本文關(guān)鍵詞：COX-2對脂變BRL-3A細(xì)胞TG代謝及PPAR-γ、CPT-1基因表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 研究COX-2沉默與過表達(dá)對BRL-3A脂變及脂代謝相關(guān)基因PPAR-γ、CPT-1表達(dá)的影響。 方法 1、篩選最佳醫(yī)用脂肪乳濃度，制備肝細(xì)胞脂變模型：不同濃度脂肪乳(1%、2%、4%、6%、8%、10%)培養(yǎng)BRL-3A24h后通過油紅蘇木素染色法觀察細(xì)胞形態(tài)與細(xì)胞內(nèi)脂滴的形成情況、采用ELISA檢測細(xì)胞內(nèi)TG含量、MTT檢測細(xì)胞增殖活性確定誘導(dǎo)細(xì)胞脂變的最佳脂肪乳濃度。 2、實驗分為正常BRL-3A組、脂變BRL-3A對照組、pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA組、pYr-1.1-hU6-EGFP-HK組、pcDNA3.1(+)-rCOX-2組、pcDNA3.1(+)-HK組、尼美舒利200ug/ml陽性對照組；除正常BRL-3A組外，其他各組均以6%脂肪乳溶液誘導(dǎo)24h，各轉(zhuǎn)染組分別利用lipofectamineTM2000將對應(yīng)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入各組細(xì)胞，轉(zhuǎn)染24h后ELISA檢測各組細(xì)胞內(nèi)TG含量,了解COX-2沉默或過表達(dá)對BRL-3A細(xì)胞內(nèi)TG水平的影響；RT-PCR檢測各組細(xì)胞COX-2及脂代謝相關(guān)基因PPAR-γ、CPT-1mRNA的表達(dá)。 結(jié)果 1、隨脂肪乳濃度增加，油紅蘇木素染色顯示BRL-3A內(nèi)紅色小泡性脂滴增多，ELISA檢測顯示TG含量增加，MTT檢測顯示OD值下降。6%脂肪乳溶液誘導(dǎo)后BRL-3A內(nèi)T G含量較正常肝細(xì)胞組明顯增加，且細(xì)胞存活率大于90%，故將6%確定為實驗誘導(dǎo)BRL-3A脂變的最佳脂肪乳濃度。 2、轉(zhuǎn)染后，ELISA檢測各組細(xì)胞內(nèi)TG含量，RT-PCR檢測各組COX-2、PPAR-γ、CPT-1mRNA的表達(dá)： (1)與正常BRL-3A組相比，脂變BRL-3A對照組細(xì)胞內(nèi)TG含量明顯增加，COX-2mRNA表達(dá)增加，PPAR-γ、CPT-1mRNA表達(dá)減少； (2)與脂變BRL-3A對照組相比，，pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA組和尼美舒利200ug/ml陽性對照組細(xì)胞內(nèi)TG含量均減少，COX-2mRNA表達(dá)均減少，PPAR-γ、CPT-1mRNA表達(dá)均增加，以前者較為明顯； (3)與脂變BRL-3A對照組相比，pcDNA3.1(+)-rCOX-2組細(xì)胞內(nèi)TG含量增加，COX-2mRNA表達(dá)增加，PPAR-γ、 CPT-1mRNA表達(dá)減少； (4)pYr-1.1-hU6-EGFP-HK組、pcDNA3.1(+)-HK組與脂變BRL-3A對照組比較均無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論 1、6%脂肪乳溶液誘導(dǎo)BRL-3A可成功建立體外肝細(xì)胞脂肪變性模型。 2、BRL-3A脂變后，細(xì)胞內(nèi)TG含量增加，COX-2表達(dá)升高，脂代謝相關(guān)基因PPAR-γ、CPT-1表達(dá)降低。 3、COX-2沉默或抑制后，BRL-3A細(xì)胞COX-2表達(dá)降低，PPAR-γ、CPT-1表達(dá)升高，細(xì)胞內(nèi)TG含量減少。 4、COX-2過表達(dá)后，BRL-3A細(xì)胞COX-2表達(dá)升高，PPAR-γ、CPT-1的表達(dá)降低，細(xì)胞內(nèi)TG含量增加。
【關(guān)鍵詞】：環(huán)氧合酶-2 過氧化物酶體增殖物活化受體-γ 肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-1 甘油三酯
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R575.2
【目錄】：

• 主要英文縮略語索引5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 實驗材料與方法12-25
• 實驗結(jié)果25-34
• 討論34-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 綜述42-49
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 碩士期間發(fā)表的文章49-50
• 致謝50

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陽學(xué)風(fēng);RNAi沉默COX-2對HSC細(xì)胞動力學(xué)及脂質(zhì)代謝的影響[D];南華大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：COX-2對脂變BRL-3A細(xì)胞TG代謝及PPAR-γ、CPT-1基因表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：483774