發(fā)布時間：2017-07-16 18:20

  本文關(guān)鍵詞：RACK1與NF-κB信號通路相關(guān)蛋白在幽門螺桿菌感染相關(guān)胃黏膜病變中的表達

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【摘要】：背景和目的:胃癌是世界第五大最常見的惡性腫瘤,在腫瘤相關(guān)疾病死亡原因中高居第三位,每年新增病例近100萬。由此帶來的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)70%落在發(fā)展中國家,尤其是亞洲地區(qū)。幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)感染是胃癌發(fā)生最主要的危險因素,目前大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為Hp感染在經(jīng)典胃黏膜癌變過程,即非萎縮性胃炎-腸上皮化生-異型增生-胃癌過程中起著始發(fā)和推動作用,但Hp感染致病確切機制目前仍不清楚。大量相關(guān)研究表明,Hp感染后核轉(zhuǎn)錄因子κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)信號通路呈激活狀態(tài),NF-κB的活化與Hp相關(guān)胃炎、胃潰瘍及胃癌的發(fā)生發(fā)展及生存預(yù)后均密切相關(guān)。NF-κB是一種多功能核轉(zhuǎn)錄因子,靜息狀態(tài)時,NF-κB二聚體p50/p65與其抑制蛋白(inhibitor of nuclear factor-kappa B,IκB)結(jié)合形成復(fù)合體,以無活性狀態(tài)存在于細胞質(zhì)中。受到外界刺激后,IκB被磷酸化,隨后泛素化被蛋白酶體降解,與NF-κB解聚后暴露出NF-κB的核定位序列(nuclear localization sequence,NLS)從而解除抑制作用,隨后p65從胞漿中轉(zhuǎn)入胞核中調(diào)控多種基因轉(zhuǎn)錄,進而在炎癥、免疫、腫瘤中發(fā)揮重要作用。因此,闡明Hp感染后NF-κB具體活化及調(diào)控機制可為臨床胃癌的防治提供新的思路。RACK1是色氨酸-天冬氨酸(tryptophan-aspartic acid 40,WD40)重復(fù)序列家族的成員之一,由于該特殊結(jié)構(gòu),可與胞內(nèi)多種信號相關(guān)蛋白如激酶、膜受體、離子通道、凋亡相關(guān)分子及核糖體等結(jié)合,從而在炎癥、細胞遷移、凋亡及腫瘤發(fā)生中發(fā)揮重要作用。最新研究發(fā)現(xiàn)RACK1是一種新的NF-κB信號通路負(fù)性調(diào)控因子,并且早在2001年已被證實能夠與Hp毒力因子VacA相互作用。因此,我們推測RACK1可能在Hp感染致NF-κB信號通路的激活中發(fā)揮一定作用。為此,針對我們提出的假設(shè),本課題采用免疫組織化學(xué)檢測人體胃黏膜癌變組織,旨在初步探討RACK1與NF-κB信號通路相關(guān)蛋白在Hp相關(guān)胃黏膜病變中表達變化及其相關(guān)性,并進一步在細胞實驗中驗證Hp感染后RACK1與NF-κB信號通路相關(guān)蛋白變化趨勢與組織中是否一致。如實驗達到預(yù)期,可為進一步闡明rack1在hp感染致nf-κb激活中的作用及機制提供理論基礎(chǔ)。研究方法:1.收集慢性非萎縮性胃炎、腸上皮化生、異型增生、早期胃癌和進展期胃癌病理標(biāo)本(每組40例,共200例,前三組中hp陽性與陰性各20例),免疫組織化學(xué)方法檢測rack1、iκbα和p-iκbα蛋白的表達。2.atcc43504hp菌株(moi=50:1)作用ges-1細胞后,分別于0h、30min、45min、1h、3h和6h不同時間點,采用westernblot方法檢測rack1、p65、p-p65(ser276)及p-p65(ser536)蛋白的表達情況。結(jié)果:1.人胃黏膜癌變過程中rack1、iκbα和p-iκbα的表達情況及其相關(guān)性分析(1)rack1表達:在慢性非萎縮性胃炎組表達最高,隨著胃黏膜病變的進展呈下降趨勢(p0.01),在早期胃癌組和進展期胃癌組較低水平表達,兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(75%vs62.5%,p0.05)。進一步將慢性非萎縮性胃炎組、癌前病變組(腸上皮化生和異型增生)分為hp陽性組和hp陰性組,hp陽性組與hp陰性組各病變階段rack1表達均呈下降趨勢,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(100%vs87.5%;90%vs90%,p0.05)。(2)iκbα表達:在慢性非萎縮性胃炎組表達最高,隨著胃黏膜病變的進展呈下降趨勢(p0.01),在早期胃癌組和進展期胃癌組表達較低,兩組間無顯著差異(47.5%vs45%,p0.05)。將慢性非萎縮性胃炎組、癌前病變組(腸上皮化生和異型增生)分為hp陽性組和hp陰性組,hp陽性組iκbα蛋白各病變階段間表達均呈下降趨勢,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(100%vs72.5%,p0.01)。而hp陰性組iκbα表達各階段無明顯差異(85%vs67.5%,p0.05)。