīng)性免疫應(yīng)答所介導(dǎo),患者的肝臟匯管區(qū)可以檢測(cè)到自身反應(yīng)性的CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的浸潤(rùn),同時(shí)伴隨著NKT細(xì)胞,樹突狀細(xì)胞和其他專職的抗原提呈細(xì)胞等天然免疫細(xì)胞對(duì)適應(yīng)性免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)。與此同時(shí),作為重要的免疫調(diào)控分子—細(xì)胞因子在PBC的發(fā)病過(guò)程中也參與了機(jī)體免疫失衡的調(diào)控過(guò)程。PBC患者的血清和肝臟中的細(xì)胞因子分泌以Th1型占主導(dǎo),存在高水平的Thl型細(xì)胞因子--IFN-γ的升高。同時(shí),在PBC患者的匯管區(qū)也有Th17型細(xì)胞因子IL-17A陽(yáng)性細(xì)胞的浸潤(rùn),但是Th1型與Th17型反應(yīng)在PBC的發(fā)病過(guò)程中所發(fā)揮的作用仍需要進(jìn)一步探索。 炎癥性腸病(IBD)是一種慢性復(fù)發(fā)性以胃腸道和上皮損傷為主要特征的自身免疫性疾病。克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎是兩種主要類型的IBD。典型的IBD患者會(huì)遭受著腹瀉、腹痛、直腸出血和營(yíng)養(yǎng)不良等影響日常生活質(zhì)量的癥狀。IBD的發(fā)病由遺傳因素和粘膜免疫應(yīng)答的功能異常所導(dǎo)致。研究報(bào)道細(xì)胞因子直接參與了IBD的發(fā)病過(guò)程。在克羅恩病患者體內(nèi),細(xì)胞因子的特征傾向于Th1細(xì)胞。Th17細(xì)胞在腸道疾病中也發(fā)揮了重要的作用。而且全基因組學(xué)疾病相關(guān)性分析顯示細(xì)胞因子IL-12與克羅恩病相關(guān)。 由于臨床樣本研究的諸多局限性,研究者嘗試建立原發(fā)性膽汁性肝硬化的疾病動(dòng)物模型,進(jìn)而探究PBC疾病進(jìn)程的相關(guān)因素。本研究組前期研究工作建立了IL-2Rα-/-小鼠模型,該小鼠自發(fā)膽管炎癥,從免疫學(xué)指標(biāo)和組織病理學(xué)指標(biāo)檢測(cè)均與人類PBC類似。而IL-2Rα-/-小鼠也是一個(gè)典型的克羅恩病的模型。之前的工作表明在IL-2Rα-/-小鼠中,CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)了肝臟膽管炎癥,而CD4+T細(xì)胞介導(dǎo)了腸道炎癥。與此同時(shí),IL-2Rα-/-的血清中可以檢測(cè)到高水平的Th1型細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子-IFN-γ,和Th17細(xì)胞典型的細(xì)胞因子—IL-17A,而且IL-6和IL-12等炎性細(xì)胞因子的水平也升高。 本研究嘗試?yán)肐L-2Rα-/小鼠探究IFN-γ和IL-17A在自身免疫性膽管炎癥和結(jié)腸炎的發(fā)病過(guò)程中的作用,主要工作可分為兩部分： 第一部分：在IL-2Rα-/-小鼠中,IFN-γ和IL-17A在膽管炎和結(jié)腸炎的作用。 1.IFN-γ的缺失不影響IL-2Rα-/-小鼠的膽管炎和結(jié)腸炎。 我們將IFN-γ-/.小鼠與IL-2Rα-/-小鼠進(jìn)行雜交,得到IFN-γ-/-IL-2Rα-/.小鼠,肝臟和腸道組織HE病理結(jié)果顯示,IFN-γ-/-IL-2Rα-/-小鼠與IL-2Rα-/-小鼠的膽管炎癥和結(jié)腸炎之間沒(méi)有顯著性差異。肝臟單個(gè)核細(xì)胞的檢測(cè)與病理結(jié)果相一致,沒(méi)有顯著性改變。推測(cè)IFN-γ不參與IL-2Rα-/-小鼠的膽管炎癥和結(jié)腸炎的發(fā)生。 2.IL-17A的缺失導(dǎo)致IL-2Rα-/-小鼠的膽管炎癥加重而結(jié)腸炎減輕。 我們首先將IL-17A-/-小鼠與IL-2Rα-/-小鼠進(jìn)行雜交,對(duì)得到的IL-17A-/-IL-2Rα-/-雙缺陷小鼠進(jìn)行HE組織病理分析結(jié)果顯示,IL-17A缺失的IL-2Rα-/-小鼠門脈炎癥加重、小葉間炎癥加劇和膽管損傷程度加劇。對(duì)雙缺陷小鼠的細(xì)胞免疫學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),效應(yīng)性CD8+T細(xì)胞大量增多,其分泌IFN-γ的能力顯著提高。