本文關(guān)鍵詞：miR-146a調(diào)控Toll-like recetor4信號(hào)通路在腸缺血及缺血再灌注損傷中的作用及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:在體外模擬腸缺血及缺血再灌注,探討miR-146a及TLR4-TRAF6-NF-κB通路在其中的作用情況,為腸缺血的早期診斷及缺血相關(guān)性損傷之治療提供理論基礎(chǔ)。方法:利用大鼠腸上皮細(xì)胞(intestinal epithelial cell,IEC-6),分別以1h、2h、3h建立不同時(shí)間缺血模型(I1h、I2h、I3h),以缺血1h再灌注1h建立缺血再灌注模型(I1hR1h),再在I1h組及I1hR1h組中調(diào)控miR-146a的表達(dá),利用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)各組mi R-146a、TLR4、TRAF6、RIP、XIAP的mRNA表達(dá)水平,利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,Western-Blot檢測(cè)HIF-1α、TLR4、TRAF6、RIP、XIAP、SCOS-3、NF-κB、cleaved-Caspase-3蛋白表達(dá)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn),多樣本均數(shù)多重比較采用單因素方差分析,P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:(1)HIF-1α在缺血時(shí)表達(dá)顯著增加(P0.01),再灌注處理后其表達(dá)下調(diào),迅速趨于正常水平。(2)腸缺血患者血漿中,miR-146a的表達(dá)顯著下降(P0.01)。(3)缺血1h后miR-146a的表達(dá)顯著降低(P0.01),以后隨著缺血時(shí)間的延長(zhǎng)而緩慢恢復(fù),但始終低于正常;I1hR1h組的miR-146a水平高于I1h組(P0.05),但仍顯著低于正常(P0.05)。(4)細(xì)胞在缺血1h、2h、3h情況下的凋亡率會(huì)隨著缺血時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高,但缺血2h時(shí)與缺血3h時(shí)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;I1hR1h組的凋亡率較I1h組更高(P0.05)。(5)在tlr4、traf6、rip的mrna水平與tlr4、traf6、rip、nf-κb、cleaved-caspase-3的蛋白水平中,具有相似的變化趨勢(shì),都是在缺血及缺血再灌注中顯著升高(p0.05),其中在缺血1h時(shí)升高得最明顯(p0.01),以后隨著缺血時(shí)間的延長(zhǎng)及再灌注的發(fā)生較在i1h組的基礎(chǔ)上有所下降,但始終高于正常(p0.05);xiap的mrna水平與scos-3、xiap的蛋白水平變化中,都是在缺血1h時(shí)顯著下降(p0.01),以后隨著缺血時(shí)間的延長(zhǎng)或再灌注的發(fā)生略有恢復(fù),但始終低于正常(p0.05)。(6)在正常對(duì)照組中給予mir-146a的mimic或inhibitor處理后,可顯著上調(diào)或下調(diào)mir-146a的表達(dá)(p0.01),但對(duì)細(xì)胞凋亡率無(wú)明顯改變,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(7)在i1h組中,用mir-146a的mimic處理后,mir-146a的水平顯著升高(p0.01);而用mir-146a的inhibitor處理過(guò)后,mir-146a下降趨勢(shì)不明顯,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(8)在i1hr1h組中,給予mir-146a的mimic或inhibitor處理后,可顯著上調(diào)或下調(diào)mir-146a的表達(dá)水平(p0.05)。(9)在i1h組及i1hr1h組中,用mir-146a的mimic處理,顯著上調(diào)mir-146a的表達(dá)水平后,tlr4、traf6、rip、nf-κb、cleaved-caspase-3的上調(diào)被抑制,而socs-3及xiap的上調(diào)被促進(jìn),各自與單純i1h組、i1hr1h組比較具有明顯差異(p0.05),細(xì)胞凋亡率下降,說(shuō)明mir-146a抑制細(xì)胞凋亡起保護(hù)作用。(10)在i1hr1h組中,用mir-146a的inhibitor處理,下調(diào)mir-146a的表達(dá)水平后,tlr4、traf6、rip、nf-κb、cleaved-caspase-3表達(dá)上調(diào),而socs-3及xiap表達(dá)下調(diào),與單純i1hr1h組相比具有明顯差異(p0.05),細(xì)胞凋亡率增加,說(shuō)明抑制mir-146a過(guò)后加劇細(xì)胞凋亡起損傷作用。結(jié)論:(1)miR-146a參與腸缺血及缺血再灌注過(guò)程,血漿miR-146a可望成為臨床早期診斷小腸缺血的生物學(xué)標(biāo)志;(2)TLR4-TRAF6-NF-κB信號(hào)通路參與腸缺血及缺血再灌注過(guò)程,介導(dǎo)細(xì)胞損傷;(3)miR-146a通過(guò)負(fù)調(diào)控TLR4-TRAF6-NF-κB信號(hào)通路抑制細(xì)胞凋亡,從而在腸缺血及缺血再灌注過(guò)程中起保護(hù)作用;(4)上調(diào)miR-146a或抑制TLR4-TRAF6-NF-κB通路的激活有望成為預(yù)防并治療腸缺血相關(guān)性疾病的有效靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：腸缺血 腸缺血再灌注 TLR4 miR-146a 凋亡
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R574
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 前言11-16
• 材料與方法16-36
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-51
• 討論51-69
• 結(jié)論69-70
• 參考文獻(xiàn)70-78
• 英漢縮略詞對(duì)照表78-80
• 致謝80-82
• Toll樣受體4與腸缺血再灌注損傷關(guān)系研究進(jìn)展（綜述）82-99
• 參考文獻(xiàn)90-99
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文99-100

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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6 李和剛;張寶s

本文編號(hào)：411762