本文關鍵詞：內(nèi)毒素脂多糖在慢性酒精性胰腺炎巨噬細胞介導炎癥反應的調(diào)節(jié)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景和目的：單核/巨噬細胞通過分泌致炎因子化學趨化因子在天然免疫和獲得性免疫介導的炎癥過程發(fā)揮重要的作用，革蘭氏細菌內(nèi)毒素脂多糖(LPS)作用于Toll樣受體4(TLR4)激活巨噬細胞被認為在慢性酒精性胰腺炎(CAP)的發(fā)病過程中起著關鍵的角色。本研究的目的在于測定CAP患者血清的致炎因子和化學趨化因子及LPS在人類巨噬細胞分泌炎癥因子的作用，進而評價巨噬細胞激活在CAP發(fā)病的作用。 方法：本研究收集了我院體檢中心25名健康成年人的血液標本和24例慢性酒精性胰腺炎(chronic alcoholic pancreatitis, CAP)患者于發(fā)病48小時內(nèi)的血液標本。采用分光光度法檢測血漿內(nèi)毒素脂多糖(LPS)水平及化學趨化因子MCP-1、MIP-1α、Rantes及纖維源性因子TGF-β1的水平。采用淋巴細胞分離液分離人末梢血單核細胞，將其鋪板于六孔板中，用含10%FBSRPMI/1640培養(yǎng)基培養(yǎng)。將貼壁的單核細胞繼續(xù)用上述培養(yǎng)基培養(yǎng)，并加入10ng/ml的粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)，6天后獲得組織巨噬細胞表型。將其分為正常組，酒精組，LPS組，酒精+LPS組，，繼續(xù)培養(yǎng)24小時。采用免疫組化方法檢測巨噬細胞標志F4/80和CD14抗原。采用ELISA法分別檢測血清和巨噬細胞培養(yǎng)上清MCP-1、MIP-1α、Rantes、TGF-β1水平。 結(jié)果：本研究結(jié)果顯示：24例CAP患者中，15例(62%)伴有內(nèi)毒素血癥（血漿LPS水平＞正常值限2倍）。血清化學趨化因子MCP-1、MIP-1α、Rantes與纖維源性因子TGF-β1在伴有內(nèi)毒素血癥CAP患者的水平明顯高于無內(nèi)毒素血癥的患者，分別升高3.7倍、4.1倍、1.7倍和1.3倍。體外實驗結(jié)果顯示單核細胞經(jīng)GM-CSF6天的誘導，表達F4/80和CD14，98%以上轉(zhuǎn)化為巨噬細胞。酒精加LPS處理巨噬細胞后其上清MCP-1、MIP-1α、Rantes及TGF-β1較對照組，單純酒精組，單純LPS組明顯升高（P＜0.01）。酒精加LPS組巨噬細胞培養(yǎng)上清MCP-1、MIP-1α、Rantes及TGF-β1水平分別是單純酒精組水平的1.7倍、2.8倍、3.4倍和1.5倍。 結(jié)論：本研究成功建立了巨噬細胞體外培養(yǎng)的內(nèi)毒素和酒精模型，顯示了LPS誘導巨噬細胞產(chǎn)生化學趨化因子及纖維源性因子，由此推測其在CAP炎癥及纖維化發(fā)病過程中發(fā)揮作用。
【關鍵詞】：慢性胰腺炎 脂多糖 TLR4信號通路 巨噬細胞 ELISA
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R576
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 英文縮略詞10-12
• 第1章 緒論12-13
• 第2章 綜述 內(nèi)毒素脂多糖在慢性酒精性胰腺炎巨噬細胞13-21
• 2.1 TLR4 與其配體的結(jié)構(gòu)特征、分布及功能13-16
• 2.1.1 TLR4 與其配體的結(jié)構(gòu)特征及分布13-15
• 2.1.2 LPS-TLR4 的信號傳導通路15-16
• 2.2 LPS-TLR4 信號通路與胰腺炎16-18
• 2.2.1 TLR4 在急性酒精性胰腺炎的作用16-17
• 2.2.2 TLR4 在慢性酒精性胰腺炎的作用17-18
• 2.3 胰腺炎癥、纖維化的細胞學基礎18-20
• 2.3.1 胰腺星狀細胞在胰腺炎癥、纖維化的作用18
• 2.3.2 巨噬細胞在胰腺炎癥、纖維化的調(diào)節(jié)作用18-20
• 2.4 前景與展望20-21
• 第3章 實驗材料與方法21-36
• 3.1 實驗試劑21-22
• 3.2 實驗儀器22-23
• 3.3 實驗方法23-35
• 3.3.1 病例選擇及標本采集23-24
• 3.3.2 光度法血漿 LPS 濃度檢測24
• 3.3.3 ELISA 檢測人血清 MCP-1、MIP-1α、Rantes 及 TGF-β124-26
• 3.3.4 人末梢血單個細胞的分離與培養(yǎng)方法26-27
• 3.3.5 人巨噬細胞的識別27-34
• 3.3.6 LPS 對巨噬細胞 TLR4 和 CD14 表達影響的檢測方法：34
• 3.3.7 ELISA 檢測酒精及 LPS 作用下巨噬細胞合成和分泌細胞因子34-35
• 3.7 統(tǒng)計學處理35-36
• 第4章 實驗結(jié)果36-41
• 4.1 CAP 患者血漿中 LPS 及細胞因子水平變化36
• 4.2 伴有內(nèi)毒素血癥的 CAP 患者血漿 LPS 與血清細胞因子相關性分析36-37
• 4.3 巨噬細胞的轉(zhuǎn)化、識別及 LPS 對其影響37-41
• 第5章 討論41-45
• 第6章 結(jié)論45-46
• 參考文獻46-52
• 作者簡介及在學期間所取得的科研成果52-53
• 致謝53

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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  本文關鍵詞：內(nèi)毒素脂多糖在慢性酒精性胰腺炎巨噬細胞介導炎癥反應的調(diào)節(jié)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：387094