本文關(guān)鍵詞：大鼠肝硬化腹水模型的制備及其在白蛋白藥效學(xué)評(píng)價(jià)中的應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肝硬化是由一種或多種原因長(zhǎng)期、反復(fù)作用引起的慢性肝臟疾病，其病理學(xué)特征為：肝細(xì)胞變性、死亡，纖維結(jié)締組織增生明顯，典型的假小葉結(jié)構(gòu)廣泛形成。肝硬化腹水是肝硬化進(jìn)入失代償期的重要標(biāo)志之一，主要形成原因是肝細(xì)胞壞死，肝小葉結(jié)構(gòu)破壞、再生結(jié)節(jié)形成，肝臟合成蛋白的功能減退，引起蛋白分布改變和膠體滲透壓降低，導(dǎo)致血液成分漏入組織間隙，組織液回收減少而滲入腹腔形成腹水，提示疾病預(yù)后不良。 肝硬化動(dòng)物模型的制備是肝硬化發(fā)病機(jī)制研究及相關(guān)治療藥物研發(fā)的前提和基礎(chǔ)，構(gòu)建一種穩(wěn)定、可靠、重復(fù)性好、模擬性強(qiáng)的肝硬化動(dòng)物模型具有十分重要的意義。 常用于制備肝硬化動(dòng)物模型的方法有四氯化碳法、酒精法、免疫法、膽總管阻塞法和多因素復(fù)合法等，其中四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl_4）作為經(jīng)典的肝毒物質(zhì)廣泛用于肝硬化模型（cirrhosis model,CM）的制備。CCl_4制備肝硬化模型，一般用40~60%混合油溶液按照動(dòng)物體重進(jìn)行給藥，每周2次，12-15周可形成肝硬化，但是CCl_4肝毒性劇烈，單獨(dú)使用時(shí)死亡率達(dá)30%-40%。我們?cè)趥鹘y(tǒng)CCl_4法的基礎(chǔ)上進(jìn)行改良，優(yōu)化出CCl_4聯(lián)合苯巴比妥與酒精共同誘導(dǎo)的方法，規(guī)�；苽浯笫蟾斡不顾Ｐ�，為重組人血白蛋白（recombinant humanserum albumin,rHSA）和犬血白蛋白（plasma-derived canine serum albumin, pd-CSA）治療肝硬化腹水藥效學(xué)評(píng)價(jià)奠定基礎(chǔ)。 本研究主要在優(yōu)化制備大鼠肝硬化腹水模型的基礎(chǔ)上進(jìn)行白蛋白治療效果的評(píng)價(jià)，為此，主要進(jìn)行以下工作： （1）四氯化碳誘導(dǎo)大鼠肝硬化腹水模型的建立 為了優(yōu)化最佳肝硬化腹水模型的制備方法，，有效縮短建模周期、提高成模率、降低死亡率，分別運(yùn)用CCl_4法、CCl_4+苯巴比妥法、CCl_4+酒精法和CCl_4+苯巴比妥+酒精法對(duì)大鼠進(jìn)行誘導(dǎo)。正常對(duì)照組給予普通飲水，腹腔注射橄欖油；模型組分別給予不同飲用水處理，腹腔均注射CCl_4-橄欖油混合溶液，注射劑量均為2ml/kg wt，每周注射兩次，共12周。從給藥第4周開(kāi)始，隔1周對(duì)體重、腹圍、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase,AST）、白蛋白(albumin,ALB)和膠體滲透壓（colloidosmotic pressure,COP）進(jìn)行一次測(cè)定。 建模結(jié)束后，對(duì)各參數(shù)指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果顯示，各模型組大鼠的體重增長(zhǎng)緩慢，腹圍明顯增加，ALT和AST顯著升高，ALB和COP下降明顯，與對(duì)照組比較，具有顯著性差異。各模型組間參數(shù)指標(biāo)進(jìn)行比較，結(jié)果可以看出，CCl_4+苯巴比妥+酒精組ALT和AST最先出現(xiàn)高峰峰值，ALB和COP在第8周時(shí)的下降程度已達(dá)到成模要求，其他各組均晚于CCl_4+苯巴比妥+酒精組，說(shuō)明CCl_4+苯巴比妥+酒精組的方法對(duì)大鼠肝細(xì)胞損傷速度最快、最明顯，有效縮短建模時(shí)間。大鼠肝組織進(jìn)行病理學(xué)檢查可以看出，對(duì)照組大鼠肝細(xì)胞排列整齊，各模型組均有典型的肝硬化病理特征出現(xiàn)，肝細(xì)胞排列紊亂，結(jié)締組織增生，假小葉形成。比較各組的成模率和死亡率可以知道，CCl_4+苯巴比妥+酒精組成模率為80%，均高于其他各組，死亡率20%低于其他建模組。綜合分析結(jié)果表明，CCl_4聯(lián)合苯巴比妥與酒精的方法有效縮短建模周期，提高成模率，降低死亡率，利于肝硬化腹水模型的制備。 運(yùn)用CCl_4聯(lián)合苯巴比妥與酒精的方法規(guī)�；苽浯笫蟾斡不顾Ｐ�，從給藥第8周開(kāi)始，對(duì)出現(xiàn)腹水陽(yáng)性體征的大鼠進(jìn)行血液指標(biāo)的檢測(cè)，根據(jù)成模標(biāo)準(zhǔn)篩選出符合藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)的大鼠模型。建模結(jié)束后，共獲得90只符合成模標(biāo)準(zhǔn)的模型。用于rHSA和pd-CSA治療效果的評(píng)價(jià)。 （2） rHSA治療CCl_4誘導(dǎo)肝硬化腹水模型的效果評(píng)價(jià) rHSA是運(yùn)用基因重組技術(shù)制備而成的，具有和人血白蛋白相同的分子生物學(xué)特性和免疫特性。rHSA的研制避免了血漿來(lái)源白蛋白的一些局限性和弊端。 