發(fā)布時間：2017-06-01 05:13

  本文關(guān)鍵詞：miR-146a調(diào)控Toll-like recetor4信號通路在腸缺血及缺血再灌注損傷中的作用及機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:在體外模擬腸缺血及缺血再灌注,探討miR-146a及TLR4-TRAF6-NF-κB通路在其中的作用情況,為腸缺血的早期診斷及缺血相關(guān)性損傷之治療提供理論基礎(chǔ)。方法:利用大鼠腸上皮細胞(intestinal epithelial cell,IEC-6),分別以1h、2h、3h建立不同時間缺血模型(I1h、I2h、I3h),以缺血1h再灌注1h建立缺血再灌注模型(I1hR1h),再在I1h組及I1hR1h組中調(diào)控miR-146a的表達,利用實時定量PCR檢測各組mi R-146a、TLR4、TRAF6、RIP、XIAP的mRNA表達水平,利用流式細胞儀檢測細胞凋亡率,Western-Blot檢測HIF-1α、TLR4、TRAF6、RIP、XIAP、SCOS-3、NF-κB、cleaved-Caspase-3蛋白表達。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗,多樣本均數(shù)多重比較采用單因素方差分析,P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:(1)HIF-1α在缺血時表達顯著增加(P0.01),再灌注處理后其表達下調(diào),迅速趨于正常水平。(2)腸缺血患者血漿中,miR-146a的表達顯著下降(P0.01)。(3)缺血1h后miR-146a的表達顯著降低(P0.01),以后隨著缺血時間的延長而緩慢恢復(fù),但始終低于正常;I1hR1h組的miR-146a水平高于I1h組(P0.05),但仍顯著低于正常(P0.05)。(4)細胞在缺血1h、2h、3h情況下的凋亡率會隨著缺血時間的延長而逐漸升高,但缺血2h時與缺血3h時比較無統(tǒng)計學(xué)意義;I1hR1h組的凋亡率較I1h組更高(P0.05)。(5)在tlr4、traf6、rip的mrna水平與tlr4、traf6、rip、nf-κb、cleaved-caspase-3的蛋白水平中,具有相似的變化趨勢,都是在缺血及缺血再灌注中顯著升高(p0.05),其中在缺血1h時升高得最明顯(p0.01),以后隨著缺血時間的延長及再灌注的發(fā)生較在i1h組的基礎(chǔ)上有所下降,但始終高于正常(p0.05);xiap的mrna水平與scos-3、xiap的蛋白水平變化中,都是在缺血1h時顯著下降(p0.01),以后隨著缺血時間的延長或再灌注的發(fā)生略有恢復(fù),但始終低于正常(p0.05)。(6)在正常對照組中給予mir-146a的mimic或inhibitor處理后,可顯著上調(diào)或下調(diào)mir-146a的表達(p0.01),但對細胞凋亡率無明顯改變,無統(tǒng)計學(xué)意義。(7)在i1h組中,用mir-146a的mimic處理后,mir-146a的水平顯著升高(p0.01);而用mir-146a的inhibitor處理過后,mir-146a下降趨勢不明顯,無統(tǒng)計學(xué)意義。(8)在i1hr1h組中,給予mir-146a的mimic或inhibitor處理后,可顯著上調(diào)或下調(diào)mir-146a的表達水平(p0.05)。(9)在i1h組及i1hr1h組中,用mir-146a的mimic處理,顯著上調(diào)mir-146a的表達水平后,tlr4、traf6、rip、nf-κb、cleaved-caspase-3的上調(diào)被抑制,而socs-3及xiap的上調(diào)被促進,各自與單純i1h組、i1hr1h組比較具有明顯差異(p0.05),細胞凋亡率下降,說明mir-146a抑制細胞凋亡起保護作用。(10)在i1hr1h組中,用mir-146a的inhibitor處理,下調(diào)mir-146a的表達水平后,tlr4、traf6、rip、nf-κb、cleaved-caspase-3表達上調(diào),而socs-3及xiap表達下調(diào),與單純i1hr1h組相比具有明顯差異(p0.05),細胞凋亡率增加,說明抑制mir-146a過后加劇細胞凋亡起損傷作用。結(jié)論:(1)miR-146a參與腸缺血及缺血再灌注過程,血漿miR-146a可望成為臨床早期診斷小腸缺血的生物學(xué)標(biāo)志;(2)TLR4-TRAF6-NF-κB信號通路參與腸缺血及缺血再灌注過程,介導(dǎo)細胞損傷;(3)miR-146a通過負(fù)調(diào)控TLR4-TRAF6-NF-κB信號通路抑制細胞凋亡,從而在腸缺血及缺血再灌注過程中起保護作用;(4)上調(diào)miR-146a或抑制TLR4-TRAF6-NF-κB通路的激活有望成為預(yù)防并治療腸缺血相關(guān)性疾病的有效靶點。
【關(guān)鍵詞】：腸缺血 腸缺血再灌注 TLR4 miR-146a 凋亡
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R574
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 前言11-16
• 材料與方法16-36
• 實驗結(jié)果36-51
• 討論51-69
• 結(jié)論69-70
• 參考文獻70-78
• 英漢縮略詞對照表78-80
• 致謝80-82
• Toll樣受體4與腸缺血再灌注損傷關(guān)系研究進展（綜述）82-99
• 參考文獻90-99
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文99-100

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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2 李德淵;屈藝;李晉輝;張莉;熊濤;母得志;;核轉(zhuǎn)錄因子FOXO3a在新生大鼠缺氧缺血性腦損傷神經(jīng)元凋亡中的作用[J];中國當(dāng)代兒科雜志;2013年11期

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6 李和剛;張寶s

本文編號：411762