本文關(guān)鍵詞：抗TNF-α抗體對DSS結(jié)腸炎小鼠腸黏膜通透性的影響及機制研究

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【摘要】：背景腸黏膜屏障在預(yù)防微生物及毒素由腸腔侵入機體方面發(fā)揮重要作用。在炎癥性腸�。↖nflammatory bowel disease，IBD）過程中，腸道屏障功能顯著受損，菌群失調(diào)，大量內(nèi)毒素和（或）病原微生物等經(jīng)受損腸黏膜進入體循環(huán)，通過多種機制增加腸通透性，誘發(fā)和(或)加重腸道炎癥和免疫反應(yīng)，研究表明提出腸黏膜屏障破壞可能是IBD發(fā)病機制的啟動環(huán)節(jié)，修復(fù)腸黏膜屏障有利于控制或減輕腸黏膜炎癥和免疫反應(yīng)，改善腸黏膜通透性，，是治療IBD的重要方法之一。腸黏膜屏障主要包括腸上皮細胞(intestinal epithelial cell，IEC)和緊密連接(tight junction，TJ)，通過肌球蛋白輕鏈激酶（myosin light chain kinase，MLCK）激活，調(diào)控肌球蛋白輕鏈(MLC)收縮，相鄰腸上皮細胞間隙增大，腸黏膜通透性增加，前炎性細胞因子如TNF-α增加MLC磷酸酶轉(zhuǎn)錄和激活MLCK活性，增加腸黏膜通透性。目前部分抗結(jié)腸炎藥物可通過各種機制調(diào)控MLCK，影響腸上皮細胞緊密連接結(jié)構(gòu)和功能，抗TNF-α抗體作為生物制劑，在IBD的臨床治療中具有重要影響，抗TNF-α抗體治療可以降低CD患者腸黏膜通透性，修復(fù)腸黏膜屏障功能，是IBD生物治療的重要機制，目前尚未見到有關(guān)抗TNF抗體能否影響UC腸黏膜通透性，以及是否通過MLCK調(diào)控腸黏膜通透性的研究。 目的用C57BL/6J小鼠建立葡聚糖硫酸鈉(dextransulfatesodium，DSS)結(jié)腸炎模型，研究抗TNF-α抗體對DSS結(jié)腸炎小鼠腸黏膜通透性的影響及作用機制。 方法C57BL/6J小鼠自由飲用5％DSS溶液1周制備結(jié)腸炎模型，實驗分成正常對照組、DSS模型對照組、抗TNF-α抗體給藥組�？筎NF-α抗體（5mg/kg）腹腔注射給藥，每周兩次，正常對照組和DSS模型組用等量生理鹽水腹腔注射給藥，給藥時間共7天。每日進行DAI評分，實驗結(jié)束后取結(jié)腸進行HE染色評分，結(jié)腸黏膜勻漿檢測髓過氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)活性及TNF-α、IFN-γ、IL-13和IL-17水平，小腸黏膜透射電鏡檢查，采用EB和FITC-dextran方法檢測小腸黏膜通透性，另取小鼠小腸黏膜進行肌球蛋白輕鏈激酶(myosin light chain kinase,MLCK)活性測定、免疫組化及Western blot檢測。 結(jié)果與正常對照組比較，模型對照組小鼠出現(xiàn)明顯體重減輕、便血和腹瀉，DAI評分和HI評分增高(P0.01)，結(jié)腸黏膜勻漿中MPO活性和TNF-α、IFN-γ、IL-13和IL-17水平增高（P0.01）；電鏡檢查小鼠回腸黏膜上皮絨毛萎縮、排列不規(guī)則，細胞間連接復(fù)合體縮短、變寬，細胞間隙擴大，小腸黏膜通透性增高；小鼠小腸黏膜中MLCK活性明顯增高（P0.05），Western blot檢測顯示小鼠小腸黏膜MLCK表達明顯增加。與模型對照組比較，抗TNF-α抗體組小鼠DAI評分和HI評分明顯降低（P0.01），結(jié)腸黏膜勻漿中MPO活性和TNF-α水平降低（P0.01）；電鏡檢查小鼠回腸黏膜上皮細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)改善，絨毛排列整齊，小腸黏膜通透性降低；小鼠小腸黏膜中MLCK活性和表達明顯降低（P0.01）。 結(jié)論抗TNF-α抗體具有顯著的抗結(jié)腸炎作用，機制可能與通過調(diào)控MLCK表達改善腸黏膜通透性有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：抗TNF-α抗體 結(jié)腸炎 腸黏膜通透性 肌球蛋白輕鏈激酶
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R574.62
【目錄】：

• 英文縮略詞表7-8
• 摘要8-9
• Abstract9-11
• 1 前言11-12
• 2 材料和方法12-20
• 2.1 材料12-15
• 2.1.1 動物12
• 2.1.2 藥品與試劑12-14
• 2.1.3 儀器14-15
• 2.2 方法15-20
• 2.2.1 結(jié)腸炎動物模型的建立15
• 2.2.2 實驗分組和抗TNF-α給藥方法15
• 2.2.3 檢測方法15-20
• 2.2.3.1 疾病活動指數(shù)評分15-16
• 2.2.3.2 結(jié)腸組織的大體觀察和病理檢查16-17
• 2.2.3.3 結(jié)腸勻漿 MPO 水平檢測17-18
• 2.2.3.4 結(jié)腸勻漿 TNF-α、IFN-γ、IL-13 和 IL-17 水平檢測18-19
• 2.2.3.5 小腸黏膜電鏡檢查19
• 2.2.3.6 小腸黏膜腸通透性檢測19
• 2.2.3.7 小腸黏膜 MLCK 蛋白活性測定19-20
• 2.2.3.8 小腸黏膜 MLCK 蛋白免疫組化20
• 2.2.3.5 小腸黏膜 MLCK 蛋白免疫印跡測定20
• 2.3 數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析20
• 3 結(jié)果20-28
• 3.1 抗TNF-α抗體抗結(jié)腸炎的藥效學(xué)20-25
• 3.1.1 一般狀況20-21
• 3.1.2 結(jié)腸組織的大體觀察21-22
• 3.1.3 結(jié)腸組織的病理觀察22-23
• 3.1.4 結(jié)腸組織勻漿 MPO 活性23-24
• 3.1.5 結(jié)腸組織勻漿炎性細胞因子水平24-25
• 3.2 抗TNF-α抗體對結(jié)腸炎小鼠腸黏膜屏障的影響25-26
• 3.2.1 小腸黏膜超微結(jié)構(gòu)變化25
• 3.2.2 小腸黏膜通透性變化25-26
• 3.3 抗 TNF-α抗體對結(jié)腸炎小鼠腸黏膜 MLCK 表達的影響26-28
• 3.3.1 小腸黏膜 MLCK 活性的影響26-27
• 3.3.2 免疫組化檢測小腸黏膜 MLCK 表達27
• 3.3.3 免疫印記法檢測小腸黏膜 MLCK 表達27-28
• 4 討論28-32
• 5 結(jié)論32-33
• 參考文獻33-41
• 附錄41-42
• 致謝42-43
• 綜述43-49
• 參考文獻46-49

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號：513694