本文關(guān)鍵詞：美洲大蠊提取物抗肝纖維化機理的體外研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：本研究以肝纖維化發(fā)生發(fā)展的重要細(xì)胞—肝星狀細(xì)胞(HSC)為研究對象,研究美洲大蠊提取物對體外培養(yǎng)的大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC-T6)增值、凋亡、細(xì)胞周期以及Ⅰ、Ⅲ型膠原、a-SMA表達(dá)的影響,并探討其抗肝纖維化機制是否于MAPK(ERK1/2)信號通路有關(guān),為美洲大蠊物提取物進一步治療肝纖維化提供基礎(chǔ)依據(jù)。 方法：1體外培養(yǎng)大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC-T6)和大鼠正常肝細(xì)胞(BRL-3A),用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測不同濃度(0.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL4mg/mL、6mg/mL、8mg/mL、10mg/mL、16mg/mL)的美洲大蠊提取物對HSC-T6細(xì)胞和BRL-3A細(xì)胞作用24h時、48h時、72h時的增殖情況,找出美洲大蠊提取物對HSC-T6的最佳抑制濃度。 2應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測不同濃度(最佳抑制濃度及上下兩個濃度)美洲大蠊提取物對HSC-T6細(xì)胞凋亡和周期的影響。用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色法檢測Ⅰ、Ⅲ型膠原、a-SMA的表達(dá)。 3將培養(yǎng)的大鼠肝星狀細(xì)胞株(HSC-T6)分為4個實驗組：空白對照組；PDGF刺激組；PDGF+美洲大蠊提取物組；PDGF+ERK1/2阻滯劑組；培養(yǎng)24小時后提取蛋白,用western blot方法檢測ERK1/2、P-ERK1/2表達(dá)水平。 結(jié)果：1MTT法檢測結(jié)果顯示：各濃度的美洲大蠊提取物干預(yù)HSC-T6細(xì)胞,實驗組HSC-T6細(xì)胞的增殖率均低于對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),且隨著藥物濃度的增加和作用時間的延長,細(xì)胞增殖抑制率逐漸升高,呈明顯的劑量和時間依賴性。美洲大蠊提取物作用于HSC-T6細(xì)胞24h、48h、72h時的IC50約為：6.086、3.497、2.410mg/mL。低濃度的美洲大蠊提取物對BRL-3A細(xì)胞無抑制作用,當(dāng)濃度4mg/mL時對BRL-3A細(xì)胞具有抑制作用,與對照組相比,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.01),隨著藥物濃度的增加,對BRL-3A細(xì)胞的增殖抑制率加大,也呈現(xiàn)明顯的時間與劑量依賴性。當(dāng)美洲大蠊提取物濃度為4mg/mL時,對BRL-3A細(xì)胞的抑制作用增加,4mg/mL為美洲大蠊提取物的最佳抑制濃度。 2流式結(jié)果顯示：不同濃度(2mg/mL、4mg/mL、6mg/mL)的美洲大蠊提取物干預(yù)HSC-T6細(xì)胞24小時,可促進HSC-T6細(xì)胞的凋亡,凋亡率呈劑量依賴性,當(dāng)濃度4mg/mL與對照組相比,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。流式細(xì)胞周期結(jié)果顯示：隨著藥物濃度的增加,G0/G1期細(xì)胞數(shù)所占比例逐漸增多(P0.05),S期細(xì)胞呈現(xiàn)下降的趨勢,而對G2/M期細(xì)胞無影響。 3免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色法顯示：正常HSC-T6細(xì)胞a-SMA及Ⅰ、Ⅲ型膠原呈強陽性表達(dá),用濃度為4mg/mL的美洲大蠊提取物干預(yù)24小時后,α-SMA及Ⅰ、Ⅲ型膠原的熒光量減少,表達(dá)減弱。 4Western blotting結(jié)果顯示：PDGF作用24小時后,HSC-T6細(xì)胞p-ERK1/2表達(dá)增加,用美洲大蠊提取物及ERK通路阻滯劑PD98059干預(yù)后ERK1/2的磷酸化水平明顯降低。 結(jié)論：1美洲大蠊提取物在體外可抑制HSC-T6細(xì)胞的增殖,其抑制作用具有一定時間和劑量依賴性,美洲大蠊提取物對HSC-T6的最佳抑制濃度為4mg/mL。 2美洲大蠊提取物可誘導(dǎo)HSC-T6細(xì)胞的凋亡,并能干擾細(xì)胞周期,使細(xì)胞生長阻滯于G0/G1期。 3美洲大蠊提取物能抑制a-SMA的表達(dá),并能抑制Ⅰ、Ⅲ型膠原的分泌。 4美洲大蠊提取物能夠抑制PDGF刺激的大鼠HSC的增殖,其抗肝纖維化機制與MAPK(ERK1/2)信號通路有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：美洲大蠊提取物 肝星狀細(xì)胞 細(xì)胞增殖 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞周期 血小板衍生 生長因子 細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶 1/2
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R575.2
【目錄】：

• 英文~.略詞5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-14
• 第一部分：美洲大蠊提取物對大鼠肝星狀細(xì)胞最佳抑制濃度的研究14-27
• 材料與方法14-18
• 結(jié)果18-25
• 討論25-27
• 第二部分：美洲大蠊提取物對大鼠肝星狀細(xì)胞細(xì)胞周期、凋亡以及對Ⅰ/Ⅲ膠原、α-SMA表達(dá)的影響27-39
• 材料與方法27-30
• 結(jié)果30-36
• 討論36-39
• 第三部分：美洲大蠊提取物對PDGF-BB刺激的大鼠肝星狀細(xì)胞增殖及ERK1/2磷酸化水平的影響39-52
• 材料與方法39-46
• 結(jié)果46-49
• 討論49-52
• 全文結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 綜述57-70
• 參考文獻(xiàn)66-70
• 攻讀期間發(fā)表論文70-71
• 致謝71

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：美洲大蠊提取物抗肝纖維化機理的體外研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：400112