發(fā)布時(shí)間：2017-05-23 10:10

  本文關(guān)鍵詞：Lipin-1在酒精性肝病發(fā)病機(jī)理中作用的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)是由于長(zhǎng)期大量飲酒導(dǎo)致肝細(xì)胞中毒性損傷,肝臟病理改變最初表現(xiàn)為肝細(xì)胞脂肪變性、肝炎、肝纖維化,最終導(dǎo)致肝硬化。酒精性脂肪肝(alcohol fatty liver disease,AFLD)是ALD的早期表現(xiàn),其發(fā)病機(jī)理主要為脂質(zhì)代謝紊亂導(dǎo)致大量沉積于肝細(xì)胞,從而引起肝細(xì)胞脂肪變性、炎細(xì)胞侵潤(rùn)及纖維化等一系列病變[2]。近幾年研究結(jié)果顯示lipin-1在脂質(zhì)代謝過(guò)程中具有促進(jìn)甘油三酯合成和脂肪酸氧化雙向調(diào)節(jié)作用。在細(xì)胞質(zhì)中,lipin-1作為Mg2+依賴(lài)性的磷脂酸磷酸酶(phosphatidic acid hosphohydrolase,PAP)酶促進(jìn)甘油三酯的合成;在細(xì)胞核中,lipin-1作為轉(zhuǎn)錄共刺激因子,一方面調(diào)節(jié)脂肪酸氧化;另一方面調(diào)控脂質(zhì)合成酶活性。在AFLD的肝細(xì)胞中,酒精通過(guò)AMPK SREBP-1-lipin-1信號(hào)通路上調(diào)lipin-1的總量表達(dá),通過(guò)SIRT1-SFRS10-Lpin1β/α軸上調(diào)Lpin1β/α的比例,lipin-1的高乙酰化/低類(lèi)泛素化其胞漿轉(zhuǎn)位,使細(xì)胞質(zhì)中的lipin-1β增多,細(xì)胞核中的lipin-1α減少。此外,酒精還可以直接促進(jìn)細(xì)胞質(zhì)中l(wèi)ipin-1β的PAP活性,抑制lipin-1α在細(xì)胞核中的作用。綜上,TG合成增多促進(jìn)了脂質(zhì)在肝細(xì)胞中聚集促進(jìn)了AFLD疾病的進(jìn)展。本研究通過(guò)酒精灌胃建立大鼠ALD模型,用病理學(xué)方法觀察組織基本病變情況,通過(guò)分子生物學(xué)方法探討lipin-1在酒精性肝病發(fā)病不同時(shí)間段的表達(dá)情況表達(dá)變化,為ALD防治提供一條新的思路。方法:選用雄性Wister大鼠50只,體重200士20g,正常飼養(yǎng)7天,隨機(jī)分出10只為正常對(duì)照組,其余40只用酒精灌胃,采用逐漸增加酒精濃度(濃度30%一60%,乙醇5-9g·kg-1·d-1)的方法,分別于第4周末隨機(jī)處死10只大鼠、8周末9只、12周末8只、16周末8只;處死后立即取出肝組織經(jīng)液氮速凍后置于-80℃冰箱。分別應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶連反應(yīng)(Real Time-quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-q PCR)和Western blot法檢測(cè)剪切因子SFRS10和lipin-1(核、漿)的m RNA和蛋白表達(dá)水平。多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。結(jié)果:1 RT-q PCR法檢測(cè)SFRS10、總lipin-1、lipin-1α及l(fā)ipin-1βm RNA的表達(dá)。1.1如Fig.1及Table 2所示,正常組大鼠肝組織中表達(dá)SFRS10較多,隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng),其表達(dá)成逐漸減少趨勢(shì),正常對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組,16周組與其它各組比較(0.64±0.04 VS 0.54±0.03,0.42±0.05,0.35±0.03,0.20±0.05;0.20±0.05 VS 0.64±0.04,0.54±0.03,0.42±0.05,0.35±0.03),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值為129.05,P0.01)。1.2如Fig.2及Table 2所示,正常組大鼠組織中總的lipin-1、細(xì)胞質(zhì)lipin-1β及細(xì)胞核lipin-1α表達(dá)均較少,隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng),總的lipin-1和lipin-1β表達(dá)量均逐漸增多,lipin-1α表達(dá)逐漸減少。正常對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組,16周組與其它各組比較(總lipin-1:0.20±0.03 VS 0.29±0.04,0.42±0.04,0.48±0.03,0.55±0.04;0.55±0.04 VS 0.20±0.03 0.29±0.04,0.42±0.04,0.48±0.03;lipin-1α:0.54±0.02 VS 0.47±0.03,0.32±0.03,0.23±0.03,0.18±0.02;0.18±0.02 VS 0.54±0.02,0.47±0.03,0.32±0.03,0.23±0.03;lipin-1β:0.11±0.02 VS 0.32±0.02,0.39±0.02,0.44±0.02,0.54±0.03;0.54±0.03 VS 0.11±0.02,0.32±0.02,0.39±0.02,0.44±0.02),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值分別為104.55,250.22,379.63,P0.01)。