將56只本研究第一部分制備的大鼠模型隨機(jī)分為六組：陰性對(duì)照組大鼠給予10ml/kg wt模擬劑；不同劑量rHSA治療組，根據(jù)臨床上人血白蛋白的治療劑量，確定了重組人血白蛋白各實(shí)驗(yàn)組的給藥劑量分別為1.25ml/kg wt、2.5ml/kg wt、5ml/kg wt和10ml/kg wt，即0.25g/kg wt、0.5g/kg wt、1g/kg wt和2g/kg wt；陽(yáng)性對(duì)照組給予10ml/kg wt的pd-HSA，給藥兩次，每次給藥間隔18h，并且控制給藥速度。完成給藥后測(cè)定大鼠的腹圍、尿量、COP和ALB，并對(duì)各參數(shù)給藥前后變化量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，比較不同劑量的rHSA的治療效果。 結(jié)果表明，20%rHSA治療組大鼠的各項(xiàng)參數(shù)指標(biāo)變化量與陰性對(duì)照組比較，具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與20%pd-HSA比較，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；rHSA組大鼠隨著給藥劑量的增加，各參數(shù)指標(biāo)給藥前后變化量隨之增加，具有劑量依賴性。COP變化量與ALB的變化量呈正相關(guān)，腹圍變化量與COP和尿量呈負(fù)相關(guān)，說(shuō)明20%rHSA對(duì)大鼠肝硬化腹水有一定治療作用。 （3） pd-CSA治療CCl_4誘導(dǎo)肝硬化腹水模型的效果評(píng)價(jià) 為了評(píng)價(jià)犬血白蛋白治療肝硬化腹水的作用，隨機(jī)將篩選的本研究第一部分的30只大鼠模型分為六組：四個(gè)不同劑量的10%pd-CSA治療組，劑量分別為2ml/kg wt、4ml/kg wt、8ml/kg wt和16ml/kg wt，即0.2g/kg wt、0.4g/kg wt、0.8g/kgwt和1.6g/kg wt，陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組，分別給予16ml/kg wt生理鹽水和10%pd-HSA（1.6g/kg wt）共注射兩次，2h內(nèi)完成注射，每次給藥間隔18h。測(cè)量給藥前后大鼠的腹圍、尿量、COP和ALB的濃度，并對(duì)各參數(shù)指標(biāo)給藥前后變化量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，分析組間差異，明確pd-CSA的治療作用。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，10%pd-CSA不同劑量組在治療大鼠肝硬化腹水伴隨低蛋白血癥時(shí)，ALB濃度、COP水平和尿量增加的同時(shí)，腹圍相應(yīng)降低，各參數(shù)指標(biāo)給藥前后變化量與陰性對(duì)照組比較，具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與pd-HSA比較不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。膠體滲透壓給藥前后變化量與腹圍、白蛋白水平、尿量的變化呈良好的線性關(guān)系。說(shuō)明10%pd-CSA對(duì)大鼠肝硬化腹水有一點(diǎn)的治療作用。 rHSA和pd-CSA臨床前藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果已作為相應(yīng)藥物臨床試驗(yàn)申報(bào)材料，獲得專家認(rèn)可，為藥物注冊(cè)奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：四氯化碳 肝硬化 腹水 大鼠模型 重組人血白蛋白 犬血白蛋白
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R575.2
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 摘要6-9
• Abstract9-13
• 前言13-17
• 第一部分 四氯化碳誘導(dǎo)大鼠肝硬化腹水模型的建立17-30
• 1 材料與方法17-21
• 2 結(jié)果21-27
• 3 討論27-28
• 4 小結(jié)28-30
• 第二部分 rHSA 治療 CCl4誘導(dǎo)肝硬化腹水模型的效果評(píng)價(jià)30-41
• 1 材料與方法30-31
• 2 結(jié)果31-38
• 3 討論38-40
• 4 小結(jié)40-41
• 第三部分 pd-CSA 治療 CCl4誘導(dǎo)肝硬化腹水模型的效果評(píng)價(jià)41-51
• 1 材料與方法41-42
• 2 結(jié)果42-49
• 3 討論49-50
• 4 小結(jié)50-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-58
• 綜述58-64
• 參考文獻(xiàn)62-64
• 代表論著64-73
• 附錄73-74
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷74-75
• 致謝75

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：大鼠肝硬化腹水模型的制備及其在白蛋白藥效學(xué)評(píng)價(jià)中的應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：388234