本文關(guān)鍵詞：葉酸缺乏與基因甲基化在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)是一種特發(fā)性腸道慢性炎癥性疾病,其發(fā)病機(jī)制目前尚未完全明確�，F(xiàn)認(rèn)為是遺傳、感染、環(huán)境和免疫因素等多種因素相互作用的結(jié)果。有研究發(fā)現(xiàn)促炎因子干擾素γ在UC發(fā)病中發(fā)揮關(guān)鍵作用,在UC結(jié)腸黏膜中其表達(dá)水平明顯增多,而且干擾素基因啟動(dòng)子區(qū)存在低甲基化改變,其高表達(dá)很可能是基因低甲基化的結(jié)果。另外有研究表明,在UC小鼠模型中,給予甲基供體(葉酸、維生素B12)缺乏食物可促使某些細(xì)胞炎癥因子及化學(xué)因子的表達(dá)增多,進(jìn)一步加重結(jié)腸黏膜炎癥程度。本研究通過給予UC小鼠模型葉酸缺乏食物,并檢測(cè)血清葉酸,結(jié)腸黏膜干擾素Y的表達(dá)水平及干擾素基因甲基化水平,分析葉酸缺乏是否通過導(dǎo)致基因低甲基化,使干擾素γ高表達(dá)而在UC發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮作用,為UC的診斷及治療提供新的依據(jù)。 材料和方法： 1動(dòng)物模型的建立及分組：選取符合實(shí)驗(yàn)要求的雌性BALB/C小鼠24只,并隨機(jī)分為4組,每組6只,分組如下：A組葉酸缺乏(D),造模(DSS+)；B組標(biāo)準(zhǔn)飲食(C),造模(DSS+)；C組標(biāo)準(zhǔn)飲食(C),未造模(DSS-)；D組葉酸缺乏(D),未造模(DSS-)。D：予以無葉酸飲食飼養(yǎng)；C：給予等量標(biāo)準(zhǔn)飲食,飲水量不限；DSS+：自第6周起,給予5%葡聚糖硫酸鈉溶液作為飲用水,持續(xù)7天,擬建立急性結(jié)腸炎小鼠模型：DSS-：僅飲用純凈水,作為對(duì)照。 2一般狀況觀察：分別于實(shí)驗(yàn)開始前,第5、6周末記錄小鼠體重變化；每日觀察小鼠飲食、飲水量,活動(dòng)狀態(tài)等生命體征情況；自第6周起至實(shí)驗(yàn)結(jié)束,每日觀察并記錄小鼠糞便性狀、肛周紅腫、糜爛及便血程度。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,分別采集4組小鼠尾靜脈血及新鮮結(jié)腸黏膜組織標(biāo)本。 3結(jié)腸炎癥活動(dòng)度評(píng)價(jià)：根據(jù)小鼠體重減輕程度、糞便性狀、便血程度計(jì)分,“正�！庇�(jì)為0分,其余根據(jù)程度不同分別計(jì)為1、2、3、4分,記錄總分?jǐn)?shù),依據(jù)“結(jié)腸炎癥活動(dòng)指數(shù)”=總分?jǐn)?shù)/3(0-4),評(píng)估結(jié)腸炎癥活動(dòng)度；0為健康,4表示炎癥活動(dòng)程度最大。 4血清葉酸檢測(cè)：采用生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)小鼠外周靜脈血清葉酸水平。 5干擾素γ的表達(dá)：利用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)小鼠結(jié)腸黏膜組織干擾素γ的表達(dá)。 6干擾素基因甲基化：應(yīng)用生物信息學(xué)技術(shù)進(jìn)行干擾素基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島預(yù)測(cè)并設(shè)計(jì)甲基化特異性PCR引物。提取結(jié)腸組織DNA,應(yīng)用MSP檢測(cè)干擾素基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化水平。 結(jié)果： 1外周靜脈血清葉酸水平 分別檢測(cè)四組小鼠血清葉酸濃度,單位為ng/ml, A組濃度值范圍在2.5～3.0,平均值為2.75；B組范圍在13.2-14.1,平均值為13.6；C組范圍在12.5～14.5,平均值為13.5,；D組范圍在2.4～3.1,平均值為2.8。A組和D組的血清葉酸水平較B組和C組明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；B組與C組之間,A組與D組之間相比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),P值分別為0.62和0.25。 2結(jié)腸黏膜組織干擾素γ表達(dá)水平 A組和B組結(jié)腸黏膜組織干擾素γ表達(dá)水平較C組和D組均明顯增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；A組較B組明顯增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；C組與D組之間相比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3干擾素γ表達(dá)水平與結(jié)腸炎癥活動(dòng)性指數(shù)的相關(guān)性分析 A組和B組中,干擾素γ表達(dá)水平與結(jié)腸炎癥活動(dòng)性指數(shù)呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)r為0.796(P0.01)。 