1.3如Fig.3及Table 3所示,隨著造模時(shí)間延長(zhǎng),lipin-1β/α比值逐漸升高,正常對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組,16周組與其它各組比較(0.19±0.02 VS 0.66±0.04,1.23±0.11,1.94±0.30,2.95±0.48;2.95±0.48 VS 0.19±0.02,0.66±0.04,1.23±0.11,1.94±0.30,2.95±0.48),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。2 Westren blot法檢測(cè)SFRS10、總lipin-1、lipin-1α及l(fā)ipin-1β的蛋白水平表達(dá)。2.1如Fig.5及Table 3所示,正常組大鼠肝組織中表達(dá)SFRS10較多,隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng),其表達(dá)量逐漸減少,正常對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組,16周組與其它各組比較(0.84±0.07 VS 0.58±0.07,0.42±0.09,0.28±0.05;0.28±0.05 VS 0.84±0.07,0.75±0.08,0.58±0.07,0.42±0.09),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值為66.53,P0.01),其中4周組與正常對(duì)照組相比(0.84±0.07 VS 0.75±0.08),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.2如Fig.6及Table 3所示,正常組大鼠組織中總的lipin-1、細(xì)胞質(zhì)lipin-1β及細(xì)胞核lipin-1α表達(dá)均較少,隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng),總的lipin-1和lipin-1β表達(dá)量均逐漸增多,lipin-1α表達(dá)逐漸減少。正常對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組,16周組與其它各組比較,總lipin-1:(0.25±0.06 VS 0.41±0.07,0.52±0.05,0.77±0.10,0.85±0.05;0.85±0.05 VS 0.25±0.06,0.41±0.07,0.52±0.05),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值為99.60,P0.01),其中16周與12周比較(0.85±0.05 VS 0.77±0.10),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);lipin-1α:(0.59±0.05 VS 0.44±0.05,0.31±0.03,0.17±0.02,0.10±0.03;0.10±0.03 VS 0.59±0.05,0.44±0.05,0.31±0.03,0.17±0.02),均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F值為177.14,P0.01);lipin-1β:0.13±0.03 VS 0.25±0.05,0.39±0.03,0.69±0.05,0.74±0.05;0.74±0.05 VS 0.13±0.03 VS 0.25±0.05,0.39±0.03),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值280.47,P0.01),其中16周與12周比較(0.74±0.05 VS 0.69±0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1酒精通過(guò)間接抑制SFRS10的表達(dá)從而影響lipin-1的表達(dá)及亞細(xì)胞定位,總的lipin-1及細(xì)胞質(zhì)中l(wèi)ipin-1β的表達(dá)逐漸增多,細(xì)胞核中的lipin-1α的表達(dá)逐漸減少。2 lipin-1的異常表達(dá)及重新分布導(dǎo)致肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂而發(fā)生脂質(zhì)沉積,這可能也是酒精性脂肪性肝病發(fā)生的重要機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：Lipin-1 lipin-1β lipin-1α 酒精性脂肪性肝病 酒精性肝病 發(fā)病機(jī)理
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R575
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫(xiě)10-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-20
• 結(jié)果20-22
• 附圖22-26
• 附表26-28
• 討論28-32
• 結(jié)論32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 綜述Lipin-1 在酒精性肝病發(fā)病機(jī)理中的作用35-47
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 致謝47-48
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷48-49

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 王瑋;周俊英;趙彩彥;王亞?wèn)|;;脂聯(lián)素及其受體在酒精性肝病大鼠肝組織中的表達(dá)下降[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2010年02期

  本文關(guān)鍵詞：Lipin-1在酒精性肝病發(fā)病機(jī)理中作用的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：387611