有趣的是IL-17A缺失后,IL-2Rα-/-小鼠的結(jié)腸炎癥減輕,而且其細(xì)胞免疫學(xué)特征顯示效應(yīng)/記憶性CD4+T細(xì)胞顯著減少。 結(jié)論一：在IIL-2Rα-/-小鼠中,IL-17A而非IFN-γ在自身免疫性膽管炎中發(fā)揮著一定的保護(hù)作用,但是IL-17A在腸道中卻行使著促進(jìn)炎癥的功能。因此臨床研究中,重組IL-17A抗體可能有潛力用于PBC的治療,但是對(duì)于IBD的治療時(shí)要慎重考慮。 第二部分：IL-12p40在IL-2Rα-/-小鼠腸道炎癥中的作用 我們將IL.-12p40-/-與IL-2Ra-/-小鼠進(jìn)行雜交,得到IL-12p40-/-IL-2Rα-/-雙缺陷小鼠,對(duì)其腸道病理檢測(cè)的結(jié)果顯示IL-12p40缺失后,IL-2Rα-/-小鼠的腸道炎癥得到緩解,細(xì)胞免疫學(xué)上顯示CD4+T細(xì)胞顯著減少,并且伴隨著IL-17A分泌的下調(diào)和IFN-γ分泌的上調(diào)。 結(jié)論二在IL-2Rα-/-小鼠的腸道炎癥模型中,IL-12p40可能通過(guò)促進(jìn)Th17型反應(yīng)進(jìn)而促進(jìn)腸道炎癥的發(fā)生。同時(shí),在IL-2Rα-/-小鼠中,可能存在著非IL-12的細(xì)胞因子調(diào)控著IFN-γ的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：原發(fā)性膽汁性肝硬化 膽管炎 炎癥性腸病 IL-2Rα~(-/-)小鼠 IFN-γ IL-17A IL-12p40
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R575.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 符號(hào)說(shuō)明10-15
• 圖序15-17
• 表序17-18
• 第一章 緒論18-52
• 1.1 原發(fā)性膽汁性肝硬化的研究進(jìn)展18-34
• 1.1.1 原發(fā)性膽汁性肝硬化簡(jiǎn)介18-19
• 1.1.2 原發(fā)性膽汁性肝硬化的自身免疫性特征19-23
• 1.1.3 原發(fā)性膽汁性肝硬化的免疫發(fā)病機(jī)制23-27
• 1.1.4 原發(fā)性膽汁性肝硬化的治療27-28
• 1.1.5 原發(fā)性膽汁性肝硬化小鼠模型28-34
• 1.2 Th1型和Th17型細(xì)胞因子在PBC中的重要作用34-37
• 1.3 炎癥性腸病的研究進(jìn)展37-45
• 1.3.1 炎癥性腸病簡(jiǎn)介37
• 1.3.2 遺傳因素與炎癥性腸病37-38
• 1.3.3 環(huán)境因素與炎癥性腸病38-39
• 1.3.4 炎癥性腸病的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制39-42
• 1.3.5 炎癥性腸病小鼠模型42-45
• 1.4 細(xì)胞因子在炎癥性腸病中的關(guān)鍵作用45-52
• 1.4.1 天然免疫細(xì)胞因子與IBD46-48
• 1.4.2 適應(yīng)性免疫細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子與IBD48-52
• 第二章 材料與方法52-72
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料52-56
• 2.1.1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物52
• 2.1.2. 小鼠基因鑒定相關(guān)試劑52-53
• 2.1.3. 小鼠各臟器單個(gè)核細(xì)胞分離試劑及材料53
• 2.1.4. 肝臟及腸道病理染色相關(guān)試劑53-54
• 2.1.5. 熒光定量PCR相關(guān)試劑54-55
• 2.1.6. 血清細(xì)胞因子檢測(cè)相關(guān)試劑55
• 2.1.7. 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)相關(guān)試劑55-56
• 2.2 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備56-58
• 2.2.1. 小鼠手術(shù)器械56
