目的：目前治療終末期肝病的最有效的方法是肝移植,但是由于供肝短缺、移植后免疫排斥等一系列問題,該療法無法在臨床廣泛展開,因此需要尋求新的治療方法。多項(xiàng)研究表明,干細(xì)胞移植能夠達(dá)到緩解和改善肝硬化病情的效果。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞由于取材方便、數(shù)量多等優(yōu)點(diǎn),成為干細(xì)胞理想的來源之一。本實(shí)驗(yàn)通過體外細(xì)胞非接觸式共培養(yǎng)體系來研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)治療肝硬化的機(jī)制。 方法：人BMSCs細(xì)胞株、人肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cells, HSCs)株(LX2)復(fù)蘇后傳代使用。四甲基偶氮哇藍(lán)(MTT)法測(cè)定兩種細(xì)胞培養(yǎng)1-9天的0D值,繪制生長(zhǎng)曲線。在6孔塑料細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)架上半透膜(transwell insert),建立上下雙層細(xì)胞共培養(yǎng)體系,上層接種BMSCs(1×105cells/mL)2mL,下層接種HSCs(1×105cells/mL)2mL,常規(guī)培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)分組：①對(duì)照組：HSCs單獨(dú)培養(yǎng)；②實(shí)驗(yàn)組：BMSCs與HSCs共培養(yǎng)。以上體系培養(yǎng)觀察24h和48h。于倒置相差顯微鏡下動(dòng)態(tài)觀察HSCs...

【文章頁(yè)數(shù)】：40 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 骨髓MSC在肝硬化中的研究進(jìn)展
    1.2 肝纖維化與TGF β/Smad信號(hào)傳導(dǎo)通路
第二章 材料與方法
    2.1 試劑與儀器
    2.2 溶液與試劑配制
    2.3 細(xì)胞復(fù)蘇
    2.4 細(xì)胞培養(yǎng)
    2.5 細(xì)胞凍存
    2.6 細(xì)胞計(jì)數(shù)
    2.7 實(shí)驗(yàn)分組
    2.8 MTT法測(cè)定BMSCs與HSCs的生長(zhǎng)曲線
    2.9 MTT法檢測(cè)HSCs的增殖
    2.10 流式細(xì)胞儀檢測(cè)HSCs凋亡
    2.11 HOECHST染色顯示細(xì)胞凋亡小體
    2.12 ELISA檢測(cè)TGFβ 1濃度
    2.13 HSCs總RNA提取和RT-PCR
    2.14 HSCs總蛋白提取和WESTERN BLOT檢測(cè)
    2.15 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
第三章 結(jié)果
    3.1 BMSCs和HSCs的培養(yǎng)情況
    3.2 BMSCs對(duì)HSCs增殖的影響
    3.3 BMSCs對(duì)HSCs凋亡的影響
    3.4 HOECHST染色結(jié)果
    3.5 上清液中TGF β1濃度的測(cè)定
    3.6 共培養(yǎng)后TGF β 1、smad 7 mRNA的表達(dá)
    3.7 共培養(yǎng)后TGF β 1、smad 7蛋白的表達(dá)
第四章 討論
第五章 研究展望
參考文獻(xiàn)
在校期間研究成果
致謝



本文編號(hào)：3950809