乙型肝炎病毒(Heptitis B virus,HBV)為嗜肝部分雙鏈DNA病毒,慢性HBV感染者約有25%-40%可能死于肝硬化和肝癌,對(duì)不同預(yù)后患者的宿主遺傳特征進(jìn)行研究,是目前關(guān)注的重點(diǎn)之一。HBV引起的肝臟病理?yè)p傷非病毒直接破壞,而是與宿主細(xì)胞免疫反應(yīng)密切相關(guān)。已有大量研究發(fā)現(xiàn),肝臟炎癥程度影響臨床轉(zhuǎn)歸,而慢性HBV感染者的肝臟炎癥程度除病毒因素之外,與宿主T細(xì)胞免疫功能密切相關(guān)。 研究表明,T淋巴細(xì)胞功能受到免疫調(diào)節(jié)因子的調(diào)控。其中PD-1、Bim、IL-7Rα等調(diào)節(jié)蛋白對(duì)T淋巴細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)是近年來(lái)研究的熱點(diǎn),它們?cè)贖BV感染慢性化中的作用已經(jīng)比較明確。PD-1(Programmed death 1,PD-1)基因PDCD1位于人類(lèi)基因組2q37.3,其基因表達(dá)蛋白PD-1是一類(lèi)能夠顯著抑制T細(xì)胞活化和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的CD28/B7家族成員;研究認(rèn)為PD-1過(guò)度表達(dá)是功能耗竭T細(xì)胞的特征,PD1/PD-L1通路可產(chǎn)生抑制信號(hào),影響T細(xì)胞清除病毒功能。Bim(Bcl2-interacting mediator,Bim)基因Bcl2l11位于人類(lèi)基因組2q13,是Bcl-2家族促...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1各目的基因PCR產(chǎn)物

隆以上目的基因（Bcl2l11、RNaseP引物來(lái)自Aays）PCR程序：預(yù)性94℃1min,退火94℃30s→in(30cycles)，72℃6minPCR程序:預(yù)性94℃1min,退火94℃30s→in(30cycles)，72℃....

圖2單克隆陽(yáng)性重組子PCR產(chǎn)物9重組質(zhì)粒抽提

含100ug/ml的氨芐青霉素LB培養(yǎng)液中，37℃，250rpm恒溫?fù)u床養(yǎng)菌液PCR鑒定，各取每管細(xì)菌菌液1ul為模板、用通用引物：M13F-GTTTCCCAGTCACAGC，M13R-CAGGAAACAGCTATGAC反應(yīng)體系如下:PremixEXTaq....

圖3各目的基因標(biāo)準(zhǔn)曲線

RnaseP：Y=3.2x+44.1R2=0.99；CD127：Y=-3.3x+49.0R2=0.99圖3各目的基因標(biāo)準(zhǔn)曲線11基因組DNA濃度測(cè)量OD260、OD260/280及將基因組DNA稀釋成5ng/ul11.1取出20ul原液,用AE....

圖1單克隆陽(yáng)性重組子PCR產(chǎn)物電泳

6.3反應(yīng)體系如下:PremixEXTaq2x10ul，M13F0.5ul，M13R0.5ul，菌液1ulddH208ul。6.4擴(kuò)增程序:95℃預(yù)變性5min，95℃變性5s，60℃退火31s，72℃延伸2min,7℃延伸6min,循環(huán)數(shù)....

本文編號(hào)：3911694