本文關(guān)鍵詞：Toll樣受體3在乙肝病毒致bewo細(xì)胞凋亡中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】： 目的 ①探索乙肝病毒能否在bewo細(xì)胞中復(fù)制,建立對(duì)乙肝病毒易感的細(xì)胞模型; ②探索乙肝病毒能否能使得bewo發(fā)生凋亡; ③探索TLR3是否在乙肝病毒致bewo細(xì)胞凋亡中起作用。 方法 ①bewo細(xì)胞與HBV DNA含量為5.0×106 (copies/ml)的血清共培養(yǎng)后,PCR檢測(cè)細(xì)胞中HBV cccDNA的表達(dá)情況; ②通過流式細(xì)胞技術(shù)、TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況,探討能夠使得bewo細(xì)胞發(fā)生凋亡的HBV DNA的劑量、作用時(shí)間; ③觀察PolyI:C刺激對(duì)與HBV DNA陽性血清共培養(yǎng)的bewo細(xì)胞凋亡的影響,同時(shí)流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)TLR3蛋白的改變,推測(cè)TLR3在乙肝病毒致bewo細(xì)胞凋亡中所起的作用。 結(jié)果 ①與HBV DNA陽性血清共培養(yǎng)48小時(shí)后,PBS反復(fù)洗滌,繼續(xù)生長(zhǎng)24h、48h后bewo細(xì)胞中能夠檢測(cè)出HBV cccDNA; ②bewo細(xì)胞與50μl HBV DNA含量為5.0×106 (copies/ml)的血清共培養(yǎng)8h、24h、48h,早期凋亡率分別為4.34±3.42%、1.98±1.42%、6.58±3.44%,總凋亡率分別為10.78±5.36%、7.21±2.39%、16.35±9.61%,與同期對(duì)照組比較差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P值均大于0.05; ③bewo細(xì)胞與100μl HBV DNA含量為5.0×106 (copies/ml)血清的共培養(yǎng)8h,早期凋亡率為5.55±1.80%,總凋亡率為10.88±2.33%,與對(duì)照組比較差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.064、P=0.997)。與100μl HBV DNA含量為5.0×106 (copies/ml)血清共培養(yǎng)24h、48h后,bewo細(xì)胞早期凋亡率分別為20.76±2.13%、24.23±6.87%,總凋亡率分別為25.58±2.11%、30.95±9.02%,凋亡指數(shù)分別為27.17±1.22%、30.47±1.92%,與對(duì)照組比較差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P值均小于0.001。 ④Poly I:C刺激后再與HBV DNA陽性血清共培養(yǎng)24h、48h,bewo細(xì)胞早期凋亡率分別為6.28±3.70%、6.25±1.35%,總凋亡率分別為7.69±3.71%、6.67±1.54%,均低于HBV DNA陽性血清直接刺激組,t檢驗(yàn)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均小于0.05); ⑤PolyI:C刺激組bewo細(xì)胞TLR3蛋白平均熒光強(qiáng)度為36.0217±2.71701,對(duì)照組細(xì)胞為32.5852±1.40918,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.02)。 結(jié)論 ①乙肝病毒能夠在bewo細(xì)胞中復(fù)制,bewo細(xì)胞適合進(jìn)行體外乙肝病毒感染試驗(yàn); ②乙肝病毒能夠使得bewo細(xì)胞發(fā)生凋亡,上調(diào)TLR3的表達(dá),TLR3可能參與了乙肝病毒致bewo細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo); ③PolyI:C刺激后上調(diào)了TLR3蛋白的表達(dá),降低了與HBV DNA陽性血清共培養(yǎng)的bewo細(xì)胞的凋亡率。PolyI:C對(duì)TLR3的活化可能增強(qiáng)bewo細(xì)胞的抗病毒能力,減少凋亡的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：乙肝病毒 細(xì)胞凋亡 TLR3 bewo
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R512.62
【目錄】：

• 常用縮寫詞中英文對(duì)照表6-7
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-14
• 第一章 乙型肝炎病毒體外感染 bewo 細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究14-26
• 1. 材料14-16
• 1.1 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞和感染用血清及其處理14
• 1.2 主要試劑14
• 1.3 主要儀器14-15
• 1.4 主要試劑的配制15-16
• 2. 方法16-19
• 2.1 bewo 細(xì)胞的培養(yǎng)16-17
• 2.2 HBV 體外感染bewo 細(xì)胞的基本方法17-18
• 2.3 PCR 檢測(cè)bewo 細(xì)胞中HBV cccDNA18-19
• 3. 結(jié)果19-24
• 3.1 人胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞系bewo 細(xì)胞體外生長(zhǎng)曲線19-20
• 3.2 bewo 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察20-21
• 3.3 與HBV DNA 陽性血清共同培養(yǎng)的bewo 細(xì)胞形態(tài)21-23
• 3.4 PCR 檢測(cè)bewo 細(xì)胞中HBVcccDNA23-24
• 4. 討論24-26
• 第二章 Toll 樣受體3 在乙型肝炎病毒致bewo 細(xì)胞凋亡中的作用26-41
• 1. 材料26-27
• 1.1 主要試劑26
• 1.2 主要儀器26
• 1.3 主要試劑配制26-27
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法27-29
• 2.1 bewo 細(xì)胞的培養(yǎng)：見第一部分27
• 2.2 HBV DNA 陽性血清刺激 bewo 細(xì)胞凋亡方法27
• 2.3 Annexin V-FITC/PI 雙染檢測(cè)bewo 細(xì)胞的凋亡情況27
• 2.4 玻片防脫處理27
• 2.5 細(xì)胞爬片的制作27-28
• 2.6 TUNEL 法檢測(cè)bewo 細(xì)胞的凋亡28
• 2.7 PolyI:C 體外刺激bewo 細(xì)胞28
• 2.8 流式細(xì)胞儀檢測(cè)培養(yǎng)bewo 細(xì)胞TLR3 蛋白的表達(dá)28-29
• 2.9 統(tǒng)計(jì)分析方法29
• 3. 結(jié)果29-36
• 3.1 乙肝病毒對(duì)bewo 細(xì)胞凋亡的影響29-34
• 3.2 PolyI:C 刺激對(duì)bewo 細(xì)胞TLR3 蛋白表達(dá)的影響34-35
• 3.3 PolyI:C 刺激對(duì)乙肝病毒致bewo 細(xì)胞凋亡的影響35-36
• 4. 討論36-41
• 4.1 乙肝病毒對(duì)bewo 細(xì)胞凋亡的影響36-38
• 4.2 TLR3 在病毒感染中的作用38-39
• 4.3 PolyI:C 的作用39-41
• 全文小結(jié)41-42
• 本文研究特色42-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 綜述47-55
• 個(gè)人簡(jiǎn)介55-56
• 致謝56

【引證文獻(xiàn)】

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 魏俊妮;胎盤細(xì)胞凋亡在HBsAg陽性孕婦PBMC母—胎轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制中的作用[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 張s，

本文編號(hào)：426354