本文關鍵詞：COX-2過表達載體的構建及其在HSCs中的表達

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【摘要】：目的:構建COX-2過表達載體,并轉染至HSC-T6中觀察其表達情況,為進一步研究COX-2與HSC生物學功能的關系提供前期準備。方法:1.調取COX-2鼠源全長基因,TRIzol法抽提大鼠肝總m RNA,逆轉錄為c DNA建立文庫。2.用RT-PCR擴增得到COX-2目的片段,PCR產物和pc DNA3.1(+)質粒雙酶切處理后將COX-2基因片段連接至pc DNA3.1(+)載體上,將構建成的pc DNA3.1(+)-r COX-2轉化至大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞,在含50μg/ml Kana LB固體平皿上篩選陽性克隆菌株。3.篩選后再對pc DNA3.1(+)-r COX-2進行雙酶切、瓊脂糖凝膠電泳鑒定和測序的分析。4.將構建成功的pc DNA3.1(+)-r COX-2表達載體經脂質體轉染入HSC-T6細胞,進行實驗分組:HSC-T6細胞組(空白組),pc DNA3.1(+)-r COX-2組(COX-2過表達組);pc DNA3.1(+)組(空載體組)。轉染48小時后應用Real-time PCR檢測表達載體在HSC-T6中COX-2 m RNA的表達情況。結果:1.RT-PCR產物顯示在1800 bp左右出現(xiàn)目的條帶。2.將所得的目的基因酶切鑒定及序列分析,測序結果表明和Gen Bank的COX-2基因序列一致,pc DNA3.1(+)-r COX-2表達載體構建成功。3.pc DNA3.1(+)-r COX-2表達載體轉染入HSC-T6細胞后顯示:COX-2m RNA在pc DNA3.1(+)-r COX-2組中表達明顯高于空白組和空載體組,統(tǒng)計學處理有顯著意義(P0.01)。結論:1.成功構建了大鼠COX-2過表達載體。2.所構建的pc DNA3.1(+)-r COX-2表達載體可在HSC-T6細胞中獲得高表達,為進一步研究COX-2與HSC生物學功能的關系提供了前期準備。
【關鍵詞】：COX-2 過表達 HSCs
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R575.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-11
• 第1章 緒論11-13
• 第2章 實驗材料與方法13-25
• 2.1 實驗材料13-15
• 2.2 實驗方法15-24
• 2.3 統(tǒng)計學方法24-25
• 第3章 實驗結果25-31
• 第4章 討論31-37
• 第5章 結論37-39
• 參考文獻39-43
• 綜述43-55
• 參考文獻50-55
• 作者攻讀學位期間的科研成果55-57
• 致謝57

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本文編號：542110