本文關鍵詞：慢性乙肝免疫基因治療質粒的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：抗病毒治療是目前臨床上最有效的慢性乙型肝炎治療手段，核苷類似物和干擾素通過抑制乙肝病毒的復制和合成常被用于臨床治療，其中干擾素還具有一定的免疫調節(jié)作用。盡管這些抗病毒藥物能夠有效降低患者體內的病毒數量，甚至有時可降至檢測不到的水平，但停藥后很快會出現病情反復，核苷類藥物長期用藥容易產生耐藥性，干擾素治療療程長、價格昂貴等。因此，探尋有效的新型治療方案是治療慢性乙肝的當務之急。 基因治療（gene therapy）是將外源性抗病毒因子導入靶細胞內，通過在不同水平細胞因子基因和共刺激分子基因的表達抑制病毒的復制，有效誘導機體產生免疫應答，同時還能避免長期給藥引發(fā)的耐藥性和副作用。作為一種能有效避免引發(fā)耐藥性和副作用的全新治療手段，基因治療的應用前景顯得尤為廣闊。 選擇合適的載體，將目的基因高效導入靶細胞，并獲得高效表達是決定基因治療成敗的關鍵一環(huán)。目前臨床上應用最廣的是基于病毒載體研發(fā)的基因治療劑，其優(yōu)點是病毒感染細胞能力強，免疫基因能夠高效進入靶細胞，基因治療效果顯著；但其缺點是病毒載體自身免疫原性很強，不能反復多次應用，否則機體產生針對載體自身的免疫應答會抵消基因治療的效果。以質粒為載體的基因治療劑具有安全性高、生產成本低廉及穩(wěn)定性好等優(yōu)點。同時質粒載體自身容量大，能夠方便實現目的基因的優(yōu)勢組合，相對于病毒載體而言，質粒載體自身免疫原性低，可以多次反復應用，卻不會引發(fā)機體針對載體本身的免疫應答。雖然質粒載體在進入細胞方面效率低于病毒載體，但隨著科學研究的不斷深入，質粒DNA遞送技術取得了長足發(fā)展，，特別是電穿孔技術的應用，使得質粒進入細胞的效率提升上百倍，與病毒載體的感染效率相接近。 本研究構建了可融合表達人源化小分子抗體靶向干擾素α和人白細胞介素12的免疫基因治療質粒pVAX-HBVE和可復制型質粒pSVK-HBVE，酶切和測序鑒定顯示質粒構建成功，通過ELISA檢測質粒在相應細胞系中獲得分泌表達，并利用轉基因小鼠模型對免疫基因治療質粒pVAX-HBVE和可復制型質粒pSVK-HBVE進行了初步免疫功能驗證，并對其免疫機制進行深入探討，為該免疫基因治療質粒的免疫功能全面驗證奠定了重要基礎。
【關鍵詞】：乙肝 復制型 質粒構建 免疫基因治療劑 dsFv IFN-α hIL-12 真核表達
【學位授予單位】：曲阜師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R512.62
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 第一章 文獻綜述8-11
• 1 乙型肝炎及其治療現狀8
• 2 基因治療簡介8-9
• 3 乙肝治療劑目的基因的選擇9
• 4 乙肝治療劑載體9-11
• 第二章 靶向干擾素和白細胞介素-12 的融合表達質粒 PVAX-HBVE 的構建與表達11-21
• 1 材料與儀器11
• 1.1 質粒、菌株與細胞株11
• 1.2 酶和試劑11
• 1.3 主要儀器設備11
• 2 實驗方法11-16
• 2.1 重組質粒 pVAX-HBVE 的構建與鑒定11-15
• 2.2 重組質粒 pVAX-HBVE 的體外表達驗證15-16
• 3 實驗結果16-19
• 3.1 重組質粒 pVAX-HBVE 的構建與鑒定16-17
• 3.2 重組質粒 pVAX-HBVE 瞬時轉染 293T 細胞上清中 IFN-α和 hIL-12 表達驗證17-18
• 3.3 重組質粒 pVAX-HBVE 初步功能驗證18-19
• 4 討論19-21
• 第三章 可復制型質粒 PSVK-HBVE 的構建、表達與初步功能驗證21-31
• 1 材料與儀器21
• 1.1 質粒、菌株、細胞株與實驗動物21
• 1.2 酶和試劑21
• 1.3 主要儀器設備21
• 2 實驗方法21-26
• 2.1 重組質粒 pSVK-HBVE 的構建與鑒定21-25
• 2.2 重組質粒 pSVK-HBVE 的體外表達與初步功能驗證25-26
• 3 實驗結果26-29
• 3.1 重組質粒 pSVK-HBVE 的構建與鑒定26-27
• 3.2 重組質粒 pSVK-HBVE 瞬時轉染 293T 細胞上清中 IFN-α和 hIL-12 表達驗證27-28
• 3.3 重組質粒 pSVK-HBVE 初步功能驗證28-29
• 4 討論29-31
• 第四章 結論31-32
• 附錄：縮略語索引32-33
• 參考文獻33-36
• 在校期間發(fā)表的學術論文36-37
• 致謝37

