本文關鍵詞：TIPE2、TLR2及TLR4mRNA在慢性丙型肝炎患者PBMCs中的表達及意義

  更多相關文章： 腫瘤壞死因子α誘導蛋白8型-2(TIPE2) Toll樣受體2 Toll樣受體4 T淋巴細胞亞群 慢性丙型病毒性肝炎(慢丙肝) 外周血單個核細胞(PBMCs) 免疫穩(wěn)態(tài)

【摘要】：目的：丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)為單股正鏈RNA病毒,全長大約為9.6kb。目前全世界近3%的人口為HCV感染者,其中50-85%以上的患者由急性轉(zhuǎn)為慢性持續(xù)性感染,甚至發(fā)展為肝硬化、肝癌。研究發(fā)現(xiàn)固有免疫系統(tǒng)和獲得性免疫系統(tǒng)均參與了HCV感染、清除以及慢性化過程,但其確切的機制尚不完全清楚。TIPE2(tumor necrosis factor-α-induced protein8-like2, TNFAIP8L2),即腫瘤壞死因子α誘導蛋白8型-2,是新近發(fā)現(xiàn)的免疫信號轉(zhuǎn)導通路重要調(diào)節(jié)器,負性調(diào)節(jié)T細胞受體(T cell receptor, TCR)和Toll樣受體(Toll-like receptors, TLRs)介導的免疫反應。作為一種負性調(diào)節(jié)子,TIPE2在慢性乙型肝炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎、結腸癌等多種疾病患者外周血和組織中表達異常,并且影響這些疾病發(fā)生和進展過程。但是TIPE2是否參與慢性丙型肝炎(簡稱慢丙肝)的發(fā)病過程以及在慢丙肝免疫機制中起怎樣作用尚未見報道。TLRs是一類重要的跨膜病原體識別受體,主要識別細菌、病毒、真菌、衣原體等病原微生物和壞死細胞釋放的內(nèi)外源性產(chǎn)物,激活固有免疫反應。同時TLRs作為“橋梁”連接固有免疫系統(tǒng)和獲得性免疫系統(tǒng),參與維持機體免疫功能的動態(tài)穩(wěn)定。為進一一步研究TIPE2、TLR2和TLR4在慢丙肝發(fā)病機制中的作用及三者間是否相互影響,我們檢測了慢丙肝患者外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中TIPE2、TLR2及TLR4的表達情況,并與慢丙肝患者的臨床療效進行對比觀察,為進一步揭示慢丙肝的發(fā)病機制及臨床抗病毒治療靶點的選擇奠定基礎。 方法： 1病例選擇 慢丙肝患者60例,男22例,女38例,平均年齡為43.51±14.90歲,均為2009年12月至2011年10月河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院中西結合肝病科門診和住院患者,診斷均符合2000年9月西安會議修訂的病毒性肝炎防治方案標準及2004年丙型肝炎防治指南修訂的診斷標準。同時排除其他合并病毒性肝炎及肝臟疾病。同期選擇健康志愿者30人,男13例,女17例,平均年齡為39.23±11.53歲。所有患者及志愿者均清晨空腹抽取抗凝靜脈血7ml,用于分離PBMCs及T細胞亞群檢測。抽取不抗凝靜脈血5ml,分離血清備用。 2治療方法 慢丙肝患者給予干擾素聯(lián)合利巴韋林抗病毒治療,根據(jù)白細胞及中性粒細胞減少情況,給予升白細胞藥物治療。肝功能異常者給予保肝降酶、退黃等治療。 3外周血單個核細胞中TIPE2、TLR2、TLR4基因檢測 Ficoll密度梯度離心法常規(guī)分離PBMCs, Trizol一步法提取PBMCs中總RNA,利用紫外分光光度計測量RNA,吸光度(A)260/(A)280nm的值為1.8-2.0時用于實驗,利用M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶合成制備cDNA,應用Primer Premier5.0軟件設計合成特異性引物,RT-PCR檢測檢測TIPE2、TLR2及TLR4mRNA的表達。 4血清檢測 留取慢丙肝患者不抗凝靜脈血5ml,分離血清,全自動生化儀酶法檢測肝功能,ELISA法測抗-HCV,實時熒光定量PCR探針法檢測HCVRNA。5T細胞亞群檢測 留取清晨空腹抗凝靜脈血2ml,應用流式細胞技術檢測CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞。 結果： 1慢丙肝患者PBMCs中TIPE2基因的表達及與抗病毒治療的關系 結果顯示慢丙肝患者PBMCs中TIPE2mRNA的表達水平較健康對照組顯著降低(0.49±0.17vs1.06±0.30,P0.05)；其中42例慢丙肝患者在抗病毒治療前后分別檢測,結果顯示PBMCs中TIPE2mRNA水平治療后較治療前明顯升高(0.41±0.11vs0.66±0.25,P0.01)。 2慢丙肝患者PBMCs中TLR2基因的表達及與抗病毒治療的關系 慢丙肝患者PBMCs中TLR2mRNA的表達水平較健康對照組顯著升高(1.86±0.35vs1.24±0.30,P0.05)；42例慢丙肝患者在抗病毒治療前后分別檢測,結果顯示PBMCs中TLR2mRNA水平治療后較治療前明顯下降(1.94±0.33vs1.37±0.19,P0.01)。 3慢丙肝患者PBMCs中TLR4基因的表達及與抗病毒治療的關系 慢丙肝患者PBMCs中TLR4mRNA的表達水平較健康對照組顯著升高(1.59±0.64vs0.93±0.26,P0.05)；42例慢丙肝患者抗病毒治療前后分別檢測,結果顯示PBMCs中TLR4mRNA水平治療后較治療前明顯下降(1.58±0.56vs1.16±0.15,P0.01)。 4TIPE2基因的表達與慢性丙型肝炎臨床指標的相關性 分析慢丙肝患者臨床病例,依據(jù)慢丙肝患者血清中HCV RNA、ALT AST、Tbil水平,將其分為HCV RNA低拷貝組(HCV RNA≤1×104copies/mL)和HCV RNA高拷貝組(HCV RNA1×104copies/mL);ALT低水平組(ALT≤80IU/mL)和高水平組(ALT80U/mL);AST低水平組(AST≤80IU/mL)和高水平組(AST80U/mL)以及Tbil正常組(Tbil≤17.1umol/L)和異常組(il17.1umol/L),統(tǒng)計分析顯示,慢丙肝患者PBMCs中TIPE2的mRNA表達水平在低水平組顯著高于高水平組(HCV RNA,0.66±0.16vs0.44±0.11,P0.05;ALT,0.59±0.13vs0.33±0.06,P0.05；AST,0.57±0.14vs0.33±0.07,P0.05；Tbil,0.58±0.14vs0.34±0.07,P0.01),且與HCVRNA、ALT、AST水平呈負相關(HCV RNA,r=-0.658,P0.01；ALT,r=-0.961,P0.01；AST,r=-0.924,P0.01),與Tbil(?)平無明顯相關性(P0.05)。 5TIPE2的表達與TLR2、TLR4表達的相關性 進一步應用SPSS13.0分析顯示,TIPE2的表達與TLR2、TLR4呈負相關(TLR2,r=-0.669,P0.01；TLR4,r=-0.649,P0.01)。 6慢丙肝患者外周血T細胞亞群的變化及與TIPE2基因的關系 與健康對照組相比,慢丙肝患者外周血CD3+、CD4+T細胞亞群降低、CD8+T細胞亞群升高,CD4+/CD8+降低,具有統(tǒng)計學意義(CD3+,64.28±10.39vs70.97±3.80,P0.05；CD4+,33.60±5.26vs44.66±3.62,P0.05；CD8+,29.59±6.47vs25.63±4.03,P0.05：CD4+/CD8+,1.19±0.35vs1.78±0.34,P0.05),且TIPE2mRNA水平與CD4+T細胞呈正相關(CD4+,r=0.735,P0.01),與CD8+T細胞呈負相關(r=-0.625,P0.01),與CD4+/CD8+比值呈正相關(r=0.804,P0.01),與CD3+T細胞無明顯相關性(P0.05)。 結論： 1慢丙肝患者PBMCs中TIPE2基因的表達水平顯著低于健康對照者,接受抗病毒治療后表達水平升高。 2慢性丙型肝炎患者PBMCs中TLR2.TLR4基因的表達水平顯著高于健康對照者,抗病毒治療后表達水平下降。 3TIPE2基因表達水平影響肝細胞壞死和炎癥程度以及丙肝病毒的復制。 4以上結果提示TIPE2基因通過負性調(diào)控免疫反應參與慢丙肝的發(fā)病過程及病程演變的過程。
【關鍵詞】：腫瘤壞死因子α誘導蛋白8型-2(TIPE2) Toll樣受體2 Toll樣受體4 T淋巴細胞亞群 慢性丙型病毒性肝炎(慢丙肝) 外周血單個核細胞(PBMCs) 免疫穩(wěn)態(tài)
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R512.63
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-13
• 前言13
• 材料與方法13-17
• 結果17-19
• 附圖19-25
• 附表25-27
• 討論27-35
• 結論35
• 參考文獻35-39
• 綜述 Toll樣受體在肝臟疾病中的臨床研究現(xiàn)狀39-49
• 參考文獻45-49
• 致謝49-50
• 個人簡歷50