4葉酸水平分別與干擾素γ表達(dá)水平、結(jié)腸炎癥活動(dòng)性指數(shù)的相關(guān)性分析 A組中,葉酸水平分別與干擾素γ表達(dá)水平、結(jié)腸炎癥活動(dòng)性指數(shù)呈負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)r分別為-0.880、-0.997(P0.05)；B組中,葉酸水平與干擾素γ的表達(dá)、結(jié)腸炎癥活動(dòng)性指數(shù)不具有相關(guān)性(P0.05)；C組中,葉酸水平與干擾素γ表達(dá)水平無相關(guān)性(P0.05)；D組中,葉酸水平與干擾素γ水平呈負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)r為-0.867(P0.05)。 5各組小鼠結(jié)腸黏膜組織干擾素基因MSP檢測(cè),未出現(xiàn)基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化 MSP產(chǎn)物經(jīng)2.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)IFNG的甲基化改變,A、B、C、D四組樣本分別用甲基化特異性引物擴(kuò)增,其產(chǎn)物經(jīng)檢測(cè)未出現(xiàn)甲基化條帶；四組樣本用非甲基化特異性引物擴(kuò)增,其產(chǎn)物經(jīng)檢測(cè)出現(xiàn)非甲基化條帶,基因擴(kuò)增產(chǎn)物的大小約70bp(50bp-100bp)；空白對(duì)照未出現(xiàn)擴(kuò)增條帶。 結(jié)論： 1在急性潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型中,葉酸的缺乏可導(dǎo)致炎癥因子干擾素Y的表達(dá)增高,加重結(jié)腸黏膜炎癥活動(dòng)性的程度。 2在急性潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型中,干擾素基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島低甲基化或許不是導(dǎo)致結(jié)腸黏膜干擾素γ表達(dá)增多的直接因素。 3葉酸的缺乏導(dǎo)致干擾素基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島低甲基化,進(jìn)而引起干擾素γ高表達(dá),在急性潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型中的作用不明顯。
【關(guān)鍵詞】：潰瘍性結(jié)腸炎 葉酸缺乏 干擾素γ 干擾素基因 甲基化特異性PCR CpG島 酶聯(lián)免疫吸附 免疫組織化學(xué)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R574.62
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說明11-12
• 前言12-14
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-14
• 一、葉酸缺乏在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制中的研究14-28
• 1.1 對(duì)象和方法14-20
• 1.1.1 主要儀器14-15
• 1.1.2 主要試劑15
• 1.1.3 動(dòng)物模型的建立15-17
• 1.1.4 標(biāo)本的采集17-18
• 1.1.5 實(shí)驗(yàn)方法18-20
• 1.1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析20
• 1.2 結(jié)果20-25
• 1.2.1 小鼠血清葉酸測(cè)定20-22
• 1.2.2 小鼠血清葉酸測(cè)定22
• 1.2.3 小鼠結(jié)腸黏膜組織干擾素γ免疫組化檢測(cè)結(jié)果22-24
• 1.2.4 不同組間IFN-γ的表達(dá)與炎癥活動(dòng)性指數(shù)的相關(guān)性分析24
• 1.2.5 不同組間血清葉酸水平與IFN-γ表達(dá)、黏膜炎癥活動(dòng)性指數(shù)的相關(guān)性分析24-25
• 1.3 討論25-28
• 二、潰瘍性結(jié)腸炎中干擾素基因甲基化水平的研究28-41
• 2.1 對(duì)象和方法28-36
• 2.1.1 主要儀器29
• 2.1.2 主要試劑29-30
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)方法30-35
• 2.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析35-36
• 2.2 結(jié)果36-37
• 2.2.1 組織中DNA質(zhì)量的檢測(cè)36
• 2.2.2 組織中干擾素基因甲基化的檢測(cè)36-37
• 2.3 討論37-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明46-47
• 綜述 潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病機(jī)制和最新治療進(jìn)展47-60
• 綜述參考文獻(xiàn)55-60
• 致謝60

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 朱芳麗;李秀榮;張曉嵐;;重度潰瘍性結(jié)腸炎的治療進(jìn)展[J];臨床藥物治療雜志;2010年01期

2 陳潔玲;肖偉;林彬;g采，

本文編號(hào)：445254