【相似文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

1 劉民培;癌癥免疫基因治療策略的研究進展[J];中國腫瘤臨床與康復;1998年06期

2 唐偉,徐弘,真船健一;惡性腫瘤的免疫基因治療研究[J];國外醫(yī)學(腫瘤學分冊);1999年06期

3 臧健;任道凌;易成;;腫瘤免疫基因治療的研究進展[J];四川腫瘤防治;2006年04期

4 曹雪濤;免疫基因治療的研究現狀與發(fā)展趨勢[J];中國腫瘤生物治療雜志;1996年04期

5 王斌;陳立軍;;腫瘤免疫基因治療的應用研究進展[J];軍事醫(yī)學科學院院刊;2007年02期

6 Frank Fan;;癌癥的免疫基因治療:從基礎到臨床（英文）[J];中國腫瘤外科雜志;2009年03期

7 秦雪梅;B7介導基因治療惡性腫瘤進展[J];國外醫(yī)學(免疫學分冊);2001年06期

8 王雪峰,劉曉謙;膠質瘤的免疫基因治療[J];國外醫(yī)學(免疫學分冊);2003年02期

9 瞿旭東,王建華;肝癌的免疫基因治療[J];臨床放射學雜志;2001年06期

10 周郁;免疫基因治療腫瘤的應用研究[J];醫(yī)學綜述;2001年01期

中國重要會議論文全文數據庫 前8條

1 李增山;隋延仿;;肝癌超抗原/共刺激分子免疫基因治療研究[A];科技、工程與經濟社會協調發(fā)展——中國科協第五屆青年學術年會論文集[C];2004年

2 黃宏靚;湯谷平;李達;沈芬平;王青青;余海;曹雪濤;;一種新型可降解非病毒載體在腫瘤免疫基因治療的應用[A];中國免疫學會第五屆全國代表大會暨學術會議論文摘要[C];2006年

3 黃宏靚;湯谷平;李達;沈芬平;王青青;余海;曹雪濤;;一種新型可降解非病毒載體在腫瘤免疫基因治療的應用[A];浙江省免疫學會第六次學術研討會論文匯編[C];2007年

4 李達;王青青;湯谷平;黃宏靚;李經忠;沈芬平;余海;曹雪濤;;低分子量聚乙烯亞胺作為轉基因載體在腫瘤免疫基因治療中的應用[A];中國免疫學會第五屆全國代表大會暨學術會議論文摘要[C];2006年

5 李達;王青青;湯谷平;黃宏靚;李經忠;沈芬平;余海;曹雪濤;;低分子量聚乙烯亞胺作為轉基因載體在腫瘤免疫基因治療中的應用[A];浙江省免疫學會第六次學術研討會論文匯編[C];2007年

6 寧旭;尚顯文;張皓;;B7基因家族和腫瘤免疫基因治療[A];2006年貴州省醫(yī)學會骨科學分會學術年會論文匯編[C];2006年

7 耿婷;張桂梅;黃波;肖晗;馮作化;;采用sPD-1協同4-1BBL進行腫瘤免疫基因治療的研究[A];湖北省暨武漢市生物化學與分子生物學學會第八屆第十七次學術年會論文匯編[C];2007年

8 張洪泉;錢伯初;;前列腺癌免疫基因治療和藥物調控[A];第七屆中國抗炎免疫藥理學術會議論文摘要集[C];2000年

中國重要報紙全文數據庫 前1條

1 記者 王雪飛;腫瘤基礎研究獲重要進展[N];健康報;2000年

中國碩士學位論文全文數據庫 前1條

1 侯沙沙;慢性乙肝免疫基因治療質粒的實驗研究[D];曲阜師范大學;2014年

  本文關鍵詞：慢性乙肝免疫基因治療質粒的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：484971