本文關(guān)鍵詞：齊墩果酸抑制HMGB1-TLR4-中性粒細胞正反饋環(huán)減輕小鼠肝缺血再灌注損傷

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【摘要】：目的:探討齊墩果酸(oleanolic acid,OA)對小鼠肝缺血(ischemiareperfusion,IR)再灌注損傷的保護作用及其機制。方法:將Balb/c雄性小鼠隨機分為4組:假手術(shù)對照組(Control組)、齊墩果酸對照組(OA組)、肝缺血再灌注模型組(IR組)和齊墩果酸干預(yù)組(OA+IR組)。肝缺血再灌注模型組(IR組)干預(yù)方式:小鼠麻醉好后,沿著腹白線剖開,暴露門脈三聯(lián)管(小葉間動脈、小葉間靜脈和小葉間膽管)用無創(chuàng)小號血管夾將其夾閉,使70%的肝臟缺血3 h再灌注6 h。齊墩果酸的給藥劑量為100 mg/kg,給藥方式為灌胃3次,每次間隔8 h(最后一次灌胃在術(shù)前半小時)。小鼠肝臟再灌注6 h后獲得血清,檢測其丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(aspartate transaminase,AST)活性水平;取缺血再灌注肝葉(中葉或者左葉)做石蠟切片后再用蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色,觀察肝臟組織病理變化;原位末端轉(zhuǎn)移酶標記技術(shù)TUNEL(transferase-mediated deoxyuridine triphosphate nick end labeling)和蛋白印記法(Western blot)檢測有關(guān)調(diào)控凋亡的信號分子bax、bcl-2、cleavedcaspase-3、cleavedcaspase-7和cleavedcaspase-9評價肝臟組織的壞死程度和細胞凋亡情況。免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,ihc)定性檢測高遷移率族蛋白b1(highmobilitygroupbox-1protein,hmgb1)的表達情況;實時定量逆轉(zhuǎn)錄pcr(quantitativereversetranscriptionpcr,qrt-pcr)檢測toll樣受體4(tolllikereceptor4,tlr4)、腫瘤壞死因子-?(tumornecrosisfactor-alpha,tnf-?)和白細胞介素-1?(interleukin-1beta,il-1?)mrna的表達;酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linkedimmunosorbentassay,elisa)檢測血清中tnf-?和il-1?的表達;westernblot分析肝臟組織中磷酸化的絲裂原活化蛋白酶(mitogen-activatedproteinkinases,mapks):磷酸化的細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(phosphorylatedextracellularsignal-regulatedkinase,p-erk)、磷酸化的p-c-jun氨基末端激酶(phosphorylatedc-junn-terminalkinase,p-jnk)和磷酸化的p-38(p-p38)蛋白水平的變化;流式細胞術(shù)(flowcytometry,fcm)分析中性粒細胞募集程度。結(jié)果:oa+ir組與ir組相比,oa預(yù)處理后,血清中alt和ast的活性水平顯著降低,肝臟組織病理損傷程度減小以及凋亡細胞明顯減少,由核內(nèi)釋放到細胞外的hmgb1極大地減少,tlr4和磷酸化的mapks蛋白表達水平均明顯下調(diào),tnf-?和il-1?的mrna和蛋白表達水平顯著降低,中性粒細胞的募集極大地減少。結(jié)論:齊墩果酸對小鼠肝缺血再灌注誘導(dǎo)的損傷具有保護作用。其保護作用機制可能與抑制HMGB1-TLR4-中性粒細胞正反饋環(huán)從而阻斷了炎癥級聯(lián)反應(yīng)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：齊墩果酸 肝缺血再灌注損傷 HMGB1 TLR4 中性粒細胞
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 1 材料和方法13-30
• 1.1 材料13-23
• 1.2 方法23-30
• 2 結(jié)果30-38
• 2.1 OA對小鼠肝缺血再灌注損傷血清轉(zhuǎn)氨酶（ALT/AST）活性水平和肝臟組織損傷情況的影響30-32
• 2.2 OA對肝缺血再灌注損傷中細胞的凋亡的影響32-33
• 2.3 OA對小鼠肝缺血再灌注誘導(dǎo)的肝損傷中HMGB1、TLR4、p-ERK、p-JNK、p-P38蛋白表達水平的影響33-35
• 2.4 OA對炎癥因子TNF-a和IL-1b的轉(zhuǎn)錄和釋放的影響35-36
• 2.5 OA對小鼠肝缺血再灌注誘導(dǎo)的肝損傷中中性粒細胞募集的影響36-38
• 3 討論38-40
• 4 結(jié)論40-41
• 參考文獻41-46
• 文獻綜述46-53
• 參考文獻50-53
• 致謝53-54
• 碩士期間發(fā)表的論文54

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本文編號：550988