• 2.2.2. 小鼠基因型鑒定相關(guān)儀器56
• 2.2.3. 小鼠各臟器單個(gè)核細(xì)胞分離相關(guān)儀器56
• 2.2.4. 病理染色相關(guān)儀器56
• 2.2.5. 熒光定量PCR相關(guān)儀器56-57
• 2.2.6. 流式細(xì)胞儀57-58
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法58-72
• 2.3.1 小鼠雜交58
• 2.3.2 小鼠基因鑒定58-60
• 2.3.3 小鼠各臟器單個(gè)核細(xì)胞分離60-61
• 2.3.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)61-62
• 2.3.5 肝臟及腸道病理制備及HE染色62-66
• 2.3.6 肝臟及腸道病理打分標(biāo)準(zhǔn)66-67
• 2.3.7 血清的制備67
• 2.3.8 肝臟及腸道組織細(xì)胞因子檢測(cè)67-69
• 2.3.9 血清細(xì)胞因子檢測(cè)69-70
• 2.3.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析70-72
• 第三章 結(jié)果與討論72-88
• 3.1 引言72
• 3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果72-84
• 3.2.1 檢測(cè)IL-2Rα~(-/-)小鼠肝臟和脾臟中T細(xì)胞分泌IFN-γ和IL-17A特征72-74
• 3.2.2 IFN-γ敲除后IL-2Rα~(-/-)小鼠肝臟炎癥無(wú)顯著變化74-76
• 3.2.3 IFN-γ敲除后IL-2Rα~(-/-)小鼠腸道炎癥無(wú)顯著變化76-77
• 3.2.4 IL-17A敲除后IL-2Rα~(-/-)小鼠肝臟炎癥加重77-80
• 3.2.5 IL-17A敲除后IL-2Rα~(-/-)小鼠腸道炎癥減輕80-82
• 3.2.6 IL-17A~(-/-)敲除后IL-2Rα~(-/-)小鼠體內(nèi)細(xì)胞因子情況82-84
• 3.3 結(jié)果討論84-86
• 3.3.1 IFN-γ對(duì)IL-2Rα~(-/-)小鼠肝臟炎癥和腸道炎癥的探究84-85
• 3.3.2 IL-17A對(duì)IL-2Rα~(-/-)小鼠肝臟炎癥和腸道炎癥的探究85-86
• 3.4 總結(jié)86-88
• 第四章 IL-12p40在IL-2Rα~(-/-)小鼠腸道炎癥中的作用88-92
• 4.1 引言88
• 4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果88-91
• 4.3 結(jié)果討論91-92
• 參考文獻(xiàn)92-108
• 致謝108-110
• 第五章 攻讀博士期間的主要研究成果110-111
• 5.1 發(fā)表和擬發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況110
• 5.2 攻讀博士期間參加的學(xué)術(shù)會(huì)議110-111
• 附錄111-114

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 Andrea Crosignani;Pier Maria Battezzati;Pietro Invernizzi;Carlo Selmi;Elena Prina;Mauro Podda;;Clinical features and management of primary biliary cirrhosis[J];World Journal of Gastroenterology;2008年21期

2 Ana Lleo;Pietro Invernizzi;M Eric Gershwin;Ian R Mackay;Harry Prince;;Etiopathogenesis of primary biliary cirrhosis[J];World Journal of Gastroenterology;2008年21期

3 Marcus Mottershead;James Neuberger;;Transplantation in autoimmune liver diseases[J];World Journal of Gastroenterology;2008年21期

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本文編號(hào)：600912