本文關(guān)鍵詞：COX-2過表達(dá)載體的構(gòu)建及其在HSCs中的表達(dá)

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【摘要】：目的:構(gòu)建COX-2過表達(dá)載體,并轉(zhuǎn)染至HSC-T6中觀察其表達(dá)情況,為進(jìn)一步研究COX-2與HSC生物學(xué)功能的關(guān)系提供前期準(zhǔn)備。方法:1.調(diào)取COX-2鼠源全長基因,TRIzol法抽提大鼠肝總m RNA,逆轉(zhuǎn)錄為c DNA建立文庫。2.用RT-PCR擴(kuò)增得到COX-2目的片段,PCR產(chǎn)物和pc DNA3.1(+)質(zhì)粒雙酶切處理后將COX-2基因片段連接至pc DNA3.1(+)載體上,將構(gòu)建成的pc DNA3.1(+)-r COX-2轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞,在含50μg/ml Kana LB固體平皿上篩選陽性克隆菌株。3.篩選后再對(duì)pc DNA3.1(+)-r COX-2進(jìn)行雙酶切、瓊脂糖凝膠電泳鑒定和測序的分析。4.將構(gòu)建成功的pc DNA3.1(+)-r COX-2表達(dá)載體經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染入HSC-T6細(xì)胞,進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組:HSC-T6細(xì)胞組(空白組),pc DNA3.1(+)-r COX-2組(COX-2過表達(dá)組);pc DNA3.1(+)組(空載體組)。轉(zhuǎn)染48小時(shí)后應(yīng)用Real-time PCR檢測表達(dá)載體在HSC-T6中COX-2 m RNA的表達(dá)情況。結(jié)果:1.RT-PCR產(chǎn)物顯示在1800 bp左右出現(xiàn)目的條帶。2.將所得的目的基因酶切鑒定及序列分析,測序結(jié)果表明和Gen Bank的COX-2基因序列一致,pc DNA3.1(+)-r COX-2表達(dá)載體構(gòu)建成功。3.pc DNA3.1(+)-r COX-2表達(dá)載體轉(zhuǎn)染入HSC-T6細(xì)胞后顯示:COX-2m RNA在pc DNA3.1(+)-r COX-2組中表達(dá)明顯高于空白組和空載體組,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有顯著意義(P0.01)。結(jié)論:1.成功構(gòu)建了大鼠COX-2過表達(dá)載體。2.所構(gòu)建的pc DNA3.1(+)-r COX-2表達(dá)載體可在HSC-T6細(xì)胞中獲得高表達(dá),為進(jìn)一步研究COX-2與HSC生物學(xué)功能的關(guān)系提供了前期準(zhǔn)備。
【關(guān)鍵詞】：COX-2 過表達(dá) HSCs
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R575.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-11
• 第1章 緒論11-13
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法13-25
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料13-15
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法15-24
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法24-25
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-31
• 第4章 討論31-37
• 第5章 結(jié)論37-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 綜述43-55
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果55-57
• 致謝57

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