p-iκbα表達:在慢性非萎縮性胃炎組表達最低,隨胃黏膜病變進展呈上升趨勢(p0.01),在早期胃癌組和進展期胃癌組較高水平表達,兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(62.5%vs45%,p0.05)。將慢性非萎縮性胃炎組、癌前病變組(腸上皮化生和異型增生)分為hp陽性組和hp陰性組,hp陽性組各病變階段p-iκbα無顯著性差異(45%vs75%,p0.05),而hp陰性組中癌前病變組p-iκBα蛋白表達高于慢性非萎縮性胃炎組,有顯著差異(40%vs 77.5%,p0.01)。(3)與Hp感染的關(guān)系:將慢性非萎縮性胃炎組、癌前病變組各自分為Hp陽性和陰性組,進行組間比較。結(jié)果顯示在胃黏膜病變早期階段,Hp陽性組RACK1顯著高于Hp陰性組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(100%vs 90%;87.5 vs 90%,p0.05),而Hp陽性和陰性組間IκBα與p-IκBα蛋白表達無顯著性差異(p0.05)。(4)胃癌組織中RACK1與IκBα、p-IκBα表達的關(guān)系:胃癌組織中RACK1與IκBα蛋白表達正相關(guān)(p0.01),與p-IκBα負(fù)相關(guān),差異均有統(tǒng)計學(xué)差異(p0.01)。2.Hp作用GES-1后RACK1與NF-κB信號通路相關(guān)蛋白表達情況Hp活菌(MOI=50:1)作用GES-1細胞后,RACK1表達量在作用后30min開始升高,3h達到高峰(p0.01),6h開始下降(p0.05)。NF-κB信號通路相關(guān)蛋白中p65表達無明顯變化(p0.05),而p-p65(Ser276)蛋白表達水平在各時間點均明顯升高,30min開始升高,3h達到高峰(p0.01),6h內(nèi)均高于0h(p0.05),p-p65(Ser536)表達水平在3h顯著升高(p0.01),作用6h時仍高于0h(p0.05),結(jié)論:1.RACK1表達下調(diào)和NF-κB信號通路活化可能參與了胃黏膜癌變過程。2.Hp感染相關(guān)胃粘膜癌變早期RACK1表達上調(diào),這是否參與了Hp相關(guān)胃黏膜癌變發(fā)生尚待進一步探討。
【關(guān)鍵詞】：胃粘膜癌變 幽門螺桿菌 RACK1 NF-κB
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2;R573
【目錄】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-11
• 中英文縮略詞表11-13
• 第1章 引言13-16
• 第2章 人胃黏膜癌變過程中RACK1、IκBα和p-IκBα的表達情況及其相關(guān)性分析16-28
• 2.1 材料和方法16-20
• 2.1.1 實驗材料16-18
• 2.1.2 實驗方法18-20
• 2.2 實驗結(jié)果20-28
• 2.2.1 病理標(biāo)本總體情況20-21
• 2.2.2 不同胃黏膜病變中RACK1的表達差異21-23
• 2.2.3 不同胃黏膜病變中IκBα、p-IκBα的表達差異23-26
• 2.2.4 不同胃黏膜病變中 RACK1、IκBα和 p-IκBα在 Hp 陽性和陰性組間的表達差異26-27
• 2.2.5 胃癌組織中 RACK1、IκBα和 p-IκBα相關(guān)性分析27-28
• 第3章 Hp活菌作用GES-1 后RACK1與NF-κB信號通路相關(guān)蛋白表達的影響28-39
• 3.1 材料和方法28-35
• 3.1.1 實驗材料28-31
• 3.1.2 實驗方法31-35
• 3.2 實驗結(jié)果35-39
• 第4章 討論39-43
• 第5章 結(jié)論43-44
• 致謝44-45
• 參考文獻45-48
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果48-49
• 綜述49-56
• 參考文獻53-56

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 Wanqing Chen;Rongshou Zheng;Siwei Zhang;Ping Zhao;Hongmei Zeng;Xiaonong Zou;Jie He;;Annual report on status of cancer in China,2010[J];Chinese Journal of Cancer Research;2014年01期

2 Hyuk-Chan Kwon;Sung-Hyun Kim;Sung Yong Oh;Suee Lee;Ji Hyun Lee;Jin Seok Jang;Min Chan Kim;Ki Han Kim;Su-Jin Kim;Seong-Geun Kim;Hyo-Jin Kim;;Clinicopathologic significance of expression of nuclear factor-kB RelA and its target gene products in gastric cancer patients[J];World Journal of Gastroenterology;2012年34期

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本文編號：549953