目的探討阿司匹林對酸和膽鹽誘導的Barrett食管(Barrett’s esophagus,BE)患者食管鱗狀細胞NF-κB活化和CDX2表達的影響。方法將合并BE的胃食管反流病(gastroesophageal reflux disease,GERD)患者的食管鱗狀細胞(NES-B細胞)和無合并BE的GERD患者的食管鱗狀細胞(NES-G細胞)暴露于酸和膽鹽中,分別加入和不加入阿司匹林。采用蛋白質(zhì)印跡法檢測細胞內(nèi)p65、p-p65、p50、IκB、p-IκB的蛋白表達;染色質(zhì)免疫沉淀法檢測p50和p65與CDX2啟動子DNA的結(jié)合活性;熒光素酶報告基因檢測NF-κB/p65的轉(zhuǎn)錄活性;免疫熒光技術(shù)檢測p65蛋白的核轉(zhuǎn)位情況;qRT-PCR法檢測CDX2 mRNA的表達。結(jié)果 NES-B和NES-G細胞在酸和膽鹽暴露后均能激活NF-κB,但與NES-G細胞相比,NES-B細胞表現(xiàn)出更高水平的IκB和p65磷酸化,以及更強的NF-κB轉(zhuǎn)錄活性。阿司匹林阻斷了酸和膽鹽誘導的NES-B細胞中IκB磷酸化、p65核轉(zhuǎn)位、CDX2啟動子激活和CDX2表達。結(jié)論阿司匹林對酸和膽鹽誘導的BE患者食管...

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【部分圖文】：

圖1酸、膽鹽和酸性膽鹽暴露后NES-B和NES-G細胞中胞質(zhì)和胞核p65和p50蛋白的表達水平變化

與未經(jīng)處理的對照組比較,NES-B細胞和NES-G細胞具有相似水平的細胞質(zhì)和細胞核p65和p50蛋白。用酸、膽鹽或兩者聯(lián)合處理NES-B細胞,可以消除p65和p50的胞漿水平,并導致細胞核中p50和p65的水平顯著升高。與此相反,用酸和膽鹽處理NES-G細胞,細胞質(zhì)中p50和p6....

圖2酸、膽鹽和酸性膽鹽暴露后NES-G細胞中p50或p65與CDX2啟動子的DNA結(jié)合活性

對p50進行免疫沉淀,然后對p65進行蛋白質(zhì)印跡,以證實NF-κB蛋白在NES-G和NES-B細胞系中形成異二聚體。結(jié)果顯示,未受刺激的兩種細胞均表現(xiàn)出p50/p65異二聚體形成。暴露于酸、膽鹽和酸性膽鹽后,NES-G細胞中的異二聚體形成量增加不明顯,而NES-B細胞中的異二聚體....

圖3酸、膽鹽和酸性膽鹽暴露后NES-G和NES-B細胞質(zhì)中p50/p65異二聚體形成情況

圖2酸、膽鹽和酸性膽鹽暴露后NES-G細胞中p50或p65與CDX2啟動子的DNA結(jié)合活性2.3酸和膽鹽對NES-B細胞和NES-G細胞NF-κB/p65的轉(zhuǎn)錄活性的影響

圖4酸、膽鹽和酸性膽鹽暴露后NES-G和NES-B細胞質(zhì)中與IκB和PKAc結(jié)合的p65蛋白水平的變化

暴露于酸、膽鹽和酸性膽鹽后,NES-B細胞的IκB(Ser32/36)和p65(Ser276)磷酸化水平明顯升高。在NES-G細胞中這些相同的暴露導致IκB的磷酸化只有較少的增加,而p65的磷酸化僅有極少的增加(見圖5)。利用NF-κB熒光素酶報告基因構(gòu)建體,發(fā)現(xiàn)酸性膽鹽處理....

本文編號：3896133