本文關鍵詞：COX-2對脂變BRL-3A細胞TG代謝及PPAR-γ、CPT-1基因表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 研究COX-2沉默與過表達對BRL-3A脂變及脂代謝相關基因PPAR-γ、CPT-1表達的影響。 方法 1、篩選最佳醫(yī)用脂肪乳濃度，制備肝細胞脂變模型：不同濃度脂肪乳(1%、2%、4%、6%、8%、10%)培養(yǎng)BRL-3A24h后通過油紅蘇木素染色法觀察細胞形態(tài)與細胞內脂滴的形成情況、采用ELISA檢測細胞內TG含量、MTT檢測細胞增殖活性確定誘導細胞脂變的最佳脂肪乳濃度。 2、實驗分為正常BRL-3A組、脂變BRL-3A對照組、pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA組、pYr-1.1-hU6-EGFP-HK組、pcDNA3.1(+)-rCOX-2組、pcDNA3.1(+)-HK組、尼美舒利200ug/ml陽性對照組；除正常BRL-3A組外，其他各組均以6%脂肪乳溶液誘導24h，各轉染組分別利用lipofectamineTM2000將對應的質粒轉染入各組細胞，轉染24h后ELISA檢測各組細胞內TG含量,了解COX-2沉默或過表達對BRL-3A細胞內TG水平的影響；RT-PCR檢測各組細胞COX-2及脂代謝相關基因PPAR-γ、CPT-1mRNA的表達。 結果 1、隨脂肪乳濃度增加，油紅蘇木素染色顯示BRL-3A內紅色小泡性脂滴增多，ELISA檢測顯示TG含量增加，MTT檢測顯示OD值下降。6%脂肪乳溶液誘導后BRL-3A內T G含量較正常肝細胞組明顯增加，且細胞存活率大于90%，故將6%確定為實驗誘導BRL-3A脂變的最佳脂肪乳濃度。 2、轉染后，ELISA檢測各組細胞內TG含量，RT-PCR檢測各組COX-2、PPAR-γ、CPT-1mRNA的表達： (1)與正常BRL-3A組相比，脂變BRL-3A對照組細胞內TG含量明顯增加，COX-2mRNA表達增加，PPAR-γ、CPT-1mRNA表達減少； (2)與脂變BRL-3A對照組相比，，pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA組和尼美舒利200ug/ml陽性對照組細胞內TG含量均減少，COX-2mRNA表達均減少，PPAR-γ、CPT-1mRNA表達均增加，以前者較為明顯； (3)與脂變BRL-3A對照組相比，pcDNA3.1(+)-rCOX-2組細胞內TG含量增加，COX-2mRNA表達增加，PPAR-γ、 CPT-1mRNA表達減少； (4)pYr-1.1-hU6-EGFP-HK組、pcDNA3.1(+)-HK組與脂變BRL-3A對照組比較均無統(tǒng)計學意義。 結論 1、6%脂肪乳溶液誘導BRL-3A可成功建立體外肝細胞脂肪變性模型。 2、BRL-3A脂變后，細胞內TG含量增加，COX-2表達升高，脂代謝相關基因PPAR-γ、CPT-1表達降低。 3、COX-2沉默或抑制后，BRL-3A細胞COX-2表達降低，PPAR-γ、CPT-1表達升高，細胞內TG含量減少。 4、COX-2過表達后，BRL-3A細胞COX-2表達升高，PPAR-γ、CPT-1的表達降低，細胞內TG含量增加。
【關鍵詞】：環(huán)氧合酶-2 過氧化物酶體增殖物活化受體-γ 肉堿棕櫚酰轉移酶-1 甘油三酯
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R575.2
【目錄】：

• 主要英文縮略語索引5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 實驗材料與方法12-25
• 實驗結果25-34
• 討論34-38
• 結論38-39
• 參考文獻39-42
• 綜述42-49
• 參考文獻46-49
• 碩士期間發(fā)表的文章49-50
• 致謝50

【參考文獻】

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  本文關鍵詞：COX-2對脂變BRL-3A細胞TG代謝及PPAR-γ、CPT-1基因表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：483774