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 林雪松,羅銳,閻飛;慢性丙型肝炎患者外周血單個核細胞HCV RNA檢測及其與機體免疫功能的相關性研究[J];實用肝臟病雜志;2005年03期

2 高得勇;張欣欣;;丙型肝炎免疫發(fā)病機制的研究進展[J];國際流行病學傳染病學雜志;2006年01期

3 ;丙型肝炎防治指南[J];臨床肝膽病雜志;2004年04期

4 王永祥;馬nI;高琦;朱法良;張利寧;;TIPE2和炎性細胞因子在鼠動脈硬化斑塊形成中的表達及其相互關系[J];山東大學學報(醫(yī)學版);2008年12期

5 張琳;苗亮;韓峰;竇曉光;;慢性丙型肝炎患者血清細胞因子水平的變化及意義[J];細胞與分子免疫學雜志;2011年03期

6 曹振環(huán);陳新月;;慢性丙型病毒性肝炎患者體內(nèi)T細胞亞群及細胞因子的變化[J];中國病原生物學雜志;2008年11期

7 段乃榮;張立婷;陳紅;;Toll樣受體與慢性病毒性肝炎[J];中華實驗和臨床感染病雜志(電子版);2009年04期

8 ;病毒性肝炎防治方案 中華醫(yī)學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會聯(lián)合修訂[J];肝臟;2000年04期

，

本文編號：517140